检索结果-内蒙古大学图书馆

中国人兽共患病学报 2007年第8期23卷 829-835,800页

作者：周继章邱昌庆中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

衣原体是一类进化来源尚未明确、感染宿主广泛、致病表现复杂、介于细菌和病毒之间的革兰氏染色阴性微生物。对不同来源菌株的基因组测序发现,基因成分虽然只有微小的改变,但是感染宿主的种类和致病过程却呈现很大的差异。最近,美国学者... 详细信息

衣原体是一类进化来源尚未明确、感染宿主广泛、致病表现复杂、介于细菌和病毒之间的革兰氏染色阴性微生物。对不同来源菌株的基因组测序发现,基因成分虽然只有微小的改变,但是感染宿主的种类和致病过程却呈现很大的差异。最近,美国学者Everett等,应用基因测序、遗传发生树分析、特征序列鉴定、脉冲电场凝胶电泳(PFGE)和免疫印迹技术,[第一段]

关键词：衣原体分子生物学脉冲电场凝胶电泳免疫印迹技术致病过程革兰氏染色基因组测序基因成分

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口蹄疫病毒NSP 3ABC基因在昆虫细胞中的分泌表达及其活性检测

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生物工程学报 2007年第3期23卷 540-545页

作者：马江涛卢曾军曹轶梅郭慧琛郭建宏祝秀梅杨孝朴刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046 甘肃农业大学动物医学院

用设计的特异引物,扩增得到了N-端带有6×His编码序列的口蹄疫病毒完整3ABC基因序列,并将其亚克隆入带有蜂毒溶血肽序列的穿梭质粒pMelBac-B中,构建了重组质粒pMel-3ABC。将该重组质粒与杆状病毒骨架DNABac-N-BlueTM共转染Sf9昆虫细... 详细信息

用设计的特异引物,扩增得到了N-端带有6×His编码序列的口蹄疫病毒完整3ABC基因序列,并将其亚克隆入带有蜂毒溶血肽序列的穿梭质粒pMelBac-B中,构建了重组质粒pMel-3ABC。将该重组质粒与杆状病毒骨架DNABac-N-BlueTM共转染Sf9昆虫细胞,通过噬斑筛选和PCR鉴定,获得了含有目的基因的重组杆状病毒。重组病毒感染Sf9昆虫细胞,采用通过SDS-PAGE和Western blot检测,证明目的基因在昆虫细胞中得到了正确的表达,表达产物分泌至细胞培养上清中,并具有良好的生物活性。表达的目的蛋白经过镍柱亲和层析法纯化后,用间接ELISA方法检测与口蹄疫病毒感染动物血清的反应性,证明表达目的蛋白与感染动物血清有很好的反应性而与正常动物以及免疫动物血清不发生反应。该研究为建立一种更加敏感和特异的口蹄疫病毒感染动物与疫苗免疫动物的鉴别诊断方法奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒 3ABC基因杆状病毒分泌性表达

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丝状霉形体山羊亚种巢式PCR检测方法的建立

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中国兽医科学 2007年第11期37卷 940-943页

作者：储岳峰逯忠新赵萍高鹏程贺英中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

根据已发表的丝状霉形体簇各成员核苷酸序列,设计合成了2对引物McF、McR和MmcF、MmcR,建立了可以鉴别丝状霉形体山羊亚种(Mycoplasma ***,Mmc)的巢式PCR方法。特异性和敏感性试验结果显示,该方法只能对Mmc扩增出195 bp的片段,而对其他... 详细信息

根据已发表的丝状霉形体簇各成员核苷酸序列,设计合成了2对引物McF、McR和MmcF、MmcR,建立了可以鉴别丝状霉形体山羊亚种(Mycoplasma ***,Mmc)的巢式PCR方法。特异性和敏感性试验结果显示,该方法只能对Mmc扩增出195 bp的片段,而对其他病原菌不能扩增出任何条带,它最低能够检测出10 pg的Mmc DNA,说明该方法具有良好的特异性和很高的敏感性。田间试验结果显示,对4株霉形体分离株及其病料均可扩增出Mmc特异性片段,表明,该巢式PCR方法可用于Mmc快速鉴定和流行病学调查。

关键词：丝状霉形体山羊亚种巢式PCR 山羊传染性胸膜肺炎

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丝状霉形体山羊亚种血清抗体间接ELISA检测方法的建立

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中国兽医科学 2007年第10期37卷 859-862页

