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动物医学进展 2007年第11期28卷 71-74页

作者：颜新敏张强中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学开放实验室甘肃兰州730046

负链RAN病毒的反向遗传系统建立以后,非节段负链RNA病毒作为疫苗载体的研究取得了重要进展。文章从病毒载体的构建策略、插入基因在载体中的位置、插入片段的大小、数量以及外源基因的表达对载体的毒性作用进行了综述;对外源糖蛋白整合... 详细信息

负链RAN病毒的反向遗传系统建立以后,非节段负链RNA病毒作为疫苗载体的研究取得了重要进展。文章从病毒载体的构建策略、插入基因在载体中的位置、插入片段的大小、数量以及外源基因的表达对载体的毒性作用进行了综述;对外源糖蛋白整合到病毒粒子上对载体的影响,通过不同的方法和途径来提高载体疫苗的免疫效果方面进行阐述。

关键词：非节段负链RNA病毒病毒疫苗载体

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猪传染性胸膜肺炎放线杆菌毒素、外膜脂蛋白的表达及重组蛋白的纯化

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动物医学进展 2007年第12期28卷 24-27页

作者：贺英逯忠新石琴赵萍储岳峰高鹏程中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

将构建保存的重组表达质粒pET-ApxⅠA、pET-ApxⅢA和pPRoAppOML-1用IPTG诱导表达,选择最佳的表达条件为IPTG 1.0 mmol/L,温度为37℃,表达时间为8 h,表达产物用SDS-PAGE鉴定,分别表达41、414、5 ku的蛋白,与预期蛋白大小一致。将表达产... 详细信息

将构建保存的重组表达质粒pET-ApxⅠA、pET-ApxⅢA和pPRoAppOML-1用IPTG诱导表达,选择最佳的表达条件为IPTG 1.0 mmol/L,温度为37℃,表达时间为8 h,表达产物用SDS-PAGE鉴定,分别表达41、414、5 ku的蛋白,与预期蛋白大小一致。将表达产物用试剂盒进行纯化,得到较好的目的条带,并对其进行Western blot检测,经过分析,pET-ApxⅠA、pET-ApxⅢA表达产物具有较好的免疫反应性。

关键词：猪传染性胸膜肺炎放线杆菌表达纯化免疫反应性

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抗O型口蹄疫病毒单克隆抗体的制备及其生物学特性分析

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中国兽医科学 2007年第3期37卷 227-231页

作者：林彤杜惠芬吴海波邵军军独军政丛国正常惠芸甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 甘肃省医学科学院医学生物技术中心甘肃兰州730050 浙江省医学科学院生物工程研究所浙江杭州310013 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

用灭活O型口蹄疫病毒为抗原免疫BALB/c小鼠4次后,取致敏的脾B淋巴细胞和SP2/0小鼠骨髓瘤细胞进行融合,在HAT选择培养基中培养2周,经间接ELISA法筛选,最终获得了3株抗O型FMDV的阳性杂交瘤细胞株,命名为2F1、2G7和6H4。血清学试验证明该Mc... 详细信息

用灭活O型口蹄疫病毒为抗原免疫BALB/c小鼠4次后,取致敏的脾B淋巴细胞和SP2/0小鼠骨髓瘤细胞进行融合,在HAT选择培养基中培养2周,经间接ELISA法筛选,最终获得了3株抗O型FMDV的阳性杂交瘤细胞株,命名为2F1、2G7和6H4。血清学试验证明该McAbs能与FMDV抗原结合,具有高度特异性。

关键词：口蹄疫病毒单克隆抗体生物学特性

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禽流感病毒H5N2亚A/Chicken/Gansu/2003株HA+NA基因重组腺病毒的构建

禽流感病毒H5N2亚A/Chicken/Gansu/2003株HA+NA基因重组腺病毒的...

