检索结果-内蒙古大学图书馆

甘肃农业大学学报 2008年第4期43卷 17-22页

作者：孙普卢曾军刘霞李平花白兴文郭建宏包慧芳刘在新甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所国家家畜疫病病原生物学重点实验室农业部畜禽病毒学重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

采用体外连接法构建了含有A型口蹄疫病毒（FMDV）P1-2A和3C或3ABC基因的重组腺病毒表达载体．利用PCR技术分别扩增得到P1-2A、3C和3ABC基因，经Xba I／BamH I和BamH I／Kpn I双酶切之后，与Xba I／Kpn I双酶切的穿梭载体pShuttle2大片... 详细信息

采用体外连接法构建了含有A型口蹄疫病毒（FMDV）P1-2A和3C或3ABC基因的重组腺病毒表达载体．利用PCR技术分别扩增得到P1-2A、3C和3ABC基因，经Xba I／BamH I和BamH I／Kpn I双酶切之后，与Xba I／Kpn I双酶切的穿梭载体pShuttle2大片段连接，获得重组穿梭质粒pSh-P12a3c和pSh-P12a3abc．然后用I-Ceu I和PbSce I双酶切穿梭质粒回收目的基因表达盒，通过体外连接法将目的基因表达盒与BDAdeno-X Virus DNA连接，转化DH5α感受态菌．获得两个重组腺病毒质粒分别命名为A-P12a3c和A-P12a3abc，经PCR、酶切及测序鉴定正确、用PacI酶切后转染HEK293细胞。取转染细胞裂解液上清连续传至第5代时，在24-48h内细胞完全病变．分别提取第3、7代病毒DNA，可扩增出目的基因，表明目的基因已整合到腺病毒基因组内，且能稳定传代．

关键词：口蹄疫病毒腺病毒载体体外连接

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

狂犬病病毒CVS株核蛋白基因的原核表达、纯化及鉴定

引用

生物技术通报 2008年第3期24卷 103-106页

作者：李江涛李轶女殷相平邹媛媛张志芳柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046 中国农业科学院生物技术研究所北京100081

用RT-PCR技术对狂犬病病毒(RV)CVS株核蛋白(N)基因进行扩增,经克隆与序列分析,该基因编码450个氨基酸残基。将目的基因克隆到原核表达载体pET28a(+)中,构建了重组质粒pET-N,将其转化表达菌BL21(DE3),于37℃1.0mmol∕L IPTG条件下诱导表... 详细信息

用RT-PCR技术对狂犬病病毒(RV)CVS株核蛋白(N)基因进行扩增,经克隆与序列分析,该基因编码450个氨基酸残基。将目的基因克隆到原核表达载体pET28a(+)中,构建了重组质粒pET-N,将其转化表达菌BL21(DE3),于37℃1.0mmol∕L IPTG条件下诱导表达。大肠杆菌菌体裂解产物经SDS-PAGE电泳分析,在分子量约为54kD处出现一新蛋白带,和预期的目的蛋白的分子量相符。质谱鉴定的结果表明成功表达了RV N蛋白,为狂犬病的进一步研究奠定了基础。

关键词：狂犬病病毒核蛋白原核表达

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

连环恒温扩增技术及其在临床诊断中的应用

连环恒温扩增技术及其在临床诊断中的应用

引用

第二届中国生物产业大会

作者：高闪电常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室子兰州 730046

连环恒温扩增技术(LAMP)利用针对靶基因的6个区域设计4条特异引物：正向内侧引物(FIP)、正向外侧引物(F3)、反向内侧引物(BIP)、反向外侧引物(B3),利用一种链置换活性DNA聚合酶、底物(dNTP)及反应缓冲液,在恒温65℃左右保温几十min,即... 详细信息

