检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2009年第4期31卷 325-328页

作者：宋帅林彤邵军军丛国正独军政高闪电常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室/国家口蹄疫参考实验室兰州730046

利用O型口蹄疫病毒(FMDV)免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0细胞进行融合,经间接ELISA方法筛选和7次亚克隆后获得2株能稳定分泌单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。经间接ELISA检测,2株杂交瘤细胞株(3E1、7E6)的腹水效价分别为1∶25600、1... 详细信息

利用O型口蹄疫病毒(FMDV)免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0细胞进行融合,经间接ELISA方法筛选和7次亚克隆后获得2株能稳定分泌单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。经间接ELISA检测,2株杂交瘤细胞株(3E1、7E6)的腹水效价分别为1∶25600、1∶102400。间接免疫荧光试验和特异性试验表明2株McAb可与不同株的O型FMDV反应,而不与其他血清型的FMDV反应。Western blot和叠加试验表明2株单抗可识别O型FMDV结构蛋白VP1上的同一个抗原表位。此特异性McAb的获得将为O型FMDV疫苗的研制和诊断方法的建立奠定基础。

关键词： O型口蹄疫病毒单克隆抗体间接ELISA

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副猪嗜血杆菌对部分常用实验动物的致病性试验

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畜牧兽医学报 2009年第1期40卷 138-141页

作者：高鹏程储岳峰赵萍贺英逯忠新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点实验室兰州730046

为筛选对副猪嗜血杆菌易感的实验动物，对部分常用的不同品种、不同品系实验动物进行了副猪嗜血杆菌致病性试验。用副猪嗜血杆菌血清型5型标准株（Strain Nagasaki）培养物，以2×10^8-2×10^10CFU的接种量，通过腹腔感染SPF级... 详细信息

为筛选对副猪嗜血杆菌易感的实验动物，对部分常用的不同品种、不同品系实验动物进行了副猪嗜血杆菌致病性试验。用副猪嗜血杆菌血清型5型标准株（Strain Nagasaki）培养物，以2×10^8-2×10^10CFU的接种量，通过腹腔感染SPF级小鼠、大鼠、金黄地鼠、豚鼠以及清洁级豚鼠和兔。结果当接种量达到2×10^9CFU时，SPF豚鼠、清洁级豚鼠和SPF昆明小鼠出现死亡，在死亡豚鼠观察到典型的副猪嗜血杆菌病病理变化，而在死亡小鼠未见。其它各实验动物在上述剂量范围内均未发病或死亡，感染7d后剖检也未见任何异常。对死亡豚鼠和小鼠的各个组织器官进行副猪嗜血杆菌分离，结果在豚鼠的大脑、心血、肺、肝和腹水中分离到了副猪嗜血杆菌。提示豚鼠对副猪嗜血杆菌易感，可以做为建立副猪嗜血杆菌感染动物模型的候选实验动物。

关键词：副猪嗜血杆菌实验动物致病性血清型5型标准株

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整联蛋白受体介导的病毒感染作用

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中国人兽共患病学报 2009年第4期25卷 379-382页

作者：赵建勇独军正高闪电林彤邵军军丛国政伏小平常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

整联蛋白是一类由α亚基与β亚基以非共价键结合形成的αβ异源二聚体复合物,是一类重要的具有多种生物学功能的细胞膜黏附因子受体。主要介导细胞粘附和信号传导,并参与细胞的多种生理功能,如细胞的生长、发育、分化、凋亡等。整联蛋... 详细信息

整联蛋白是一类由α亚基与β亚基以非共价键结合形成的αβ异源二聚体复合物,是一类重要的具有多种生物学功能的细胞膜黏附因子受体。主要介导细胞粘附和信号传导,并参与细胞的多种生理功能,如细胞的生长、发育、分化、凋亡等。整联蛋白有多种配体其主要包括:细胞间配体,如细胞间黏附分子;细胞外基质配体,如粘连蛋白;血管细胞黏附配体,如血栓黏附分子-1。整联蛋白能识别多种病毒表面上特定的“精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp,RGD)序列”,在病毒吸附或感染细胞过程中具有重要的作用,其可作为腺病毒属、疱疹病毒属、微小核糖核酸病毒科、汉坦病毒属及呼肠孤病毒科等科属中的多种病毒的受体。[第一段]

关键词：整联蛋白受体介导病毒表面感染作用细胞间黏附分子微小核糖核酸病毒黏附分子-1 呼肠孤病毒科

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高致病性猪蓝耳病病毒GS/LZh/07株的分离、鉴定及其非结构蛋白Nsp2基因特性分析

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畜牧兽医学报 2009年第3期40卷 438-443页

作者：吴锦艳田宏尚佑军刘湘涛郑海学靳野尹双辉满自萍赵娜蔡承茹蔺芳谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

将高致病性猪蓝耳病疑似病料接种Marc145细胞,发现该病料可使Marc145细胞产生CPE,应用猪蓝耳病病原检测试剂盒从细胞培养物中检测到PRRSV,命名为Gs/Lzh/07株。同时应用RT-PCR方法扩增该分离毒株的非结构蛋白Nsp2基因,并进行了序列测定,... 详细信息