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2007年中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会学术研讨会

作者：李宝玉殷相平李学瑞兰喜杨斌方玉萍柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开发实验室兰州 730046

目的：基于腺病毒可感染禽类呼吸道和肠道上皮黏膜的特性，本文构建了包含有禽流感病毒H5N2亚型HA和NA基因的重组腺病毒，为进一步研制口服禽流感活载体疫苗奠定基础。方法：通过RT-PCR方法分别扩增出AIV的HA和NA全基因片段，利用... 详细信息

目的：基于腺病毒可感染禽类呼吸道和肠道上皮黏膜的特性，本文构建了包含有禽流感病毒H5N2亚型HA和NA基因的重组腺病毒，为进一步研制口服禽流感活载体疫苗奠定基础。方法：通过RT-PCR方法分别扩增出AIV的HA和NA全基因片段，利用拼接接头将HA和NA定向串联并插入到腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV之中，然后在大肠杆菌中实现腺病毒骨架载体pAdEasy-1和重组腺病毒穿梭载体的同源重组，获得插有外源基因的重组腺病毒质粒，进而通过转染HEK293细胞，得到含有目的基因HA和NA的重组腺病毒。结果:在pAdTrack-CMV载体中成功克隆了HA+NA双基因，并与腺病毒骨架载体在大肠杆菌中实现了同源重组;线性化后的重组腺病毒质粒转染HEK293细胞后可观察到典型的细胞病变和绿色荧光蛋白的表达。结论:成功获得了含有HA+NA双基因重的组腺病毒，为口服活载体疫苗的研制提供了依据。

关键词：禽流感病毒重组腺病毒同源重组

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口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC基因重组杆状病毒的构建与表达

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甘肃农业大学学报 2007年第4期42卷 5-10页

作者：马江涛卢曾军曹轶梅郭慧琛郭建宏祝秀梅刘在新杨孝朴甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州7300761 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

通过设计特异引物,扩增获得口蹄疫病毒3ABC编码区的目的基因片段,将其用SalI和NcoI双酶切后,与经同样处理的带有一段信号肽序列的穿梭质粒pMelBac-B连接,经筛选、鉴定及DNA序列分析后,获得重组质粒pMel-3ABC.将重组质粒与线性化的杆状... 详细信息

通过设计特异引物,扩增获得口蹄疫病毒3ABC编码区的目的基因片段,将其用SalI和NcoI双酶切后,与经同样处理的带有一段信号肽序列的穿梭质粒pMelBac-B连接,经筛选、鉴定及DNA序列分析后,获得重组质粒pMel-3ABC.将重组质粒与线性化的杆状病毒骨架Bac-N-Blue共转染Sf9昆虫细胞,通过噬斑筛选和PCR鉴定,获得了含有目的基因的重组杆状病毒.用重组病毒感染Sf9昆虫细胞,通过间接ELISA方法,检测细胞培养基上清液中表达的口蹄疫病毒抗原.结果表明,口蹄疫病毒基因片段3ABC正确克隆到杆状病毒载体上,重组病毒可在昆虫细胞中表达目的蛋白.

关键词：口蹄疫病毒 3ABC基因杆状病毒 Sf9细胞

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口蹄疫病毒3C蛋白酶的结构及功能研究进展

口蹄疫病毒3C蛋白酶的结构及功能研究进展

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2007年中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会学术研讨会

作者：杨彬兰喜殷相平李学瑞李宝玉方玉萍柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州 730046

口蹄疫病毒能引起牛、羊等偶蹄动物发生高度接触性的传染病口蹄疫，该病常常影响着全球畜牧业的发展。 FMDV是小RNA病毒科口蹄疫病毒属的成员，口蹄疫病毒为单股正链RNA病毒，病毒基因组全长约8.5kb，基因组分为5'非编码区、3&#... 详细信息

口蹄疫病毒能引起牛、羊等偶蹄动物发生高度接触性的传染病口蹄疫，该病常常影响着全球畜牧业的发展。 FMDV是小RNA病毒科口蹄疫病毒属的成员，口蹄疫病毒为单股正链RNA病毒，病毒基因组全长约8.5kb，基因组分为5'非编码区、3'非编码区和一个开放阅读框(ORF)。基因组的中部是一大的开放阅读框，编码一多聚蛋白，多聚蛋白在翻译的同时，经二级裂解后，形成3种病毒结构蛋白(VP0，VP3，VP1)和8种非结构蛋白(L，2A，2B，2C，3A，3B，3C和3D)。其中3C全长639nt，编码213个氨基酸。3C蛋白酶是小RNA病毒的共同裂解酶，在多聚蛋白成熟过程中起着极为重要的作用，且在抗病毒药物打靶方面具有一定研究价值。因此，对3C蛋白酶的结构及功能研究进展进行综述很有必要。