连环恒温扩增技术(LAMP)利用针对靶基因的6个区域设计4条特异引物：正向内侧引物(FIP)、正向外侧引物(F3)、反向内侧引物(BIP)、反向外侧引物(B3),利用一种链置换活性DNA聚合酶、底物(dNTP)及反应缓冲液,在恒温65℃左右保温几十min,即可完成核酸扩增反应.如果再设计两条环状引物Loop F和Loop B,可加速扩增反应.该方法既可对DNA进行扩增,也可对RNA进行扩增.作为一种简便、快速、高的特异的基因扩增法，LAMP法在食品卫生质量检验、动物胚胎早期鉴定、临床疾病诊断等领域展现了广阔的应用前景.本文就连环恒温扩增技术在临床诊断中的应用进行论述.

关键词：连环恒温扩增技术临床诊断 DNA聚合酶特异引物

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

口蹄疫灭活疫苗研究进展

引用

动物医学进展 2008年第12期29卷 43-47页

作者：张淑刚张永光中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

灭活疫苗仍然是当前口蹄疫免疫控制的主要疫苗,研制口蹄疫灭活疫苗具有重要的现实意义,其研制方法在不断丰富和完善。文章详细描述了口蹄疫灭活疫苗研制的重要步骤及其进展,包括毒株筛选,病毒生产、灭活、抗原浓缩、纯化和配苗及疫苗的... 详细信息

灭活疫苗仍然是当前口蹄疫免疫控制的主要疫苗,研制口蹄疫灭活疫苗具有重要的现实意义,其研制方法在不断丰富和完善。文章详细描述了口蹄疫灭活疫苗研制的重要步骤及其进展,包括毒株筛选,病毒生产、灭活、抗原浓缩、纯化和配苗及疫苗的质量控制。制苗毒株的选择是研制疫苗的首要问题,直接关系到疫苗的免疫效果;病毒灭活和随后的安全试验是在制备灭活FMD疫苗中最关键的步骤;抗原浓缩纯化和配苗是保证疫苗良好免疫效果的必需。最后阐述了口蹄疫灭活疫苗在口蹄疫防控中的作用。

关键词：口蹄疫灭活疫苗研制质量控制作用

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

口蹄疫病毒双效疫苗载体的构建及其体外表达研究

口蹄疫病毒双效疫苗载体的构建及其体外表达研究

引用

第二届全国人畜共患病学术研讨会

作者：杨彬兰喜殷相平李学瑞李宝玉方玉萍柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室

用RT-PCR法获得了针对口蹄疫病毒（FMDV）基因组5′非编码区内包含病毒复制起始元件的基因片段ASCN及其VP1结构蛋白基因,将其分别克隆至双顺反子表达载体pIPES中,构建成了双表达质粒pASCN-IR-VP1,经酶切、PCR及DNA测序分析表明ASCN及VP... 详细信息

用RT-PCR法获得了针对口蹄疫病毒（FMDV）基因组5′非编码区内包含病毒复制起始元件的基因片段ASCN及其VP1结构蛋白基因,将其分别克隆至双顺反子表达载体pIPES中,构建成了双表达质粒pASCN-IR-VP1,经酶切、PCR及DNA测序分析表明ASCN及VP1基因已正确地插入到pIPES中,编码序列及插入方向均正确。用脂质体介导法将双效表达质粒导入BHK-21细胞后,经RT-PCR、实时荧光定量PCR检测表明双效表达质粒中的ASCN在细胞中得到了有效转录,mRNA的表达量达到了1.27×10～6个拷贝/μL;经夹心ELISA及间接免疫荧光标记等试验表明VP1结构蛋白基因在BHK-21细胞中得到了表达,具有良好的生物学活性。双效质粒pASCN-IR-VP1转染IBRS-2细胞24h后,按100TCID/0.1mL的量接FMDV OMⅢ毒,结果该质粒能够明显地抑制FMDV的复制,使病变时间推迟约16～18h,接毒48h时的抑制率达到60%以上,蚀斑减少试验也证实了该双效质粒的病毒抑制作用。研究结果表明成功构建了FMDV双效表达载体,为进一步研究双效疫苗免疫效力提供了前期基础。