将高致病性猪蓝耳病疑似病料接种Marc145细胞,发现该病料可使Marc145细胞产生CPE,应用猪蓝耳病病原检测试剂盒从细胞培养物中检测到PRRSV,命名为Gs/Lzh/07株。同时应用RT-PCR方法扩增该分离毒株的非结构蛋白Nsp2基因,并进行了序列测定,发现所扩增到的Nsp2基因有90个核苷酸的缺失。序列比对结果表明:该分离病毒Nsp2基因与经典毒株PRRSV-ch-1a核苷酸同源性为83.0%,氨基酸同源性为72.7%;与高致病性变异毒株NX和SD核苷酸同源性为95.5%,氨基酸同源性为90.9%,可见该毒来源于2006-2007年流行毒株,说明高致病性猪蓝耳病变异病毒已经在甘肃省存在。该毒株的成功分离为高致病性猪蓝耳病流行病学调查分析提供数据,也为预防控制该病积累了资料。Nsp2的特性分析为揭示高致病性猪蓝耳病PRRSV在甘肃省的流行特点提供参考。

关键词：高致病性猪蓝耳病病毒分离鉴定 Nsp2 特性分析

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副猪嗜血杆菌感染豚鼠试验及在其体内的分布

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畜牧兽医学报 2009年第9期40卷 1376-1382页

作者：高鹏程储岳峰赵萍贺英逯忠新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点实验室农业部草食动物疫病重点实验室兰州730046

为了评估副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis）对豚鼠的毒力以及在豚鼠组织器官的分布,作者采用改进的寇氏法测定了***血清5型标准株对豚鼠的LD50,以1 LD50剂量经鼻腔、气管、肺、腹腔、肌肉和皮下接种感染豚鼠,比较不同途径感染***对... 详细信息

为了评估副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis）对豚鼠的毒力以及在豚鼠组织器官的分布,作者采用改进的寇氏法测定了***血清5型标准株对豚鼠的LD50,以1 LD50剂量经鼻腔、气管、肺、腹腔、肌肉和皮下接种感染豚鼠,比较不同途径感染***对豚鼠致病性的差异;以1 LD50剂量气管接种豚鼠,接种后在不同时间取豚鼠的脑、心、肝、肺、脾和肾组织,制作石蜡切片,用免疫组化技术检测***在豚鼠上述组织的分布。结果显示该***血清5型标准株的LD50为1.33×10^9CFU,LD50的95%可信限范围为1.35×10^9-1.30×10^9CFU;感染试验结果显示,气管、肺和腹腔3个接种途径试验组豚鼠出现了4/8、2/8和5/8的死亡;在气管感染豚鼠6 h后,首先在肺脏组织呈现阳性结果,在感染8 h后,上述组织中都出现了阳性结果。结果表明气管、肺、腹腔和肌肉4个途径都可以使***对豚鼠致病,免疫组化检测并结合细菌分离结果表明***感染后能侵染肺、心、肝、脾和肾组织,并能突破血-脑屏障而侵染脑组织。

关键词：副猪嗜血杆菌感染 LD50 免疫组化

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口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白αvβ6的细胞定位及组织分布

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畜牧兽医学报 2009年第4期40卷 533-537页

作者：赵建勇常惠芸独军政高闪电宋帅伏小平谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

利用pcDNA3.1(+)-β6p真核表达载体稳定转染CHOK1细胞,间接免疫荧光法(IFA)检测整联蛋白αvβ6在转染细胞中的表达分布。以间接免疫组化法(IHA)检测整联蛋白αvβ6在健康猪舌、唇、气管等组织的表达分布。采用抗猪源整联蛋白β6亚基的... 详细信息

利用pcDNA3.1(+)-β6p真核表达载体稳定转染CHOK1细胞,间接免疫荧光法(IFA)检测整联蛋白αvβ6在转染细胞中的表达分布。以间接免疫组化法(IHA)检测整联蛋白αvβ6在健康猪舌、唇、气管等组织的表达分布。采用抗猪源整联蛋白β6亚基的单克隆抗体作为一抗,FITC标记山羊抗小鼠IgG、辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG分别作为二抗。结果表明,pcDNA3.1(+)-β6p真核表达载体稳定转染的CHOK1细胞的细胞膜及细胞质内可见致密的绿色荧光(IFA),猪舌、唇、气管等组织细胞的细胞膜及细胞质内均出现了棕黄色的特异阳性反应物,表明整联蛋白αvβ6受体广泛分布于猪体的器官组织细胞中,为深入研究整联蛋白αvβ6在口蹄疫病毒感染过程中的作用奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒受体整联蛋白细胞定位组织分布

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O型口蹄疫病毒各编码基因及其产物变异率的分析

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华北农学报 2009年第1期24卷 60-63页

作者：周建华丛国正常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

将从Genbank中提出的20株O型FMDV的全基因组分割成12个编码区域,即Lab、VP4、VP2、VP3、VP1、2A、2B、2C、3A、3B、3C和3D。通过方差分析,12个编码序列的相对变异率之间无差异(P>0.05);而这12种编码序列所对应的氨基酸相对突变率之... 详细信息