关键词：蛋白酶口蹄疫病毒多聚蛋白

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基因芯片技术及口蹄疫病毒基因芯片研究进展

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动物医学进展 2007年第B08期28卷 37-40页

作者：王建东郭建宏杨春生刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室宁夏动物防疫站宁夏银川750001

口蹄疫的暴发与流行给世界各国的畜牧生产、社会经济和国际贸易构成严重威胁并造成巨大的经济损失,经典的血清学和PCR检测方法越来越不适应进出口动物检疫的快速、准确、高通量的要求。建立一种快速的诊断方法,使其在很短时间能够区别... 详细信息

口蹄疫的暴发与流行给世界各国的畜牧生产、社会经济和国际贸易构成严重威胁并造成巨大的经济损失,经典的血清学和PCR检测方法越来越不适应进出口动物检疫的快速、准确、高通量的要求。建立一种快速的诊断方法,使其在很短时间能够区别各血清型口蹄疫和其他水泡性疾病是非常必要的。口蹄疫病毒基因芯片包括155个寡核苷酸探针,总长35bp～45bp,设计在VP3-VP1-2A区,既有共有的病毒型别,也包含特异的血清型别。这项技术的优点是能在单一的芯片上检测多元病原体。

关键词：口蹄疫病毒基因芯片检测

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猪源冠状病毒ORF3和ORF7的克隆及特性分析

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甘肃农业大学学报 2007年第6期42卷 1-7页

作者：李建强柳纪省程杰兰喜胡永浩吴润殷相平李宝玉中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

参照GenBank中Purdue株全序列对TGEV(猪传染性胃肠炎病毒)TS株的ORF3和ORF7各设计1对特异性引物,经RT-PCR扩增分别获得了1 487 bp和516 bp大小的两个片段,与预期结果大小相符.TS株与CHV株、Puedue株、BW021898B株和KT2株的ORF3a核苷酸... 详细信息

参照GenBank中Purdue株全序列对TGEV(猪传染性胃肠炎病毒)TS株的ORF3和ORF7各设计1对特异性引物,经RT-PCR扩增分别获得了1 487 bp和516 bp大小的两个片段,与预期结果大小相符.TS株与CHV株、Puedue株、BW021898B株和KT2株的ORF3a核苷酸序列同源性分别为99.1%、93.0%、95.9%、94.4%,相应的氨基酸同源性分别为97.3%、87.8%、93.2%、91.8%,TS株与CHV株、Puedue株、BW021898B株和KT2株的ORF3b核苷酸序列同源性分别为99.5%、98.5%、97.0%、97.8%,相应氨基酸的同源性分别为98.4%、96.3%、94.3%、95.8%,而TS株与PRCVIA1894株的ORF3b核苷酸和氨基酸同源性分别为96.6%和93.9%.TS株ORF7没有发生缺失且和其他毒株有很高的同源性.结果表明:TGEV非结构蛋白高变区在ORF3a第192个碱基至终止密码子之间,TGEV和PRCV在编码ORF3b氨基酸的数量和RNA酶结合位点上有一定的差异.

关键词：猪源冠状病毒传染性胃肠炎病毒 ORF3 ORF7 克隆

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反义核酸技术及其在口蹄疫中的应用

反义核酸技术及其在口蹄疫中的应用

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2007年中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会学术研讨会

作者：韩晓荣柳纪省杨彬中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州 730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州 730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州 730046

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病。虽然传统疫苗已被广泛应用，但是免疫效果均不理想。随着分子生物学的迅速发展，反义核酸技术已成为基因治疗的一种重要方法，在口蹄疫的防治中有良好的前景。

关键词：反义核酸口蹄疫疫苗

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狂犬病毒复制策略研究进展

狂犬病毒复制策略研究进展

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2007年中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会学术研讨会

作者：殷相平李志勇李宝玉李学瑞杨彬兰喜柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州 730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州 730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州 730046

对狂犬病毒致病性有关的分子生物学进行阐明，特别是对狂犬病毒转录、基因表达和复制方面的准确调控进行详细的阐述，为进一步从分子水平上理解狂犬病毒的复制策略，为合理的研制狂犬病基因工程疫苗或病毒载体提供理论支持。

关键词：狂犬病毒干扰素细胞凋亡病毒复制

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