检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2008年第8期30卷 627-630页

作者：林密马军武祁淑芸冯霞张峰殷宏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室/国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

本研究建立了O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法,确立了O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法检测O型口蹄疫血清阴阳性判定标准:抗体效价大于或等于1∶32时判为O型口蹄疫抗体阳性;1∶16～1∶32时判为O型口蹄疫抗体可疑。检测13... 详细信息

本研究建立了O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法,确立了O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法检测O型口蹄疫血清阴阳性判定标准:抗体效价大于或等于1∶32时判为O型口蹄疫抗体阳性;1∶16～1∶32时判为O型口蹄疫抗体可疑。检测131份阴性血清、口蹄疫亚洲1型阳性血清和A型阳性血清,固相竞争ELISA方法和液相阻断ELISA方法的特异性分别是95.5%,84.7%。固相竞争ELISA方法检测口蹄疫亚洲1型、口蹄疫A型阳性血清时,无交叉反应,O型口蹄疫病毒感染牛、免疫牛和感染猪血清的阳性检出率均为100%,免疫猪检出率为86.7%。

关键词：口蹄疫固相竞争ELISA 抗体效价血清

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禽流感病毒H5N2亚型A/Chicken/Gansu/2003株HA+NA基因重组腺病毒的构建

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中国人兽共患病学报 2008年第3期24卷 205-209页

作者：李宝玉殷相平李学瑞兰喜杨斌方玉萍柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开发实验室兰州730046

目的基于腺病毒可感染禽类呼吸道和肠道上皮黏膜的特性,本文构建了包含有禽流感病毒H5N2亚型HA和NA基因的重组腺病毒,为进一步研制口服禽流感活载体疫苗奠定基础。方法通过RT-PCR方法分别扩增出AIV的HA和NA全基因片段,利用拼接接头将HA... 详细信息

目的基于腺病毒可感染禽类呼吸道和肠道上皮黏膜的特性,本文构建了包含有禽流感病毒H5N2亚型HA和NA基因的重组腺病毒,为进一步研制口服禽流感活载体疫苗奠定基础。方法通过RT-PCR方法分别扩增出AIV的HA和NA全基因片段,利用拼接接头将HA和NA定向串联并插入到腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV之中,然后在大肠杆菌中实现腺病毒骨架载体pAdEasy-1和重组腺病毒穿梭载体的同源重组,获得插有外源基因的重组腺病毒质粒,进而通过转染HEK293细胞,得到含有目的基因HA和NA的重组腺病毒。结果在pAdTrack-CMV载体中成功克隆了HA+NA双基因,并与腺病毒骨架载体在大肠杆菌中实现了同源重组;线性化后的重组腺病毒质粒转染HEK293细胞后可观察到典型的细胞病变和绿色荧光蛋白的表达。结论成功获得了含有HA+NA双基因重的组腺病毒,为口服活载体疫苗的研制提供了依据。

关键词：禽流感病毒 HA+NA基因重组腺病毒同源重组

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口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域单克隆抗体的制备

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中国兽医科学 2008年第12期38卷 1065-1069页

作者：赵建勇独军政高闪电林彤邵军军丛国正伏小平常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

以纯化的口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域重组蛋白为抗原,免疫雌性BALB/c小鼠,经3次免疫后取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,制备口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域单克隆抗体(McAb);采用有限稀释法和间接ELIS... 详细信息

以纯化的口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域重组蛋白为抗原,免疫雌性BALB/c小鼠,经3次免疫后取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,制备口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域单克隆抗体(McAb);采用有限稀释法和间接ELISA克隆和筛选阳性杂交瘤细胞株,并用SDS-PAGE、间接ELISA以及间接免疫荧光法对制备的McAb的特异性进行鉴定。结果显示,成功获得5株能稳定传代并分泌抗β6亚基配体结合域的杂交瘤细胞株,分别命名为C4C7、E7C7、B8C9、C2D8和B7B6,其分泌的McAb为IgG2b(C2D8)和IgG2a(C4C7、E7C7、B8C9、B7B6)亚类。制备的口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域McAb可为深入研究整联蛋白αvβ6在口蹄疫病毒感染过程中的作用奠定基础。

关键词：口蹄疫病毒受体整联蛋白β6亚基配体结合域单克隆抗体

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口蹄疫病毒基因组的遗传变异剖析

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中国农业科学 2008年第9期41卷 2826-2834页

作者：陈豪泰张杰孙德惠马丽娜刘湘涛刘永生中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点实验室/农业部草食动物疫病重点开放实验室

【目的】明确口蹄疫病毒基因组的结构特征及其变异与结构、功能的关系以及系统发生关系。【方法】利用DNAstar和Clustalx程序进行184个口蹄疫病毒基因组序列的同源性分析、多重排比。【结果】口蹄疫病毒基因组ORF大小有所差异,范围为696... 详细信息

