检索结果-内蒙古大学图书馆

兰州理工大学学报 2008年第2期34卷 70-73页

作者：袁毅君袁惠君蒲晓亚田生明柳纪省天水师范学院生命科学与化学学院甘肃天水741001 兰州理工大学生命科学与工程学院甘肃兰州730050 甘肃省产品质量监督检验东部分中心甘肃天水741001 天水市第十中学甘肃天水741001 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验毫农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

建立一种兔心房组织来源的非心肌细胞体外培养模型,为心血管药理实验、病毒学实验及组织工程的研究提供实验平台.无菌条件下取兔心房壁组织,将组织分离成2 mm×1 mm小块,采用植块法以5行4列的形式种植于培养瓶中,加入M199或MEM培养... 详细信息

建立一种兔心房组织来源的非心肌细胞体外培养模型,为心血管药理实验、病毒学实验及组织工程的研究提供实验平台.无菌条件下取兔心房壁组织,将组织分离成2 mm×1 mm小块,采用植块法以5行4列的形式种植于培养瓶中,加入M199或MEM培养基对兔心房组织进行原代培养.待长成单层时胰酶消化收集细胞,并进行传代培养和细胞冻存.该方法获得了大量活力良好的兔心房壁组织来源的非心肌细胞,倒置镜下观察细胞多呈短梭形,以及少量的三角形、柱形和卵圆形细胞,细胞核部位隆突,胞浆均匀清亮.经体外传代培养至16代,冷冻复苏以后,细胞仍生长良好.

关键词：兔非心肌细胞体外培养

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表达狂犬病毒糖蛋白和核蛋白的重组腺病毒的生物学特性及免疫研究

表达狂犬病毒糖蛋白和核蛋白的重组腺病毒的生物学特性及免疫研究

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首届中国兽药大会——兽医生物制品学、兽医微生物学学术论坛

作者：殷相平李志勇李学瑞李宝玉兰喜杨彬柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃农业大学动物医学院

将含有狂犬病毒G+N的重组穿梭质粒pAdTrack-CMV/G+N与腺病毒骨架载体pAdEasy-1在大肠杆菌细胞内同源重组,获得带有目的基因的重组腺病毒载体pAd/G+N。将重组腺病毒载体经PacⅠ酶切后转染HEK-293细胞获得带有目的基因的重组腺病毒。重组... 详细信息

将含有狂犬病毒G+N的重组穿梭质粒pAdTrack-CMV/G+N与腺病毒骨架载体pAdEasy-1在大肠杆菌细胞内同源重组,获得带有目的基因的重组腺病毒载体pAd/G+N。将重组腺病毒载体经PacⅠ酶切后转染HEK-293细胞获得带有目的基因的重组腺病毒。重组腺病毒在HEK-293细胞中连续传代15代次,病毒在细胞的病变时间缩短在20h以内。经测定,重组腺病毒对HEK-293细胞的TCID达10/ml。用RT-PCR对重组腺病毒进行检测,可以检测到狂犬病毒糖蛋白和核蛋白基因片段。重组腺病毒经口服免疫小白鼠,21天后用狂犬病毒CVS毒株进行脑内攻击,观察10天,免疫保护率达60%。

关键词：狂犬病毒重组腺病毒生物学特性免疫

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狂犬病毒CVS株G基因和IFN-a基因共表达重组腺病毒载体的构建

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甘肃农业大学学报 2008年第6期43卷 1-5页

作者：李江涛殷相平柳纪省胡永浩中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 湖州市农业科学研究院浙江湖州313000 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

通过RT-PCR方法扩增得到狂犬病毒G基因,PCR方法得到IFN-Αa基因并亚克隆入pIRES获得pIRES-a质粒.双酶切G基因和pIRES-a质粒并回收目的基因与腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV连接,再与pAdEasy-1质粒在BJ5183菌中同源重组产生腺病毒载体质粒.... 详细信息