将从Genbank中提出的20株O型FMDV的全基因组分割成12个编码区域,即Lab、VP4、VP2、VP3、VP1、2A、2B、2C、3A、3B、3C和3D。通过方差分析,12个编码序列的相对变异率之间无差异(P>0.05);而这12种编码序列所对应的氨基酸相对突变率之间差异显著(P<0.01)。利用Duncan法对这12种氨基酸序列相对突变率进行多重比较,发现3A蛋白的氨基酸相对突变率比其余11种蛋白的差异都显著(P<0.05);VP2、Lpro的氨基酸相对突变率与VP4、2A、2C、3Cpro、3Dpol之间存在差异(P<0.05);而VP4、2A、2C、3Cpro、3Dpol之间无差异。结果显示,O型FMDV自身RNA的转录和机体对FMDV施加的免疫压力不是造成FMDV变异的主要原因,而各种病毒产物的功能选择压力才是FMDV分子进化的主要原因。

关键词：口蹄疫病毒相对变异率方差分析 Duncan法

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一种高效、稳定的可溶性原核表达载体的构建及应用

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华北农学报 2009年第6期24卷 46-49页

作者：高闪电常惠芸独军政丛国正邵军军林彤中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

以O型口蹄疫病毒结构蛋白VP1基因重组克隆载体pGEM-OVP1为模板,设计表达引物,经PCR扩增获得上游带有PelB信号肽编码序列的VP1 C端编码区,将其克隆至该表达载体pET-30a(+)中,构建了可溶性原核表达载体pET-30a-PelB-VP1C。将VP1全长编码... 详细信息

以O型口蹄疫病毒结构蛋白VP1基因重组克隆载体pGEM-OVP1为模板,设计表达引物,经PCR扩增获得上游带有PelB信号肽编码序列的VP1 C端编码区,将其克隆至该表达载体pET-30a(+)中,构建了可溶性原核表达载体pET-30a-PelB-VP1C。将VP1全长编码区替换VP1C,获得重组原核表达载体pET-30a-PelB-VP1。将两种重组质粒分别转化大肠杆菌工程菌株BL21-(DE3)-plysS,经IPTG诱导表达,实现了VP1全长及其C端的可溶性表达,以金属离子螯合层析法分别对表达的VP1及其C端融合蛋白进行纯化,SDS-PAGE显示纯化的目的蛋白分别在32 ku和20 ku处有单一目的条带,具有较高的纯度。Western blot分析,VP1蛋白及其C端均可与牛O型口蹄疫病毒阳性血清反应。对重组菌株的连续传代实验证实了该可溶性表达载体的遗传稳定性,显示了该可溶性原核表达载体在蛋白可溶性表达中的应用价值。

关键词：口蹄疫病毒原核表达可溶性信号肽

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口蹄疫新型疫苗研究进展

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微生物学通报 2009年第11期36卷 1750-1757页

作者：曹轶梅卢曾军田飞鹏刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046 农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

口蹄疫(FMD)是一种严重威胁畜牧业发展的重要传染病,目前世界上许多国家和地区都有该病的流行与发生。其控制措施主要是疫苗免疫,虽然传统疫苗在该病的防控中起了重要的作用,但也存在着诸多的缺点。因此研制新型的FMD疫苗是今后的发展... 详细信息

口蹄疫(FMD)是一种严重威胁畜牧业发展的重要传染病,目前世界上许多国家和地区都有该病的流行与发生。其控制措施主要是疫苗免疫,虽然传统疫苗在该病的防控中起了重要的作用,但也存在着诸多的缺点。因此研制新型的FMD疫苗是今后的发展方向。本文结合实验室在FMD新型疫苗研究方面所开展的探索性研究工作,综述了国内外在FMD基因工程弱毒苗或灭活苗、蛋白质和合成肽疫苗、空衣壳疫苗、细胞因子增强型疫苗等研究领域所取得的进展。

关键词：口蹄疫传统疫苗新型疫苗

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NASBA(依赖核酸序列的扩增)技术及其在病毒检测中的应用

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中国生物工程杂志 2009年第1期29卷 80-85页

作者：高闪电常惠芸丛国正独军政邵军军林彤中国农业科学院兰州兽医研究所国家VI蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

NASBA（nucleic acid sequence—based amplification）即依赖核酸序列的扩增技术，是一种扩增RNA的新技术，是由一对引物介导的、连续均一的、体外特异核苷酸序列等温扩增的酶促反应过程。反应在42％进行，可以在2h左右将模板RNA扩增... 详细信息

NASBA（nucleic acid sequence—based amplification）即依赖核酸序列的扩增技术，是一种扩增RNA的新技术，是由一对引物介导的、连续均一的、体外特异核苷酸序列等温扩增的酶促反应过程。反应在42％进行，可以在2h左右将模板RNA扩增约10卧佗倍，不需特殊的仪器。NASBA已经广泛应用于细菌、病毒等多种病原微生物的检测，就NASBA的技术原理及其在病毒检测中的应用作一综述。

关键词：依赖核酸序列的扩增(NASBA) 恒温扩增病毒检测

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