作者：赵萍逯忠新储岳峰高鹏程贺英石琴中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

利用丝状霉形体山羊亚种标准株PG3制备抗原,经纯化后作为包被抗原建立了间接ELISA方法,用于检测丝状霉形体山羊亚种血清抗体。经方阵滴定确定最佳抗原包被浓度为1.09μg/mL,血清样品最佳稀释度为1∶64,兔抗羊IgG辣根过氧化物酶结合物的... 详细信息

利用丝状霉形体山羊亚种标准株PG3制备抗原,经纯化后作为包被抗原建立了间接ELISA方法,用于检测丝状霉形体山羊亚种血清抗体。经方阵滴定确定最佳抗原包被浓度为1.09μg/mL,血清样品最佳稀释度为1∶64,兔抗羊IgG辣根过氧化物酶结合物的最佳稀释度为1∶40 000,抗原抗体最佳结合时间为1 h。判定标准为样品D490 nm值与标准阴性血清D490 nm值之比(P/N)≥3为阳性,≤2.5为阴性,介于二者之间的为可疑。重复性和稳定性试验证明,建立的间接ELISA的稳定性和重复性良好,与间接血凝试验相比,其敏感性较高。

关键词：间接ELISA 丝状霉形体山羊亚种血清抗体

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猪口蹄疫病毒受体β8亚基的基因克隆与分子特征

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畜牧兽医学报 2007年第11期38卷 1267-1272页

作者：独军政高闪电常惠芸丛国正邵军军林彤刘湘涛才学鹏谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

口蹄疫病毒利用整联蛋白作为病毒受体进入宿主细胞。本试验在国际上首次从口蹄疫病毒感染猪的舌皮组织中克隆到了β8亚基基因,并对其核苷酸序列和推导的氨基酸序列进行了比较分析。猪β8亚基基因的编码区含有2 304个核苷酸,编码767个氨... 详细信息

口蹄疫病毒利用整联蛋白作为病毒受体进入宿主细胞。本试验在国际上首次从口蹄疫病毒感染猪的舌皮组织中克隆到了β8亚基基因,并对其核苷酸序列和推导的氨基酸序列进行了比较分析。猪β8亚基基因的编码区含有2 304个核苷酸,编码767个氨基酸,其中信号肽由42个氨基酸组成,胞外域由637个氨基酸组成,含有7个潜在的糖基化位点(NXT/NXS)和49个半胱氨酸残基,跨膜区由30个氨基酸组成,胞浆域由58个氨基酸组成,猪β8基因与牛、人、犬、猕猴、家鼠和挪威大鼠的β8基因核苷酸序列同源性分别为94.3%、91.4%、91.7%、91.4%、83.5%、83.5%,推导的氨基酸序列同源性分别为95.0%、91.8%、92.8%、91.5%、84.0%、84.8%。猪与牛β8亚基同源性最高。猪β8亚基存在复杂多变的二级结构,其中1-42、680-709位氨基酸区段疏水性较强,形成表面蛋白结构的可能性较小,分别是该亚基的信号肽和跨膜区。本试验为进一步深入研究β8亚基在口蹄疫感染过程中所扮演的角色奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒受体猪β8基因分子特征

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猪水泡病病毒HK′1/70株基因组全长cDNA的构建及其序列测定

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病毒学报 2007年第1期23卷 51-56页

作者：郑海学刘湘涛尚佑军张淼涛冯霞白兴文吴锦艳吕建亮孙世琪尹双辉郭建宏谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 西北农林科技大学动物科学院陕西杨凌712100

从实验感染猪水泡病病毒(SVDV)的乳鼠组织中提取RNA,利用长距离的RACE技术,扩增出覆盖SVDVHK′1/70株全基因组的2个忠实性的cDNA重叠片段(3′PCR片段和5′PCR片段),分别克隆进pGEM-T Easy载体。利用AatⅡ和BssHⅡ酶切含5′PCR片段的重... 详细信息

