检索结果-内蒙古大学图书馆

生物技术通讯 2008年第2期19卷 290-292页

作者：周广青常惠芸邵军军中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

环介导等温扩增是一门新兴的分子生物学检测技术,因其具有特异性高、敏感性高、简单、快捷及不需要昂贵的仪器设备等特点,受到了生物医学研究者的高度关注。目前,该方法已经被广泛应用于各种病原微生物检测。简要综述了环介导等温扩增... 详细信息

环介导等温扩增是一门新兴的分子生物学检测技术,因其具有特异性高、敏感性高、简单、快捷及不需要昂贵的仪器设备等特点,受到了生物医学研究者的高度关注。目前,该方法已经被广泛应用于各种病原微生物检测。简要综述了环介导等温扩增技术的原理、特点,及其在病毒检测中的应用。

关键词：环介导等温扩增技术病毒检测

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整联蛋白结构及其功能研究进展

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生物技术通讯 2008年第1期19卷 101-104页

作者：高闪电独军政周建华常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

整联蛋白是广泛存在于真核细胞表面的完整的膜受体家族,包括由至少18种不同的α亚基及8种β亚基形成的20多种αβ异二聚体。整联蛋白配体主要有胶原蛋白、纤维结合蛋白、层粘连蛋白、玻连蛋白、血小板凝血酶敏感蛋白、胞间黏附分子、细... 详细信息

整联蛋白是广泛存在于真核细胞表面的完整的膜受体家族,包括由至少18种不同的α亚基及8种β亚基形成的20多种αβ异二聚体。整联蛋白配体主要有胶原蛋白、纤维结合蛋白、层粘连蛋白、玻连蛋白、血小板凝血酶敏感蛋白、胞间黏附分子、细胞反受体、补体蛋白,以及多种细菌和病毒蛋白,在介导血管内皮细胞和肿瘤细胞的黏附、淋巴细胞运输、肿瘤生长及感染等都有重要的作用。

关键词：整联蛋白受体配体结构与功能

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口蹄疫病毒受体骆驼β1亚基基因的克隆和分子特征

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浙江农业科学 2008年第1期49卷 112-116页

作者：高闪电独军政常惠芸周建华谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

首次从FMDV试验感染康复骆驼的舌皮和肺组织中克隆到了整联蛋白β1亚基的基因并对其核苷酸序列和推导的氨基酸序列以及蛋白结构进行了分析。骆驼整联蛋白β1亚基基因的编码区含有2 397个核苷酸,编码798个氨基酸残基,含有12个潜在的糖基... 详细信息

首次从FMDV试验感染康复骆驼的舌皮和肺组织中克隆到了整联蛋白β1亚基的基因并对其核苷酸序列和推导的氨基酸序列以及蛋白结构进行了分析。骆驼整联蛋白β1亚基基因的编码区含有2 397个核苷酸,编码798个氨基酸残基,含有12个潜在的糖基化位点(NXTX/NXSX)、2个表皮生长因子相似结构域和3个半胱氨酸丰富区。其信号肽由20个氨基酸组成,胞外域由708个氨基酸组成,跨膜区由29个氨基酸组成,胞浆域由41个氨基酸组成。骆驼β1基因与牛、猩猩、猫、犬、人、小鼠、鸡和猪的β1基因的核苷酸序列一致性分别为94.8%、94.8%、96.1%、94.7%、94.9%、89.9%、80.2%、95.7%,推导的氨基酸序列一致性分别为98.7%、94.8%、98.4%、97.5%、95.1%、94.1%、85.5%、98.9%。通过生物学软件分析发现β1亚基1-20位、729-757位氨基酸区段疏水性较强,分别是该亚基的信号肽和跨膜区。实验为进一步深入研究FMDV嗜性、与宿主细胞的相互作用、病毒的侵入机制等问题奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒受体骆驼整联蛋白β1基因分子特征

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连环恒温扩增技术研究进展

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实用诊断与治疗杂志 2008年第6期22卷 448-450页

作者：毕研丽沈小燕才学鹏丛国正中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州市730046

连环恒温扩增技术是针对靶基因的6个区域设计4种特异引物,利用一种链置换DNA聚合酶在恒温65℃左右保温几十分钟而完成的核酸扩增反应,通过检测反应过程中获得的副产品焦磷酸镁所形成白色沉淀的混浊度来判定扩增结果。由于其具有快速、... 详细信息