通过RT-PCR方法扩增得到狂犬病毒G基因,PCR方法得到IFN-Αa基因并亚克隆入pIRES获得pIRES-a质粒.双酶切G基因和pIRES-a质粒并回收目的基因与腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV连接,再与pAdEasy-1质粒在BJ5183菌中同源重组产生腺病毒载体质粒.线性化后的重组腺病毒质粒转染人胚肾293细胞,通过观察报告基因绿色荧光蛋白的表达鉴定重组的腺病毒.结果表明:该重组病毒质粒经酶切鉴定与预期结果一致;转染293细胞后观察到绿色荧光蛋白的表达,说明成功构建了G和IFN-a双基因共表达重组腺病毒载体.

关键词：狂犬病病毒G基因 IFN—a基因内部核糖体进入位点序列重组腺病毒

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一例绵羊痘的PCR诊断

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甘肃畜牧兽医 2008年第5期38卷 8-9页

作者：董建斌董建华颜新敏吴国华李健朱海霞朱彩珠张强肃南县皇城镇东滩兽医站甘肃肃南7340312 肃南裕固族自治县畜牧兽医工作站中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学开放实验室

采取临床疑似患绵羊痘病绵羊的皮肤、肺脏等组织病料,提取DNA,用建立的多重PCR方法进行检测,两对引物均从病料中扩增出了与预期片段大小一致的两条带。PCR检测快速,便捷,可在基层兽医实验室推广应用。

关键词：绵羊痘 PCR 诊断

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龙河牌84消毒液杀灭口蹄疫病毒效果的试验

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畜牧兽医科技信息 2008年第7期24卷 113-113页

作者：朱海霞李健家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室中国农业科学院兰州兽医研究所兰州730046

口蹄疫是一种由口蹄疫病毒感染引起的偶蹄动物，如牛、羊、猪、骆驼、鹿等共患的急性接触性传染病。口蹄疫病毒生命力很强，不怕干燥，但对酸碱敏感，80℃-100％也可杀灭它。通常用火碱、过氧乙酸、消特灵等药品对被污染的器具、动物舍... 详细信息

口蹄疫是一种由口蹄疫病毒感染引起的偶蹄动物，如牛、羊、猪、骆驼、鹿等共患的急性接触性传染病。口蹄疫病毒生命力很强，不怕干燥，但对酸碱敏感，80℃-100％也可杀灭它。通常用火碱、过氧乙酸、消特灵等药品对被污染的器具、动物舍或场地进行消毒。隔离、封锁、疫苗接种等方式可预防口蹄疫的发生，目前没有治疗该病的特效药。世界动物卫生组织将口蹄疫列为“A类动物传染病名单”中的首位。

关键词：口蹄疫病毒消毒液杀灭急性接触性传染病世界动物卫生组织试验毒效偶蹄动物

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检测AsiaⅠ型口蹄疫病毒的胶体金免疫层析法的建立及应用

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第11期23卷 1021-1024页

作者：蒋韬梁仲陈涓何继军吕律马维民刘在新刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

目的:建立一种快速、简便的检测AsiaⅠ型口蹄疫病毒(FMDV)的胶体金免疫层析法(GICA)。方法:采用柠檬酸钠还原法制备胶体金颗粒,用其标记纯化的AsiaⅠ型口蹄疫抗体后包被在玻璃纤维素膜上,另外将纯化的AsiaI型口蹄疫抗体和纯化的羊抗豚... 详细信息

