检索结果-内蒙古大学图书馆

安徽农业科学 2009年第20期37卷 9384-9386,9404页

作者：邵长春张强吴国华颜新敏李健王建科卢晓丽赵志荀崔丽凡高世功甘肃农业大学甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 中农威特生物科技股份有限公司

[目的]研制小反刍兽疫羊痘活载体疫苗。[方法]利用PCR技术扩增小反刍兽疫病毒H基因,克隆到pGEM-Teasy载体,NheⅠ和HindⅢ双酶切重组质粒,将目的片段插入到真核表达载体pEGFP-N1-P7.5中,得到重组载体pEGFP-N1-P7.5-H,重组载体HindⅢ、Nh... 详细信息

[目的]研制小反刍兽疫羊痘活载体疫苗。[方法]利用PCR技术扩增小反刍兽疫病毒H基因,克隆到pGEM-Teasy载体,NheⅠ和HindⅢ双酶切重组质粒,将目的片段插入到真核表达载体pEGFP-N1-P7.5中,得到重组载体pEGFP-N1-P7.5-H,重组载体HindⅢ、NheⅠ双酶切片段EGFP-P7.5-H平末端连接到KpnⅠ酶切后的载体pUC119-TK中,得到通用转移载体pUC119-TK-EGFP-P7.5-H。[结果]经酶切鉴定及PCR扩增检测,表明构建栽体正确。pUC119-TK-EGFP-P7.5-H转染羊痘病毒感染的BHK21细胞,48 h后报告基因表达。[结论]该研究为研制小反刍兽疫基因工程活载体疫苗奠定基础。

关键词：羊痘病毒 H基因转移载体构建鉴定

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抗O型口蹄疫病毒单克隆抗体轻链可变区的克隆及序列分析

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浙江农业科学 2009年第4期50卷 809-811页

作者：宋帅林彤邵军军丛国正独军政高闪电常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

应用分子生物学技术,从分泌抗O型口蹄疫病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞9F12中提取总RNA,经反转录,PCR扩增及克隆,得到VL基因。序列测定结果表明,9F12的VL基因为336 bp,可编码112个氨基酸。用NCBI GenBank分析表明,VL基因符合小鼠抗体可变... 详细信息

应用分子生物学技术,从分泌抗O型口蹄疫病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞9F12中提取总RNA,经反转录,PCR扩增及克隆,得到VL基因。序列测定结果表明,9F12的VL基因为336 bp,可编码112个氨基酸。用NCBI GenBank分析表明,VL基因符合小鼠抗体可变区特征,为功能性重排的抗体可变区基因。根据Kabat分类体系,9F12的VL基因片段隶属于抗体κ轻链20家族。9F12的VL基因的克隆为抗O型口蹄疫病毒单链抗体的构建与表达奠定了基础。

关键词： O型口蹄疫病毒单克隆抗体轻链可变区基因克隆序列分析

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3种口蹄疫病毒检测方法能力比对的试验

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浙江农业科学 2009年第1期50卷 195-197页

作者：刘萍丛国正邵军军林彤独军政常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

为验证口蹄疫病毒的检测方法,利用液相阻断酶联免疫吸附试验(LB-ELISA)、非结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验(3ABC-I-ELISA)和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)3种方法对样品进行口蹄疫病毒检测,检测结果待检样品为阴性,阳性对照与预测结果一致。

关键词：口蹄疫 LB-ELISA 3ABC-I-ELISA RT-PCR 检测能力

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Establishment of Monoclonal Antibody Competitive ELISA Using Monoclonal Antibody Against VP1 Protein of Asia 1 Type Foot-and-Mouth Disease Virus

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Agricultural Science & Technology 2009年第3期10卷 104-107页

作者：林彤邵军军丛国正独军政高闪电常惠芸谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点实验室甘肃兰州730046

Using the purified VP1 protein of Asia 1 type foot-and-mouth disease virus as the antigen, the purified monoclonal antibody was labeled by the sodium periodate method and the monoclonal antibody competitive ELISA was established in this study. Ten positive porcine foot-and-mouth disease serums and more than two hundreds negative serum were tested, and the results were the same as the background of samples. The sensitivity test and replicate test indicated that this method was stable and sensitive, which was suitable for monitoring Asia 1 type porcine foot-and-mouth disease virus antibody.