关键词：口蹄疫病毒反义RNA pIRES 双效疫苗

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

脉冲放电杀菌技术在动物疫苗制备中的展望

脉冲放电杀菌技术在动物疫苗制备中的展望

引用

中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会

作者：周继章中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室

灭活疫苗在预防动物传染病中起着巨大的作用,但是灭活疫苗所使用的灭活剂容易在动物源性食品中残留,容易污染环境,不利于健康。高压脉冲电场能使病原体快速死亡,并且不污染环境。若将高压脉冲电场用于动物传染病疫苗的灭活,将会对疫苗... 详细信息

灭活疫苗在预防动物传染病中起着巨大的作用,但是灭活疫苗所使用的灭活剂容易在动物源性食品中残留,容易污染环境,不利于健康。高压脉冲电场能使病原体快速死亡,并且不污染环境。若将高压脉冲电场用于动物传染病疫苗的灭活,将会对疫苗的灭活带来革新,有望为人类提供绿色动物源性食品,保护人类健康。

关键词：脉冲电场病原体灭活

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

三种乳化剂对疫苗乳液稳定性的影响

引用

甘肃农业大学学报 2008年第3期43卷 21-24页

作者：黄振华王永录李晓明张永光方玉珍蒋守田潘丽刘力宽吕建亮甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所国家家畜疫病病原生物学重点实验室农业部畜禽病毒学重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

采用正交试验L9(34),对F-188、ELP和TWEEN-80三种乳化剂的复配比例进行了研究.结果表明:F-188∶ELP∶TWEEN-80的比例为1∶3∶3时,疫苗乳液的稳定性最好,黏度较小,乳液颗粒直径皆在0.2μm以下,且粒径均匀.方差分析表明,3种乳化剂对乳液... 详细信息

采用正交试验L9(34),对F-188、ELP和TWEEN-80三种乳化剂的复配比例进行了研究.结果表明:F-188∶ELP∶TWEEN-80的比例为1∶3∶3时,疫苗乳液的稳定性最好,黏度较小,乳液颗粒直径皆在0.2μm以下,且粒径均匀.方差分析表明,3种乳化剂对乳液稳定性的影响差异极显著(P<0.01),且ELP、TWEEN-80的乳化效果极显著优于F-188.

关键词：乳化剂 F-188 ELP TWEEN-80 疫苗乳液稳定性

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

液相阻断ELISA在口蹄疫病毒抗体水平检测中的应用

引用

甘肃农业大学学报 2008年第3期43卷 18-20页

作者：刘俊林祁淑芸马军武崔燕甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所国家家畜疫病病原生物学重点实验室农业部畜禽病毒学重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

分别利用口蹄疫病毒Asia-I型和O型液相阻断ELISA方法,对健康猪、牛、羊血清,O型、Asia-I型免疫血清,以及人工感染Asia-I型FMDV的猪、羊血清和人工感染O型FMDV牛血清进行了抗体水平检测,同时利用3ABC-I-ELISA对液相阻断ELISA方法所选的... 详细信息

分别利用口蹄疫病毒Asia-I型和O型液相阻断ELISA方法,对健康猪、牛、羊血清,O型、Asia-I型免疫血清,以及人工感染Asia-I型FMDV的猪、羊血清和人工感染O型FMDV牛血清进行了抗体水平检测,同时利用3ABC-I-ELISA对液相阻断ELISA方法所选的部分阴性血清进行了验证试验.结果显示:利用Asia-I型和O型液相阻断ELISA方法筛选的阴性动物,在免疫和攻毒后,血清抗体水平显著升高,表明该法可完全用于口蹄疫阴性动物筛选及口蹄疫病毒抗体水平的检测.