目的:建立一种快速、简便的检测AsiaⅠ型口蹄疫病毒(FMDV)的胶体金免疫层析法(GICA)。方法:采用柠檬酸钠还原法制备胶体金颗粒,用其标记纯化的AsiaⅠ型口蹄疫抗体后包被在玻璃纤维素膜上,另外将纯化的AsiaI型口蹄疫抗体和纯化的羊抗豚鼠抗体分别包被在硝酸纤维素膜上,作为检测带与质控带。玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜按顺序组装成胶体金快速诊断试纸条,通过系列实验验证其灵敏度、特异性、重复性及稳定性。结果:研制的AsiaⅠ型口蹄疫快速检测试纸条对AsiaⅠ型口蹄疫病毒的检测灵敏度为0.116mg/L,对阳性样品进行重复性试验3次检测结果完全相同。交叉反应证实该方法与其他血清型口蹄疫抗原和猪水疱病抗原(SVD)无交叉反应。检测田间样品,GICA与反向间接血凝的定型的符合率为96.87%。稳定性实验证实试纸条可保存12个月。结论:建立的GICA是一种快速、灵敏、特异的FMD抗原检测方法,对基层现场具有广泛应用价值。

关键词： Asia I型口蹄疫病毒胶体金免疫层析法

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口蹄疫病毒Asia1/YNBS/58株全基因组序列分析

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病毒学报 2007年第5期23卷 407-411页

作者：常惠芸独军政丛国正邵军军林彤谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

The full-length genomic sequence of foot-and-mouth disease virus(FMDV) Asia1/YNBS/58 strain was determined by RT-PCR and compared with other 17 reference *** results showed that the complete genome of Asial/YNBS/58 was 8164nt long including a 1061-nt 5′untranslated region(UTR),a 6990-nt open reading frame(ORF),and a 113-nt 3′*** homology analysis indicated that the UTR regions and non-structural proteins were more conserved than the structural proteins in ***1 exhibited the lowest conservation and VP4 was exceptionally *** VP1-,VP2-,and VP3-based phylogenetic trees were divided into distinct clusters according to different serotypes,while the other gene-based phylogenetic trees exhibited some degree of intercross among *** study is the first description of the full-length genomic sequence of FMDV Chinese serotype Asia1.

关键词：口蹄疫病毒 Asia1/YNBs/58株基因组序列分析

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口蹄疫病毒受体猪源β6亚基基因的克隆和分子特征

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生物工程学报 2007年第5期23卷 924-929页

作者：高闪电独军政常惠芸丛国正邵军军易华山周建华谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

从FMDV试验感染康复猪的舌皮和肺组织中克隆到了整联蛋白β6亚基的基因并对其核苷酸序列和推导的氨基酸序列以及蛋白结构进行了分析,该基因已登录到GenBank中,登录号为EF432729。猪整联蛋白β6亚基基因的编码区含有2367个核苷酸,编码78... 详细信息

从FMDV试验感染康复猪的舌皮和肺组织中克隆到了整联蛋白β6亚基的基因并对其核苷酸序列和推导的氨基酸序列以及蛋白结构进行了分析,该基因已登录到GenBank中,登录号为EF432729。猪整联蛋白β6亚基基因的编码区含有2367个核苷酸,编码788个氨基酸残基,含有9个潜在的糖基化位点,3个氨基葡聚糖结合位点,一个依赖于cGMP的蛋白激酶磷酸化位点,10个蛋白激酶C磷酸化位点,2个表皮生长因子相似结构域和2个半胱氨酸丰富区。其信号肽由26个氨基酸组成,胞外域由681个氨基酸组成,跨膜区由29个氨基酸组成,胞浆域由52个氨基酸组成。从起始密码子开始,共有11个核苷酸发生了变化,其中2079位和2256位核苷酸的突变是同义突变,其余9位核苷酸的变化为错义突变。猪β6基因与猕猴、小鼠、挪威大鼠、犬、豚鼠、人、牛和羊的β6基因的核苷酸序列一致性分别为79.5%、84.9%、85.4%、85.2%、88.7%、90.1%、91.9%和91.9%,推导的氨基酸序列一致性分别为93.5%、88.2%、88.5%、88.3%、91.0%、92.8%、93.3%和93.4%。为进一步深入研究FMDV嗜性、与宿主细胞的相互作用、病毒的侵入机制等问题奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒受体猪整联蛋白β6基因分子特征

