检索结果-内蒙古大学图书馆

华北农学报 2009年第B12期24卷 225-228页

作者：田宏吴锦艳尹双辉尚佑军郑海学刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点实验室甘肃兰州730046

鉴于猪瘟病毒不能使家兔发病,但能使之产生免疫原性,而且猪瘟兔化弱度苗能在兔体的定型热反应。本研究选用家兔为试验模型,将自制的亚单位疫苗用弗氏佐剂乳化后免疫家兔,持续一定的免疫周期后,用猪瘟活疫苗(II)攻击免疫及对照试验家兔... 详细信息

鉴于猪瘟病毒不能使家兔发病,但能使之产生免疫原性,而且猪瘟兔化弱度苗能在兔体的定型热反应。本研究选用家兔为试验模型,将自制的亚单位疫苗用弗氏佐剂乳化后免疫家兔,持续一定的免疫周期后,用猪瘟活疫苗(II)攻击免疫及对照试验家兔。根据T淋巴细胞增殖试验、阻断ELISA及攻毒保护试验对所制备的抗原进行了全面的评价。结果表明,该免疫原具有良好的免疫原性,而且能保护免疫家兔为4/4。可以进行下一步的开发和利用价值。以期该疫苗能为猪瘟的防治做出贡献。

关键词：猪瘟病毒亚单位疫苗 E2蛋白免疫试验

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猪源口蹄疫病毒China99/S株基因组全长cDNA的构建及其感染性鉴定

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畜牧兽医学报 2009年第2期40卷 213-220页

作者：常艳燕郑海学靳野王光祥尚佑军刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046 广东省农业科学院兽医研究所广州510640

提取猪源FMDV China99/S组织样品总RNA,利用设计的引物对,分段进行扩增,获得覆盖全基因组的4个重叠片段(A、B、C和E),然后用BsmBⅠ/XmaⅠ、XmaⅠ/BamHⅠ、BamHⅠ/NotⅠ、HpaⅠ/KpnⅠ分别双酶切A、B、E、C,并纯化回收,依次定向克隆到带... 详细信息

提取猪源FMDV China99/S组织样品总RNA,利用设计的引物对,分段进行扩增,获得覆盖全基因组的4个重叠片段(A、B、C和E),然后用BsmBⅠ/XmaⅠ、XmaⅠ/BamHⅠ、BamHⅠ/NotⅠ、HpaⅠ/KpnⅠ分别双酶切A、B、E、C,并纯化回收,依次定向克隆到带有聚合酶Ⅰ的pPⅠcDNA3.1(+)转录载体内,最终得到重组质粒pPⅠ-FMDVcDNA3.1(+);然后对该质粒进行序列测定。结果表明,China99/S株基因组全基因组序列长8 116 nt(含Poly(C)和Poly(A)片段),其中5′NCR长1 064 nt,蛋白编码区核苷酸序列为6 318 nt,编码1个由2 106个氨基酸组成的聚合蛋白,3′NCR长93 nt,其后是含有38个A碱基的Poly(A)尾。其中5′NCR引入含41个C的Poly(C)片段。将pPⅠFMDVcDNA3.1(+)用脂质体转染法导入BHK-21细胞,传代培养,可以观察到典型的FMDV致细胞病变效应。利用CPE、电镜、动物试验、RT-PCR和序列测定进行检测,结果表明,从该系统中成功拯救出具有感染性的猪源FMDV China99/S株重组病毒。

关键词：口蹄疫病毒全长cDNA克隆 Poly(C) 反向遗传学

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PLGA纳米/微球作为核酸载体的研究进展

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微生物学通报 2009年第12期36卷 1901-1908页

作者：王刚潘丽张永光中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

生物可降解材料[poly(lactide-co-glycolide acid),PLGA]颗粒在持续释放和定位递送各种药剂包括核酸有很大的研究和应用价值。本文综述了PLGA作为核酸载体的制备及其用于基因载体和疫苗佐剂的研究。

关键词： PLGA DNA 基因治疗疫苗佐剂

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口蹄疫病毒单链抗体基因的构建及其推导蛋白三维结构的分子模拟

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中国兽医科学 2009年第12期39卷 1035-1040页

作者：刘涛周广青马军武林密祁淑芸冯霞马明仁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

用口蹄疫病毒(FMDV)Asia1/JS/China/2005株灭活抗原免疫家兔,从兔脾细胞中提取RNA作为模板,通过PCR及重叠PCR方法构建出FMDV的单链抗体基因。测序结果显示,序列中有重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)基因,经Blast比较,发现VH、VL的相似性... 详细信息