连环恒温扩增技术是针对靶基因的6个区域设计4种特异引物,利用一种链置换DNA聚合酶在恒温65℃左右保温几十分钟而完成的核酸扩增反应,通过检测反应过程中获得的副产品焦磷酸镁所形成白色沉淀的混浊度来判定扩增结果。由于其具有快速、简便、特异性好、成本低等优点,已经广泛应用于临床诊断、食品卫生检疫及基因芯片的开发;在细菌和病毒的检测方面对临床医学有重要意义。本文就连环恒温扩增的技术原理及其应用作一综述。

关键词：连环恒温扩增技术临床诊断

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狂犬病病毒CVS株核蛋白基因的原核表达、纯化及鉴定

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生物技术通报 2008年第3期24卷 103-106页

作者：李江涛李轶女殷相平邹媛媛张志芳柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046 中国农业科学院生物技术研究所北京100081

用RT-PCR技术对狂犬病病毒(RV)CVS株核蛋白(N)基因进行扩增,经克隆与序列分析,该基因编码450个氨基酸残基。将目的基因克隆到原核表达载体pET28a(+)中,构建了重组质粒pET-N,将其转化表达菌BL21(DE3),于37℃1.0mmol∕L IPTG条件下诱导表... 详细信息

用RT-PCR技术对狂犬病病毒(RV)CVS株核蛋白(N)基因进行扩增,经克隆与序列分析,该基因编码450个氨基酸残基。将目的基因克隆到原核表达载体pET28a(+)中,构建了重组质粒pET-N,将其转化表达菌BL21(DE3),于37℃1.0mmol∕L IPTG条件下诱导表达。大肠杆菌菌体裂解产物经SDS-PAGE电泳分析,在分子量约为54kD处出现一新蛋白带,和预期的目的蛋白的分子量相符。质谱鉴定的结果表明成功表达了RV N蛋白,为狂犬病的进一步研究奠定了基础。

关键词：狂犬病病毒核蛋白原核表达

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口蹄疫病毒双效疫苗载体的构建及其体外表达研究

口蹄疫病毒双效疫苗载体的构建及其体外表达研究

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首届中国兽药大会暨中国畜牧兽医学会动物药品学分会2008年学术年会

作者：杨彬兰喜殷相平李学瑞李宝玉方玉萍柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室／农业部畜禽病毒学重点开放实验室，甘肃兰州 730046

用RT-PCR法获得了针对口蹄疫病毒(FMDV)基因组5'非编码区内包含病毒复制起始元件的基因片段ASCN及其结构蛋白VP1基因，将其分别克隆至双顺反子表达载体pIRES中，构建成了双表达质粒pASCN-IR-VP1经酶切、PCR及DNA测序分析表明ASCN及... 详细信息

用RT-PCR法获得了针对口蹄疫病毒(FMDV)基因组5'非编码区内包含病毒复制起始元件的基因片段ASCN及其结构蛋白VP1基因，将其分别克隆至双顺反子表达载体pIRES中，构建成了双表达质粒pASCN-IR-VP1经酶切、PCR及DNA测序分析表明ASCN及VP1基因已正确地插入到pIRES中，编码序列及插入方向均正确。用脂质体介导法将双效表达质粒导入BHK-21细胞后，经RT-PCR、实时荧光定量PCR检测表明双效表达质粒中的ASCN在细胞中得到了有效转录，mRNA的表达量达到了1.27x106个拷贝/μL。;经夹心ELISA及间接免疫荧光标记等试验表明VP1结构蛋白基因在BHK-21细胞中得到了表达，具有良好的生物学活性。双效质粒pASCN-IR-VPI转染IBRS-2细胞24h后，按100TCID50/0.1mL的量接FMDVOMⅢ毒，结果该质粒能够明显地抑制FMDV的复制，使病变时间推迟约16～18h，接毒48h时的抑制率达到60％以上，蚀斑减少试验也证实了该双效质粒的病毒抑制作用。研究结果表明成功构建了FMDV双效表达载体，为进一步研究双效疫苗免疫效力提供了前期基础。

关键词：口蹄疫病毒反义RNA pIRES 双效疫苗载体疫苗免疫效力实时荧光定量PCR检测

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口蹄疫病毒双效疫苗载体的构建及其体外表达研究

口蹄疫病毒双效疫苗载体的构建及其体外表达研究

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第二届全国人畜共患病学术研讨会

作者：杨彬兰喜殷相平李学瑞李宝玉方玉萍柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室

用RT-PCR法获得了针对口蹄疫病毒（FMDV）基因组5′非编码区内包含病毒复制起始元件的基因片段ASCN及其VP1结构蛋白基因,将其分别克隆至双顺反子表达载体pIPES中,构建成了双表达质粒pASCN-IR-VP1,经酶切、PCR及DNA测序分析表明ASCN及VP... 详细信息