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牛流行热病毒G_1抗原表位基因在大肠杆菌中的表达、纯化及抗原性鉴定

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微生物学报 2007年第3期47卷 498-502页

作者：郑福英蔺国珍邱昌庆中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

从包含牛流行热病毒G蛋白基因的质粒pMD-G中克隆G1抗原表位区基因,与表达载体pGEX-4T-1连接,成功构建重组质粒pGEX-G1。重组质粒转化BL21(DE3),以IPTG进行诱导,并确定了最佳表达条件的IPTG浓度为0.1mmol/L、反应温度为16℃、诱导时间为... 详细信息

从包含牛流行热病毒G蛋白基因的质粒pMD-G中克隆G1抗原表位区基因,与表达载体pGEX-4T-1连接,成功构建重组质粒pGEX-G1。重组质粒转化BL21(DE3),以IPTG进行诱导,并确定了最佳表达条件的IPTG浓度为0.1mmol/L、反应温度为16℃、诱导时间为18h。可溶性表达的目的蛋白经Glutathione Sepharose TM4B介质纯化,纯度达80%;以包涵体形式存在的重组蛋白以2%的脱氧胆酸钠洗涤、0.5%的N-十二烷基肌氨酸钠溶解、透析复性、Glutathione Sepharose TM4B纯化后,纯度达85%以上。Western blot试验表明纯化的目的蛋白有良好的反应原性。经间接ELISA检测,测得牛流行热病毒12份阳性血清的OD490值平均为1.813±0.231,12份阴性血清的OD490值平均为0.359±0.032,差异极显著(P<0.01)。将重组蛋白作为抗原免疫兔子,试验兔均产生了高滴度的抗体,证实该蛋白有免疫原性。将目的蛋白作为包被抗原,测得8份狂犬病病毒阳性血清的OD490值平均为0.324±0.031,与所测12份阴性血清的OD490值接近,说明不存在交叉反应。以上结果均证实纯化后的重组蛋白有良好的生物学活性和特异性,可作为包被抗原,开发ELISA试剂盒。

关键词：牛流行热病毒 G1抗原表位基因大肠杆菌表达鉴定

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T7 RNA聚合酶表达系统的真核化及其偶联表达系统的建立

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生物工程学报 2007年第5期23卷 947-952页

作者：郑海学靳野尹双辉郭慧琛尚佑军白兴文刘湘涛谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室中国农业科学院研究生院北京100081

为了使T7RNA聚合酶(T7RNAP)表达系统真核化,首先,利用两种方法建立能够表达T7RNAP的真核细胞:(1)共转染表达T7RNAP的真核表达重组质粒于靶细胞;(2)利用稳定表达T7RNAP的BHK-21细胞系。然后,将FMDV内部核糖体进入位点(IRES)序列和增强型... 详细信息

为了使T7RNA聚合酶(T7RNAP)表达系统真核化,首先,利用两种方法建立能够表达T7RNAP的真核细胞:(1)共转染表达T7RNAP的真核表达重组质粒于靶细胞;(2)利用稳定表达T7RNAP的BHK-21细胞系。然后,将FMDV内部核糖体进入位点(IRES)序列和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因定向克隆进原核载体pET-40a-c(+)的T7启动子下游,得到的重组质粒pIERS-EGFP-E。用该质粒分别转染上述两种细胞,在紫外显微镜下都能够观察到绿色荧光,表明真核化的T7RNAP偶联表达系统建立。并利用流式细胞仪对偶联表达水平进行了分析。这为利用该系统真核高效表达外源蛋白奠定了坚实的基础。用实验证明了FMDV5′端含有IERS具有介导非帽依赖性的翻译的功能,为以IERS为基础的双顺反子表达系统的建立及深入研究IERS与相关蛋白的功能奠定了基础。T7RNAP偶联表达体系是一种良好的外源基因表达体系。

关键词：口蹄疫病毒 IERS T7RNA聚合酶表达系统偶联表达系统

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