【目的】明确口蹄疫病毒基因组的结构特征及其变异与结构、功能的关系以及系统发生关系。【方法】利用DNAstar和Clustalx程序进行184个口蹄疫病毒基因组序列的同源性分析、多重排比。【结果】口蹄疫病毒基因组ORF大小有所差异,范围为6963～7120 nt,编码2320～2339 aa的多聚蛋白。核苷酸和氨基酸序列的同源性,7个不同血清型间>77.6%和>78.3%,本研究发现了可能和生物学功能相关的新的保守和变异区域。【结论】口蹄疫病毒RNA的变异类型丰富和多样性程度较高,自然界存在的毒株可能大于血清学和测序发现的FMDV的毒株数目。

关键词：毒株数目口蹄疫遗传变异

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应用活体骨髓瘤细胞制备单克隆抗体

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中国生物工程杂志 2008年第11期28卷 63-66页

作者：李永亮田美娜卢曾军杨苏珍刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所、家畜疫病病原生物学国家重点实验室、农业部畜禽病毒学重点实验室、国家口蹄疫参考实验室兰州730046 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室郑州450002

目的:用活体骨髓瘤细胞SP2/0做融合提高融合率制备单克隆抗体,并与常规方法比较效果。方法:将SP2/0细胞打到8周龄的SPF级BALB/c小鼠皮下,待实体瘤生长到直径达2～3cm时无菌解剖取实体瘤,分离出骨髓瘤细胞进行融合。同时用培养基培养SP2/... 详细信息

目的:用活体骨髓瘤细胞SP2/0做融合提高融合率制备单克隆抗体,并与常规方法比较效果。方法:将SP2/0细胞打到8周龄的SPF级BALB/c小鼠皮下,待实体瘤生长到直径达2～3cm时无菌解剖取实体瘤,分离出骨髓瘤细胞进行融合。同时用培养基培养SP2/0细胞进行融合做比较,分两组进行。比较两种方法的融合率以及两种方法制备出来的单克隆抗体的相对亲和力。结果:做了6次融合,实体瘤融合组融合率为70.4%,常规法融合组44.6%,两种方法制备单抗的相对亲和力均达到1∶100000以上。结论:利用活体实体瘤细胞进行融合能明显提高细胞融合率。

关键词：单克隆抗体(MAb)SP2/0细胞活体骨髓瘤细胞融合

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双重PCR快速鉴别羊痘病毒和羊口疮病毒

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中国人兽共患病学报 2008年第10期24卷 945-948页

作者：颜新敏张强吴国华李健朱海霞朱彩珠中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

根据羊痘病毒的P32基因和羊口疮病毒H2L基因序列设计合成两对引物,建立了一种快速鉴别诊断羊痘病毒和羊口疮病毒的双重PCR方法。该方法可对羊痘病毒和羊口疮病毒分别扩增出969bp和507bp的特异性片段,对痘苗病毒等其它病原和健康羊皮肤... 详细信息

根据羊痘病毒的P32基因和羊口疮病毒H2L基因序列设计合成两对引物,建立了一种快速鉴别诊断羊痘病毒和羊口疮病毒的双重PCR方法。该方法可对羊痘病毒和羊口疮病毒分别扩增出969bp和507bp的特异性片段,对痘苗病毒等其它病原和健康羊皮肤组织不能扩增出任何片段。敏感性试验表明该方法可分别扩增出101.66TCID50山羊痘病毒和102.33TCID50羊口疮病毒。对从甘肃境内采集的11份临床病料进行检测,其中8份可扩增出969bp的羊痘病毒特异性片段,3份可扩增出507bp的羊口疮病毒特异性片段,与病毒分离鉴定结果一致。

关键词：双重PCR 鉴别诊断羊痘病毒羊口疮病毒

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口蹄疫表位疫苗的研究进展

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中国人兽共患病学报 2008年第6期24卷 570-573,591页

作者：张中旺张永光中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

口蹄疫（Foot-and—Mouth Disease，FMD）是偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病，被国际兽疫局列为头号A类传染病。该病传播途径多、传播速度快，曾多次在世界发生大流行。

关键词：口蹄疫表位疫苗国际兽疫局传播途径传播速度传染病接触性大流行

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H9N2亚型禽流感病毒A／Chicken／Gansu／2／99株基因组的分子特征

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中国人兽共患病学报 2008年第6期24卷 543-547页

作者：独军政侯顺利易华山付生芳常惠芸才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

目的测定H9N2亚型禽流感病毒A/Chicken/Gansu/2/99(CK/GS/2/99)分离株的基因组序列并与参考毒株进行同源性分析,阐明该毒株的遗传变异及分子特征。方法采集发病鸡泄殖腔样品,经鸡胚尿囊腔接种分离病毒,采用RT-PCR方法对CK/GS/2/99株的8... 详细信息

