检索结果-内蒙古大学图书馆

科学通报 2007年第16期52卷 1903-1907页

作者：李志勇易咏竹殷相平张志芳柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046 中国农业科学院生物技术研究所北京100081

将亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)全长约为6.9kb的可读框(ORF)克隆到家蚕杆状病毒转移载体pVL1393中,构建重组家蚕杆状病毒转移质粒***-ORF与线性化的亲本病毒Bm-BacPAK6 DNA共转染家蚕细胞,经空斑筛选后成功... 详细信息

将亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)全长约为6.9kb的可读框(ORF)克隆到家蚕杆状病毒转移载体pVL1393中,构建重组家蚕杆状病毒转移质粒***-ORF与线性化的亲本病毒Bm-BacPAK6 DNA共转染家蚕细胞,经空斑筛选后成功获得携带有FMDV全长ORF的重组病毒Bm-ORF.免疫荧光技术证明,重组病毒能够正确表达插入的外源基因.将获得的重组病毒Bm-ORF感染家蚕5龄起幼虫,双抗体夹心ELISA法和电子显微镜观察证明,目的基因在蚕体中获得较高水平表达并组装成空衣壳.用蚕表达产物作抗原制备疫苗免疫牛,免疫动物均产生了特异性抗体.免疫后21d进行病毒攻击保护实验,获得了2/4的完全保护.

关键词： FMDV ORF 家蚕杆状病毒载体免疫原性疫苗

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牛流行热病毒糖蛋白G_1抗原表位在毕赤酵母中的表达和抗原性鉴定

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微生物学通报 2007年第5期34卷 843-847页

作者：郑福英蔺国珍邱昌庆原魁章宋军英中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所哈尔滨150001

从包含牛流行热病毒G蛋白基因的质粒pMD-G中克隆G1抗原表位区基因,亚克隆进表达载体pPIC9K,构建重组载体pPIC9K-G1,线性化后电转化毕赤酵母GS115,通过G418压力和PCR法筛选阳性重组酵母进行诱导表达。经SDS-PAGE、脱糖基化分析、Western ... 详细信息

从包含牛流行热病毒G蛋白基因的质粒pMD-G中克隆G1抗原表位区基因,亚克隆进表达载体pPIC9K,构建重组载体pPIC9K-G1,线性化后电转化毕赤酵母GS115,通过G418压力和PCR法筛选阳性重组酵母进行诱导表达。经SDS-PAGE、脱糖基化分析、Western blot、ELISA、兔体免疫实验和特异性分析,表明该基因在GS115中表达并进行了适度的糖基化,表达蛋白有良好的生物学活性和特异性,可作为包被抗原,开发ELISA诊断试剂盒。

关键词：牛流行热病毒 G1抗原表位毕赤酵母表达鉴定

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O型口蹄疫疫苗免疫牛抗体消长动态的LPB-ELISA检测

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中国兽医科学 2007年第9期37卷 787-790页

作者：魏孔福祁淑芸林密冯霞张峰马军武甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

分别按一次免疫、首免后第15 d加强免疫和首免后第60 d加强免疫程序,对3组试验牛(每组牛20头)用O型口蹄疫疫苗进行了免疫。免疫后不同时间点用液相阻断ELISA(LPB-ELISA)测定了免疫牛O型口蹄疫抗体效价。结果,首免后第15 d加强免疫牛和第... 详细信息

分别按一次免疫、首免后第15 d加强免疫和首免后第60 d加强免疫程序,对3组试验牛(每组牛20头)用O型口蹄疫疫苗进行了免疫。免疫后不同时间点用液相阻断ELISA(LPB-ELISA)测定了免疫牛O型口蹄疫抗体效价。结果,首免后第15 d加强免疫牛和第60 d加强免疫牛抗体水平较高,50%保护牛所占比例分别为56.3%和63.1%,完全受保护的牛所占比例分别为34.3%和29.5%。第60 d加强免疫牛的保护率要高于第15 d加强免疫牛和一次免疫牛的保护率。结果表明,首免后第60 d加强免疫是最理想的免疫程序。

关键词： O型口蹄疫液相阻断ELISA 抗体检测抗体消长

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应用BALB/c小鼠评价口蹄疫灭活疫苗的免疫效力

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中国兽医科学 2007年第12期37卷 1050-1052页

作者：智晓莹张永光吴润王永录潘丽方玉珍蒋守田张维德黄振华周鹏王占伟吕建亮刘力宽甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

用不同剂量的口蹄疫灭活疫苗免疫3组雌性BALB/c小鼠,同时设空白对照组,每组8只。免疫后每7 d采血一次,用液相阻断ELISA(LPB-ELISA)检测血清抗体水平;第28 d用800LD50同源强毒攻击,攻毒后36 h,每组随机选取3只BALB/c小鼠,采全血,分别用每... 详细信息