关键词： Asia 1 FMDV VP1 monoclonal antibody Competitive ELISA

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Asial型口蹄疫病毒分离株P1基因的原核表达及其多克隆抗体的制备

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中国人兽共患病学报 2009年第10期 973-976页

作者：张中旺张永光王永录潘丽张昱中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室

目的原核表达口蹄疫病毒Asial／HeB株衣壳蛋白前体P1基因并纯化。制备其兔多克隆抗体并进行鉴定。方法从重组克隆载体pGEM—P1中扩增编码P1区结构蛋白的基因片段。并克隆入原核表达载体pET28a（＋）中。原核表达与蛋白纯化后，免疫新西... 详细信息

目的原核表达口蹄疫病毒Asial／HeB株衣壳蛋白前体P1基因并纯化。制备其兔多克隆抗体并进行鉴定。方法从重组克隆载体pGEM—P1中扩增编码P1区结构蛋白的基因片段。并克隆入原核表达载体pET28a（＋）中。原核表达与蛋白纯化后，免疫新西兰兔，制备P1蛋白抗血清。抗体效价及特异性检测分别用间接ELISA和Western blot法鉴定。结果在大肠杆菌中成功表达了分子量约为80．475kDa的P1蛋白。ELISA法检测抗血清的效价可达到1：25600，Westernblot分析抗血清可与原核表达的P1蛋白特异性结合。结论在大肠杆菌中成功表达了口蹄疫病毒Asial／HeB株衣壳蛋白前体，并制备了P1衣壳蛋白前体的抗血清，为进一步研究P1区结构蛋白的结构、功能以及抗原表位的确定奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒衣壳蛋白前体P1 原核表达多克隆抗体

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Purification and Immunocompetence Analysis of GP5 Protein in Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome

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Agricultural Science & Technology 2009年第3期10卷 97-100页

作者：陈妍田宏尹双辉尚佑军刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

[Objective] The purification and immunocompetence of GPS protein in porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) were analyzed in this study, which provided basis for establishing the corresponding serological method. [Method] The recombinant expression plasmid pGEX-6P-5 was transformed into BL21 and expressed after being induced with IPTG. The solubility analysis of expression products was carried out, and then the recombinant protein was purified for SDS-PAGE identification and Western-blot analysis. Finally, the recombinant antigen was used in the immune experiment of guinea pigs. [Result] The target protein content accounted for 30% of the total cells protein content according to the chromatography scanning, and the purity of target protein after purification reached 80%. The purified protein was analyzed by Western-blot and immune experiment of guinea pigs, and the results showed that the expressed protein had good reactionogenicity and immunogenicity. [Conclusion] This study provides materials for further studies on the function between PRRSV ORF5 gene and its editing protein, which also lays a foundation for porcine reproductive and respiratory syndrome virus genetic engineering products.

关键词： Porcine reproductive and respiratory syndrome GP5 Expression Purification Immunocompetence

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兔病毒性出血症研究概况及前景

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中国动物检疫 2009年第1期26卷 59-62页

作者：朱海霞张强家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃兰州730046

兔病毒性出血症(RHD)是由兔病毒性出血症病毒(RHDV)引起的一种急性、高度致死性传染病,对易感兔致病率可达90%,病死率高达100%。本文对兔病毒性出血症病毒的形态及理化特性、体外培养、分子生物学、病毒的检测和疫苗等方面做了系统深入... 详细信息

兔病毒性出血症(RHD)是由兔病毒性出血症病毒(RHDV)引起的一种急性、高度致死性传染病,对易感兔致病率可达90%,病死率高达100%。本文对兔病毒性出血症病毒的形态及理化特性、体外培养、分子生物学、病毒的检测和疫苗等方面做了系统深入综述,并提出了存在的问题及展望。

关键词：兔病毒性出血症兔病毒性出血症病毒研究概况

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Expression and Identification of the Type-specific Antigen of FMDV of Serotype C