关键词：口蹄疫抗体水平液相阻断ELISA

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

口蹄疫病毒双效疫苗载体的构建及其体外表达研究

口蹄疫病毒双效疫苗载体的构建及其体外表达研究

引用

首届中国兽药大会暨中国畜牧兽医学会动物药品学分会2008年学术年会

作者：杨彬兰喜殷相平李学瑞李宝玉方玉萍柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室／农业部畜禽病毒学重点开放实验室，甘肃兰州 730046

用RT-PCR法获得了针对口蹄疫病毒(FMDV)基因组5'非编码区内包含病毒复制起始元件的基因片段ASCN及其结构蛋白VP1基因，将其分别克隆至双顺反子表达载体pIRES中，构建成了双表达质粒pASCN-IR-VP1经酶切、PCR及DNA测序分析表明ASCN及... 详细信息

用RT-PCR法获得了针对口蹄疫病毒(FMDV)基因组5'非编码区内包含病毒复制起始元件的基因片段ASCN及其结构蛋白VP1基因，将其分别克隆至双顺反子表达载体pIRES中，构建成了双表达质粒pASCN-IR-VP1经酶切、PCR及DNA测序分析表明ASCN及VP1基因已正确地插入到pIRES中，编码序列及插入方向均正确。用脂质体介导法将双效表达质粒导入BHK-21细胞后，经RT-PCR、实时荧光定量PCR检测表明双效表达质粒中的ASCN在细胞中得到了有效转录，mRNA的表达量达到了1.27x106个拷贝/μL。;经夹心ELISA及间接免疫荧光标记等试验表明VP1结构蛋白基因在BHK-21细胞中得到了表达，具有良好的生物学活性。双效质粒pASCN-IR-VPI转染IBRS-2细胞24h后，按100TCID50/0.1mL的量接FMDVOMⅢ毒，结果该质粒能够明显地抑制FMDV的复制，使病变时间推迟约16～18h，接毒48h时的抑制率达到60％以上，蚀斑减少试验也证实了该双效质粒的病毒抑制作用。研究结果表明成功构建了FMDV双效表达载体，为进一步研究双效疫苗免疫效力提供了前期基础。

关键词：口蹄疫病毒反义RNA pIRES 双效疫苗载体疫苗免疫效力实时荧光定量PCR检测

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

Asia I/JQ株空衣壳疫苗对AsiaⅠ型FMDV两株不同毒株免疫效果的测定

Asia I/JQ株空衣壳疫苗对AsiaⅠ型FMDV两株不同毒株免疫效果的测定

引用

首届中国兽药大会——兽医生物制品学、兽医微生物学学术论坛

作者：李志勇殷相平易咏竹张志芳柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室中国农业科学院生物技术研究所

将口蹄疫病毒AsiaⅠ/JQ株P1-2A、3C基因克隆到家蚕杆状病毒转移载体pVL1393中,构建重组家蚕杆状病毒转移质粒pVL-P12A3C。pVL-P12A3C与线性化的亲本病毒Bm-BacPAK6 DNA共转染家蚕细胞,经空斑筛选后成功获得了携带有目的基因的重组病毒rB... 详细信息

将口蹄疫病毒AsiaⅠ/JQ株P1-2A、3C基因克隆到家蚕杆状病毒转移载体pVL1393中,构建重组家蚕杆状病毒转移质粒pVL-P12A3C。pVL-P12A3C与线性化的亲本病毒Bm-BacPAK6 DNA共转染家蚕细胞,经空斑筛选后成功获得了携带有目的基因的重组病毒rBm（P12A3C）。将获得的重组病毒rBm（P12A3C）感染家蚕蚕蛹,通过双抗体夹心ELISA法证明目的基因在蚕体中获得极高水平表达。用蚕表达产物作抗原制备成疫苗免疫牛,免疫动物均产生了特异性抗体。免疫后21天分别用AsiaⅠ/AKT/03和AsiaⅠ/JSL/06攻击,其PD50值达到6.54 PD/头份、5.20 PD/头份。

关键词： FMDV 家蚕杆状病毒载体疫苗

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：