用口蹄疫病毒(FMDV)Asia1/JS/China/2005株灭活抗原免疫家兔,从兔脾细胞中提取RNA作为模板,通过PCR及重叠PCR方法构建出FMDV的单链抗体基因。测序结果显示,序列中有重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)基因,经Blast比较,发现VH、VL的相似性最高分别可达81.0%和93.0%,且在序列中有连接VH及VL的柔性接头(Gly4Ser)3。用EXPASY软件包预测了推导蛋白的特性。运用Swiss-pdb viewer软件的SWISS-Model处理器对构建的单链抗体基因推导的蛋白序列进行了三维结构的分子模拟。拉马钱德兰图证明,所模拟的单链抗体的三维结构较为合理。

关键词：口蹄疫病毒单链抗体重叠聚合酶链反应序列分析三维结构分子模拟

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FMDV Asia1/HeB病毒株结构蛋白基因的克隆测序及B细胞抗原表位预测

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华北农学报 2009年第4期24卷 57-63页

作者：张中旺张永光王永录潘丽方玉珍刘力宽蒋守田吕建亮周鹏张昱张淑刚杜进鑫李正丰中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

对口蹄疫病毒Asia1/HeB株P1结构蛋白基因进行了扩增、克隆及序列测定。采用DNAStar Protean软件对P1蛋白的二级结构、可塑性、亲水性、表面可及性及抗原指数等参数进行分析,综合预测其B细胞表位分布。结果表明,FMDV Asia I/HeB株P1基因... 详细信息

对口蹄疫病毒Asia1/HeB株P1结构蛋白基因进行了扩增、克隆及序列测定。采用DNAStar Protean软件对P1蛋白的二级结构、可塑性、亲水性、表面可及性及抗原指数等参数进行分析,综合预测其B细胞表位分布。结果表明,FMDV Asia I/HeB株P1基因长2199 bp,包含完整的开放阅读框,编码733个氨基酸,其中VP1长633 bp,编码211个氨基酸,VP2长654 bp,编码218个氨基酸,VP3长657 bp,编码219个氨基酸,VP4长255 bp,编码85个氨基酸。P1结构蛋白的二级结构较为复杂,含有较多的β片层结构和转角结构,VP1、VP2和VP3上均有多个区域为B细胞优势表位,VP4上也有少量的潜在B细胞表位。与已鉴定的B细胞表位相比较,该方法预测的结果有较高的准确度。为试验确定FMDV AsiaI/HeB株P1结构蛋白的B细胞表位和反向疫苗学设计提供了理论基础。

关键词：口蹄疫病毒结构蛋白测序 B细胞表位

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口蹄疫病毒非结构蛋白定量检测ELISA方法的建立

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中国生物工程杂志 2009年第11期29卷 70-73页

作者：李永亮卢曾军杨苏珍田美娜谢宝霞刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室郑州450002

目的:利用口蹄疫病毒非结构蛋白3B单克隆抗体建立液相阻断ELISA检测方法,进行定量检测口蹄疫病毒培养液中的非结构蛋白含量。方法:首先将工作浓度的3B单抗与待测病毒培养液过夜结合反应,然后取结合液转移至用3B蛋白包被好的酶标板上,用... 详细信息

目的:利用口蹄疫病毒非结构蛋白3B单克隆抗体建立液相阻断ELISA检测方法,进行定量检测口蹄疫病毒培养液中的非结构蛋白含量。方法:首先将工作浓度的3B单抗与待测病毒培养液过夜结合反应,然后取结合液转移至用3B蛋白包被好的酶标板上,用标准3B蛋白做12个梯度做对照,同时设阴性对照和空白对照。通过回归分析算出口蹄疫病毒培养液中的非结构蛋白3B含量。结果:回归曲线呈典型的S形,符合4参数logit曲线拟合,相关系数R=0.99,检测范围为5～1500ng/ml,半数抑制浓度(Ic50)为130ng/ml。结论:该方法能特异、敏感的检测到病毒培养液中的非结构蛋白3B成分,并进行定量。

关键词：口蹄疫病毒单克隆抗体非结构蛋白定量ELISA

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Asia1型口蹄疫病毒分离株P1基因的原核表达及其多克隆抗体的制备

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中国人兽共患病学报 2009年第10期25卷 973-976页

作者：张中旺张永光王永录潘丽张昱中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

目的原核表达口蹄疫病毒Asia1/HeB株衣壳蛋白前体P1基因并纯化。制备其兔多克隆抗体并进行鉴定。方法从重组克隆载体pGEM-P1中扩增编码P1区结构蛋白的基因片段。并克隆入原核表达载体pET-28a(+)中。原核表达与蛋白纯化后,免疫新西兰兔,... 详细信息