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Agricultural Science & Technology 2009年第5期10卷 79-81,95页

作者：高闪电独军政常惠芸丛国正邵军军林彤宋帅谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

[Objective]The aim was to provide a theoretical basis for preparation of polyclonal antibodies and monoclonal antibody that of type specificity, as well as Foot-and-mouth Disease Virus （FMDV） typing.[Method] The recombinant plasmid pGEM-CP1 that contained VPI gene of FMDV of serotype C was used as template for the VP1 and its C terminus coding fragments of FMDV of serotypes C amplification. The coding fragments of VP1 and its C terminus were respectively cloned into prokaryotic expression vector for prokaryotic expression and the reactionogenicity was detected. The purified fusion protein of FMDV VP1 and its C terminus of serotype C were used to construct the indirect ELISA method to detect positive sera of four serotypes A, O, C and Asia 1 of guinea pig and determine the cross reactivity of FMDV antibody of VP1 and its C terminus of serotype C with other three serotypes. [ Result] The recombinant prokaryotic expression plasmids of PPRO-CVP1 and pPRO-CVPlc were constructed, FMDV VP1 and its C terminus of serotype C were expressed in high level, and the molecular weight of target proteins was 33 kD and 20 kD respectively. Western blot result showed that the fusion protein of VP1 and its C terminus could react with the positive sera of guinea pig of the same serotype. ELISA results revealed that VP1 and its C terminus of serotype C are type-specific and no cross-reactivities were shown between guinea pig positive sera of FMDV of serotype C with the other three serotypes, and the C terminus showed better type-specificity. [ Conclusion] FMDV specific antigen of serotype C was obtained.

关键词： Foot-and-mouth disease virus of serotype C Serology Cross reactivity Serotyping

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Construction and Identification of a Goat Pox Virus Transfer Vector to Express Peste des Petits Ruminants H gene

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Agricultural Science & Technology 2009年第3期10卷 15-18,35页

作者：邵长春张强吴国华颜新敏李健王建科卢晓丽赵志荀崔丽凡高世功中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

[Objective] This study was to develop a live vector vaccine of goat pox virus of Peste des petits ruminants(PPR). [Method] Using PCR amplification technique, PPR H gene was obtained, then ligated into pGEM-T easy vector; the recombinants were digested by Nhe Ⅰ and Hind Ⅲ, and ligated into pEGFP-N1-P7.5, yielding the recombinant vector pEGFP-N1-P7.5-H; next the expression cassette EGFP-N1-P7.5-H was first released from recombinant vector pEGFP-N1-P7.5-H by double digestion of Hind Ⅲ and Nhe Ⅰ and ligated into pUC119-TK that was digested by Kpn Ⅰ, yielding the transfer vector pUC119-TK-EGFP-P7.5-H. [Result] Identification and double enzyme digestion showed that the transfer vector pUC119-TK-EGFP-P7.5-H was correctly constructed. From the transfer vector transfected BHK-21 cells which infected GTPV AV41, specific fluorescence was observed at 48th h of transfection. [Conclusion] The construction of goat poxvirus live vector laid a foundation for the live vector vaccine of PPR vaccine.

关键词： Goat pox virus H gene Transfer vector Construction Identification

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分子信标技术及其在生物学中的应用

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现代仪器 2009年第4期15卷 1-5页

作者：杨生海殷宏刘永生孙彩琴陈豪泰张杰中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046 中农威特生物科技股份有限公司兰州730046 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室

人们对生命现象的观察和研究已经深入到纳米尺度和单细胞、单分子的水平,如何在这样一个尺度范围内获取有用的生物化学信息对各个研究领域均提出新的要求。可进行实时、在线、原位、活体检测的分子探针成为人们研究的热点和重点,本文就... 详细信息

人们对生命现象的观察和研究已经深入到纳米尺度和单细胞、单分子的水平,如何在这样一个尺度范围内获取有用的生物化学信息对各个研究领域均提出新的要求。可进行实时、在线、原位、活体检测的分子探针成为人们研究的热点和重点,本文就分子信标技术的研究概况及其在分子生物学中的应用作一概述。

关键词：分子信标荧光探针检测

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