用不同剂量的口蹄疫灭活疫苗免疫3组雌性BALB/c小鼠,同时设空白对照组,每组8只。免疫后每7 d采血一次,用液相阻断ELISA(LPB-ELISA)检测血清抗体水平;第28 d用800LD50同源强毒攻击,攻毒后36 h,每组随机选取3只BALB/c小鼠,采全血,分别用每只BALB/c小鼠全血注射12只乳鼠,每组共注射36只乳鼠,以乳鼠试验判定BALB/c小鼠的病毒血症和攻毒保护情况。结果表明,免疫组BALB/c小鼠均可产生特异性抗体,保护率分别为75.0%、63.9%、36.1%;对照组小鼠血清抗体为阴性。提示,BALB/c小鼠可以用来评价口蹄疫灭活疫苗的免疫效力。

关键词：口蹄疫灭活疫苗 BALB/c小鼠免疫效力病毒血症

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AsiaⅠ口蹄疫病毒VP1蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第11期23卷 1034-1037页

作者：林彤常惠芸杜惠芬邵军军独军政丛国正中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 甘肃省雅华生物技术有限公司甘肃兰州730050

目的:制备AsiaI口蹄疫病毒VP1蛋白单克隆抗体(mAb)并进行鉴定。方法:用纯化的AsiaI型口蹄疫病毒VP1表位重组蛋白为抗原免疫6～8周龄的雌性BALB/c小鼠,经过3次免疫后,取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合。采用有限稀释法和间接ELISA克隆和... 详细信息

目的:制备AsiaI口蹄疫病毒VP1蛋白单克隆抗体(mAb)并进行鉴定。方法:用纯化的AsiaI型口蹄疫病毒VP1表位重组蛋白为抗原免疫6～8周龄的雌性BALB/c小鼠,经过3次免疫后,取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合。采用有限稀释法和间接ELISA克隆和筛选阳性杂交瘤细胞株,用SDS-PAGE电泳、间接ELISA以及微量细胞中和试验对所获得的mAb的特异性进行鉴定。结果:成功获得3株能稳定传代并分泌抗AsiaImAb的杂交瘤细胞株,分别命名为:1B8、5E1、5E2,其分泌的mAb为IgG1(1B8)和IgG2a(5E1、5E2)亚类,他们均能特异性的识别VP1重组蛋白和AsiaI型全病毒,其腹水效价在1:105～1:106。微量细胞中和试验表明该mAb能很好地识别灭活的FMDV,中和效价达1:1024以上。交叉试验表明该mAb具有高度特异性,型间无交叉反应,证明所获得的mAb均完全针对AsiaI FMDV抗原决定簇。结论:在口蹄疫病毒mAb的研究中,VP1重组蛋白有望代替活病毒来制备mAb。AsiaI口蹄疫病毒VP1mAb的成功制备,为进一步研究和开发新型口蹄疫的检测方法和抗原表位奠定了基础。

关键词： AsiaI型口蹄疫 VP1蛋白重组抗原单克隆抗体

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胸膜肺炎放线杆菌APX ⅢA基因的克隆及原核表达

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黑龙江畜牧兽医 2007年第11期 73-75页

作者：贺英逯忠新石琴赵萍储岳峰高鹏程中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus ***，APP）是引起猪传染性胸膜肺炎（porcine infectious pleuropneumonia）的病原菌。该菌为革兰阴性菌，根据其生长是否需要V因子（NAD，尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸）可将其分为2个生物型，即生物Ⅰ型... 详细信息

胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus ***，APP）是引起猪传染性胸膜肺炎（porcine infectious pleuropneumonia）的病原菌。该菌为革兰阴性菌，根据其生长是否需要V因子（NAD，尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸）可将其分为2个生物型，即生物Ⅰ型和生物Ⅱ型。生物Ⅰ型具有致病性。根据可溶性荚膜多糖（CPS）和脂多糖（LPS）的特性，可将生物Ⅰ型分为12个血清型。

关键词：胸膜肺炎放线杆菌原核表达 APX 猪传染性胸膜肺炎克隆基因革兰阴性菌生物型

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猪胸膜肺炎放线杆菌结构蛋白基因ApxIVA特异性片段的表达和纯化

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江西农业大学学报 2007年第2期29卷 246-249,256页

作者：石琴逯忠新贺英赵萍储岳峰高鹏程中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

以猪胸膜肺炎放线杆菌的血清8型分离株Hpn-405株基因组DNA为模板,PCR方法扩增ApxIVA特异性片段,PCR产物经纯化后与载体pMD18-T进行连接、转化,经酶切及序列分析鉴定后,亚克隆到原核表达载体pET-28a中,构建成重组表达质粒pET-ApxIVA3,转... 详细信息