目的测定H9N2亚型禽流感病毒A/Chicken/Gansu/2/99(CK/GS/2/99)分离株的基因组序列并与参考毒株进行同源性分析,阐明该毒株的遗传变异及分子特征。方法采集发病鸡泄殖腔样品,经鸡胚尿囊腔接种分离病毒,采用RT-PCR方法对CK/GS/2/99株的8个分节段基因进行扩增,分别将其克隆到pGEM-T easy载体后进行序列测定与同源性分析。结果CK/GS/2/99株PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M、NS基因的开放阅读框分别由2280、2274、2151、1683、1497、1401、759、864个碱基组成,分别编码759、757、716、560、498、466、252/97、231/122个氨基酸残基。该毒株HA上HA1和HA2裂解位点序列为PARSSR↓GLF,具有典型的低致病性禽流感病毒的特征。同源性分析显示,CK/GS/2/99株与1998-2002年间大部分中国大陆分离株遗传关系较近,尤其与CK/NX/4/99和CK/HB/31/00株遗传关系密切。结论CK/GS/2/99与大部分流行于中国内陆的H9N2亚型毒株均来源于共同的祖先毒株CK/BJ/1/94,这为了解中国H9N2亚型禽流感病毒的分子流行病学提供了资料。

关键词：禽流感病毒 H9N2亚型 A/Chicken/Gansu/2/99 序列分析

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稳定表达猪水疱病病毒P1基因的PK-15细胞系的建立

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畜牧兽医学报 2008年第4期39卷 478-482页

作者：田宏吴锦艳龚真莉郑海学孙世琪尚佑军刘湘涛谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

从猪水疱病全长感染性cDNA中,应用PCR技术扩增到SVDV结构蛋白P1基因,并在目的片段的5′端引入Kozak序列(Kozak,1987),定向克隆于逆转录病毒载体pBABE puro。经PCR、酶切和序列分析鉴定,获得阳性重组质粒。将该重组质粒与水疱性口炎病毒... 详细信息

从猪水疱病全长感染性cDNA中,应用PCR技术扩增到SVDV结构蛋白P1基因,并在目的片段的5′端引入Kozak序列(Kozak,1987),定向克隆于逆转录病毒载体pBABE puro。经PCR、酶切和序列分析鉴定,获得阳性重组质粒。将该重组质粒与水疱性口炎病毒载体pVSV-G共转染GP2-293细胞,收获假型病毒,在Polybrene的介导下感染PK-15细胞,嘌呤霉素筛选阳性细胞克隆。免疫荧光连续检测阳性克隆传代细胞,发现在不同代次的细胞中均有SVDV P1蛋白表达,而且表达的蛋白可被SVD阳性血清所识别;同时应用PCR技术,可从体外反复传代阳性细胞基因组中扩增到SVD P1基因。表明本次所筛选的阳性细胞克隆不但能持续稳定地表达SVD P1蛋白,而且可携带外源基因进行传代,具有良好的遗传稳定性。

关键词：猪水疱病病毒P1基因重组逆转录病毒载体 PK-15细胞基因表达

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人、牛和羊叠朊基因的表达及牛叠朊蛋白抗血清的制备

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中国农业大学学报 2008年第3期13卷 14-18页

作者：刘永生唐江山路伟陈豪泰孙德惠才学鹏张杰中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

叠朊(Dpl)是朊蛋白(PrP)的横向同源物,两者的功能密切相关。本研究旨在制备能够特异检测重组表达的或者动物组织中Dpl的抗血清,以用于研究Dpl的功能及其与PrP的关系。根据已克隆的汉族人、中国黄牛、甘肃土种羊的Dpl基因,将其Dpl成熟蛋... 详细信息

叠朊(Dpl)是朊蛋白(PrP)的横向同源物,两者的功能密切相关。本研究旨在制备能够特异检测重组表达的或者动物组织中Dpl的抗血清,以用于研究Dpl的功能及其与PrP的关系。根据已克隆的汉族人、中国黄牛、甘肃土种羊的Dpl基因,将其Dpl成熟蛋白编码区分别定向克隆到表达载体pET-30a(+)上,将重组表达载体转入***21(DE3)pLysS,IPTG诱导表达。将表达并纯化的牛重组Dpl免疫4只青紫蓝兔,制备牛Dpl的抗血清,SDS-PAGE分析表明人、牛和羊的重组Dpl在***中获得了高效表达。用Ni-NTA树脂亲和层析和胶洗脱法纯化了上述表达产物,ELISA和West-blot分析表明,制备的牛Dpl抗血清与重组人、牛和羊的Dpl以及牛和羊睾丸组织的Dpl发生了特异性反应,却不与重组人、牛和羊的PrP发生反应。上述结果表明制备的Dpl抗血清可以作为人、牛和羊Dpl的检测试剂和研究材料。

关键词：传染性海绵状脑病叠朊朊蛋白基因表达抗血清

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