目的原核表达口蹄疫病毒Asia1/HeB株衣壳蛋白前体P1基因并纯化。制备其兔多克隆抗体并进行鉴定。方法从重组克隆载体pGEM-P1中扩增编码P1区结构蛋白的基因片段。并克隆入原核表达载体pET-28a(+)中。原核表达与蛋白纯化后,免疫新西兰兔,制备P1蛋白抗血清。抗体效价及特异性检测分别用间接ELISA和Westernblot法鉴定。结果在大肠杆菌中成功表达了分子量约为80.475kDa的P1蛋白。ELISA法检测抗血清的效价可达到1∶25600,Westernblot分析抗血清可与原核表达的P1蛋白特异性结合。结论在大肠杆菌中成功表达了口蹄疫病毒Asia1/HeB株衣壳蛋白前体,并制备了P1衣壳蛋白前体的抗血清,为进一步研究P1区结构蛋白的结构、功能以及抗原表位的确定奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒衣壳蛋白前体P1 原核表达多克隆抗体

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生物传感器及其在兽医临床检测中的应用

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中国人兽共患病学报 2009年第2期25卷 183-187页

作者：张昱王永录中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

生物传感器技术是现代科技的前沿技术,是一种集现代生物技术与电子技术为一体的高科技产品,因其具有选择性好、灵敏度高、分析速度快、成本低、能在复杂环境中进行在线连续监测,特别是高度自动化、微型化与集成化等特点,从而获得蓬勃而... 详细信息

生物传感器技术是现代科技的前沿技术,是一种集现代生物技术与电子技术为一体的高科技产品,因其具有选择性好、灵敏度高、分析速度快、成本低、能在复杂环境中进行在线连续监测,特别是高度自动化、微型化与集成化等特点,从而获得蓬勃而迅速的发展,并在国民经济的各个领域如临床检测、生物医学、环境监测、食品、制药等方面得以广泛的应用。生物传感器的研究开发,[第一段]

关键词：生物传感器临床检测兽医现代生物技术环境监测传感器技术高科技产品现代科技

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豚鼠副猪嗜血杆菌感染动物模型的建立

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中国预防兽医学报 2009年第12期31卷 991-993页

作者：高鹏程储岳峰赵萍贺英逯忠新中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点实验室农业部草食动物疫病重点实验室甘肃兰州730046

为建立副猪嗜血杆菌(Hps)的感染动物模型,本试验用Hps血清5型标准菌株(Nagasaki),以2.0×109CFU剂量腹腔感染豚鼠,观察豚鼠发病及死亡情况。取死亡豚鼠的主要器官组织,观察其病理和组织病理变化,与猪Classer's病病变进行比较。... 详细信息

为建立副猪嗜血杆菌(Hps)的感染动物模型,本试验用Hps血清5型标准菌株(Nagasaki),以2.0×109CFU剂量腹腔感染豚鼠,观察豚鼠发病及死亡情况。取死亡豚鼠的主要器官组织,观察其病理和组织病理变化,与猪Classer's病病变进行比较。并同时对死亡豚鼠进行细菌分离,分离菌经PCR鉴定。实验结果显示:在接种14h后试验组豚鼠(5/8)出现死亡,死亡豚鼠剖检时出现了与猪Classer's病相似的病变;主要组织器官组织学变化以炎性细胞浸润、纤维蛋白和红细胞渗出等变化;并通过细菌分离培养,在豚鼠大脑、心血、肺、肝、脾和肾主要器官中分离到Hps血清5型菌。实验结果表明豚鼠可以作为Hps的感染动物模型。这一结果为研究其致病机制、诊断和免疫研究奠定基础。

关键词：副猪嗜血杆菌动物模型豚鼠

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病毒受体及其研究现状

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动物医学进展 2009年第7期30卷 95-100页

作者：赵清李冬中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

受体在宿主细胞与病毒的相互作用中起着极其重要的作用。病毒受体的特性与病毒的宿主范围、组织嗜性有密切关系,是病毒致病性的主要因素之一。病毒受体的研究方法有经典的研究方法,也有现代分子生物学方法。在病毒受体的研究中,通常以... 详细信息

受体在宿主细胞与病毒的相互作用中起着极其重要的作用。病毒受体的特性与病毒的宿主范围、组织嗜性有密切关系,是病毒致病性的主要因素之一。病毒受体的研究方法有经典的研究方法,也有现代分子生物学方法。在病毒受体的研究中,通常以分离纯化的细胞膜代替活体细胞来研究病毒受体。通过对病毒与细胞受体相互作用的深入研究,人们已经发现很多受体阻断剂例如植物凝集素和肝素等物质可以阻断病毒与受体的结合,从而为病毒病的防控提供繁殖一些有效的新方法。

关键词：病毒受体阻断剂

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