以猪胸膜肺炎放线杆菌的血清8型分离株Hpn-405株基因组DNA为模板,PCR方法扩增ApxIVA特异性片段,PCR产物经纯化后与载体pMD18-T进行连接、转化,经酶切及序列分析鉴定后,亚克隆到原核表达载体pET-28a中,构建成重组表达质粒pET-ApxIVA3,转入到大肠埃希氏菌BL21(DE3)中,以IPTG进行诱导重组蛋白的表达,SDS-PAGE检测结果显示,表达的融合蛋白分子质量约为18 ku,与预期片段大小相符;将经过超声破碎的菌液离心取沉淀经尿素洗涤溶解后用镍金属螯合层析柱进行纯化。Western-blot分析证实,该融合蛋白具有免疫学活性。

关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌 ApxIVA,表达蛋白纯化

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我国禽衣原体病流行情况及防制措施

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中国家禽 2007年第10期29卷 26-27页

作者：周继章邱昌庆中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

禽衣原体病（avian chlamydiosis，AC）是由鹦鹉热嗜性衣原体（Chlamydophila psittaci）感染禽类引起的一种接触性传染病。同义名有鹦鹉热、鸟疫，前者指鹦鹉感染的AC；后者主要指鹦鹉以外的鸟类感染的AC。实际上，从鹦鹉及非鹦鹉鸟类... 详细信息

禽衣原体病（avian chlamydiosis，AC）是由鹦鹉热嗜性衣原体（Chlamydophila psittaci）感染禽类引起的一种接触性传染病。同义名有鹦鹉热、鸟疫，前者指鹦鹉感染的AC；后者主要指鹦鹉以外的鸟类感染的AC。实际上，从鹦鹉及非鹦鹉鸟类分离出的致病性衣原体株可以交叉感染，引起同样的疾病。AC是一种全球性疫病，几乎所有的禽种均可自然感染衣原体。

关键词：衣原体病禽类防制措施流行情况交叉感染接触性传染病鹦鹉热自然感染

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丝状支原体山羊亚种抗体间接血凝检测方法的建立及应用

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畜牧与兽医 2007年第10期39卷 64-66页

作者：储岳峰逯忠新赵萍高鹏程贺英石琴中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

将丝状支原体山羊亚种PG3株经超声波破碎处理后的产物致敏经戊二醛和鞣酸处理过的绵羊红细胞,建立了检测丝状支原体山羊亚种抗体的间接血凝试验方法。抗原致敏红细胞的最佳浓度是100～125μg/mL,超免血清抗体效价达1:512～1:1024。免疫... 详细信息

将丝状支原体山羊亚种PG3株经超声波破碎处理后的产物致敏经戊二醛和鞣酸处理过的绵羊红细胞,建立了检测丝状支原体山羊亚种抗体的间接血凝试验方法。抗原致敏红细胞的最佳浓度是100～125μg/mL,超免血清抗体效价达1:512～1:1024。免疫山羊2周后血清抗体检出率为83.3%,对羊布氏杆菌、绵羊肺炎支原体阳性血清检测均为阴性,敏感性明显高于琼脂扩散试验。对628份田间血清进行检测,阳性率为44.9%。结果表明,该法敏感性较高、特异性强和重复性好,可用于山羊传染性胸膜肺炎免疫抗体水平的监测和流行病学调查。

关键词：丝状支原体山羊亚种间接血凝试验抗体检测

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O型口蹄疫病毒OA58株3C基因的克隆与真核表达

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中国兽医科学 2007年第1期37卷 20-23页

作者：刘萍丛国正杨孝朴沈小燕邵军军独军政林彤王光华易华山常惠芸谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

利用RT-PCR技术扩增获得了长度约640 bp的口蹄疫病毒目的基因,回收片段后与pMD18-T载体进行连接,测序结果表明获得了口蹄疫病毒3C基因。将重组质粒pMD18-3C与表达载体pEGFP-N1分别用BamHⅠ+XhoⅠ双酶切后,进行定向亚克隆,对重组表达质粒... 详细信息

利用RT-PCR技术扩增获得了长度约640 bp的口蹄疫病毒目的基因,回收片段后与pMD18-T载体进行连接,测序结果表明获得了口蹄疫病毒3C基因。将重组质粒pMD18-3C与表达载体pEGFP-N1分别用BamHⅠ+XhoⅠ双酶切后,进行定向亚克隆,对重组表达质粒pEGFP-3C进行PCR、酶切鉴定及DNA测序,结果表明重组表达质粒所含的3C基因读码框正确。用pEGFP-3C转染BHK-21细胞,荧光显示目的基因EGFP发出绿色荧光;对3C转录的mRNA进行RT-PCR鉴定,证实3C基因在BHK-21细胞中得到了表达。

关键词：口蹄疫病毒 3C基因真核表迭

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