用RT-PCR法获得了针对口蹄疫病毒（FMDV）基因组5′非编码区内包含病毒复制起始元件的基因片段ASCN及其VP1结构蛋白基因,将其分别克隆至双顺反子表达载体pIPES中,构建成了双表达质粒pASCN-IR-VP1,经酶切、PCR及DNA测序分析表明ASCN及VP1基因已正确地插入到pIPES中,编码序列及插入方向均正确。用脂质体介导法将双效表达质粒导入BHK-21细胞后,经RT-PCR、实时荧光定量PCR检测表明双效表达质粒中的ASCN在细胞中得到了有效转录,mRNA的表达量达到了1.27×10～6个拷贝/μL;经夹心ELISA及间接免疫荧光标记等试验表明VP1结构蛋白基因在BHK-21细胞中得到了表达,具有良好的生物学活性。双效质粒pASCN-IR-VP1转染IBRS-2细胞24h后,按100TCID/0.1mL的量接FMDV OMⅢ毒,结果该质粒能够明显地抑制FMDV的复制,使病变时间推迟约16～18h,接毒48h时的抑制率达到60%以上,蚀斑减少试验也证实了该双效质粒的病毒抑制作用。研究结果表明成功构建了FMDV双效表达载体,为进一步研究双效疫苗免疫效力提供了前期基础。

关键词：口蹄疫病毒反义RNA pIRES 双效疫苗

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脉冲放电杀菌技术在动物疫苗制备中的展望

脉冲放电杀菌技术在动物疫苗制备中的展望

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中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会

作者：周继章中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室

灭活疫苗在预防动物传染病中起着巨大的作用,但是灭活疫苗所使用的灭活剂容易在动物源性食品中残留,容易污染环境,不利于健康。高压脉冲电场能使病原体快速死亡,并且不污染环境。若将高压脉冲电场用于动物传染病疫苗的灭活,将会对疫苗... 详细信息

灭活疫苗在预防动物传染病中起着巨大的作用,但是灭活疫苗所使用的灭活剂容易在动物源性食品中残留,容易污染环境,不利于健康。高压脉冲电场能使病原体快速死亡,并且不污染环境。若将高压脉冲电场用于动物传染病疫苗的灭活,将会对疫苗的灭活带来革新,有望为人类提供绿色动物源性食品,保护人类健康。

关键词：脉冲电场病原体灭活

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H9N2亚型禽流感病毒NA基因的原核表达及其免疫反应性分析

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甘肃农业大学学报 2008年第3期43卷 29-32页

作者：易华山侯顺利独军政胡永浩包世俊常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

采用PCR方法扩增H9N2亚型禽流感病毒A/Ck/GS/2/99株NA基因(1 400 bp),克隆至pET-28a(+)载体上,构建重组原核表达载体pET-NA,转化***21(DE3)感受态细胞,以终浓度0.8 mmol/L的IPTG诱导表达8 h.表达产物经SDS-PAGE和Western-blot分析表明:... 详细信息

关键词：禽流感血凝素原核表达 H9N2 免疫反应性

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检测猪血清口蹄疫病毒非结构蛋白3AB抗体ELISA方法的建立

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甘肃农业大学学报 2008年第1期43卷 33-37页

作者：祝秀梅卢曾军胡永浩曹轶梅马江涛刘在新甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

用大肠杆菌表达的FMDV NSP 3AB经纯化后作为抗原,建立了3AB间接ELISA方法,该方法可用于判定被检动物是否感染了口蹄疫病毒.重组口蹄疫病毒非结构蛋白3AB作为检测抗原包被酶标板反应孔,以兔抗猪IgG/HRP酶结合物作为第2抗体,建立了抗非结... 详细信息

用大肠杆菌表达的FMDV NSP 3AB经纯化后作为抗原,建立了3AB间接ELISA方法,该方法可用于判定被检动物是否感染了口蹄疫病毒.重组口蹄疫病毒非结构蛋白3AB作为检测抗原包被酶标板反应孔,以兔抗猪IgG/HRP酶结合物作为第2抗体,建立了抗非结构蛋白抗体检测的方法.用该方法检测了大量不同背景的猪血清,并与3ABC-I-ELISA检测结果进行比较.结果表明:3AB-I-ELISA和3ABC-I-ELISA的总符合率为98.9%,而且3AB-I-ELISA的特异性高于3ABC-I-ELISA.

关键词： 3AB-I-ELISA 3ABC-I-ELISA 口蹄疫病毒非结构蛋白3AB

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