从实验感染猪水泡病病毒(SVDV)的乳鼠组织中提取RNA,利用长距离的RACE技术,扩增出覆盖SVDVHK′1/70株全基因组的2个忠实性的cDNA重叠片段(3′PCR片段和5′PCR片段),分别克隆进pGEM-T Easy载体。利用AatⅡ和BssHⅡ酶切含5′PCR片段的重组质粒,回收目的片段,定向克隆于含3′PCR片段的重组质粒,构建出了SVDV HK′1/70株全长cDNA重组质粒,然后进行序列测定。结果表明,HK′1/70株基因组全基因组序列长7 401 nt(poly A除外),其中5′NCR长743 nt,该毒株蛋白编码区的核苷酸序列为6 558 nt,编码一个长2 185个氨基酸的聚合蛋白,3′NCR长102 nt,其后是至少含有74个A碱基的poly A尾。在HK′1/70株全长cDNA序列的5′端引入了T7启动子序列,在poly A3′端引入了Psp1406Ⅰ识别序列。通过序列同源性和进化树分析,结果表明,HK′1/70属于第Ⅱ抗原遗传群,SVDV与CB5的遗传关系最近,且位于CB5遗传进化树的分支上。HK′1/70株全长cDNA的序列测定及构建,为拯救SVDV和在分子水平进一步深入研究SVDV打下坚实的基础。

关键词：猪水泡病病毒 RACE 全长cDNA克隆分子克隆

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双峰驼口蹄疫病毒受体β6亚基基因的分子特征

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中国生物工程杂志 2007年第8期27卷 63-68页

作者：独军政常惠芸高闪电王景锋邵军军丛国正林彤才学鹏谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

病毒受体是病毒宿主范围和组织嗜性的一个决定因素。研究表明,4种整联蛋白αvβ1、αvβ3、αvβ6、αvβ8能够介导口蹄疫病毒感染偶蹄动物,且αvβ6是主要的口蹄疫病毒受体。首次从健康双峰驼肺组织中克隆到了β6亚基基因并进行了比较... 详细信息

病毒受体是病毒宿主范围和组织嗜性的一个决定因素。研究表明,4种整联蛋白αvβ1、αvβ3、αvβ6、αvβ8能够介导口蹄疫病毒感染偶蹄动物,且αvβ6是主要的口蹄疫病毒受体。首次从健康双峰驼肺组织中克隆到了β6亚基基因并进行了比较分析。结果显示,双峰驼β6基因的编码区含有2367个核苷酸,编码788个氨基酸残基,其中信号肽由26个氨基酸组成;胞外域由681个氨基酸组成,含有8个潜在的糖基化位点(NXT/NXS)和58个半胱氨酸(Cys)残基;跨膜区由29个氨基酸组成(708～736aa);胞浆域由52个氨基酸组成,含有一个NPLY核心基序和一个潜在的糖基化位点(NVT),该基因在GenBank中的登录号为EF613220。双峰驼β6基因与牛、猪、羊、人、小鼠、挪威大鼠β6基因的核苷酸序列同源性分别为91.1%、91.8%、90.6%、90.5%、83.7%、84.1%,推导的氨基酸序列同源性分别为94.3%、93.4%、93.4%、93.7%、88.7%、88.6%。偶蹄动物(双峰驼、牛、羊、猪)的β6基因同源性较高,在遗传进化树上同属于一个亚群,表明β6亚基可能与口蹄疫病毒的宿主范围有关。

关键词：口蹄疫病毒受体双峰驼β6基因分子特征

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基于FMDV IRES的双顺反子载体的构建及体外表达分析

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中国生物工程杂志 2007年第8期27卷 29-33页

作者：郑海学郭慧琛靳野刘湘涛谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室

利用RT-PCR扩增出口蹄疫病毒小核糖体进入位点(IRES)序列,并定向克隆进pcDNA3.1(+)载体,构建成双顺反子真核表达载体。为了验证该载体是否能够转录出双顺反子mRNA,在IRES起始密码(ATG)下游正确插入增强型的绿色荧光蛋白基因(egfp),把重... 详细信息

利用RT-PCR扩增出口蹄疫病毒小核糖体进入位点(IRES)序列,并定向克隆进pcDNA3.1(+)载体,构建成双顺反子真核表达载体。为了验证该载体是否能够转录出双顺反子mRNA,在IRES起始密码(ATG)下游正确插入增强型的绿色荧光蛋白基因(egfp),把重组质粒转染BHK-21细胞,培养20～48h,在紫外显微镜下观察,能够看到典型的绿色荧光,表明载体能够体能够利用FMDV的IRES能够介导非帽依赖性表达外源基因。并通过流式细胞仪,与同样是CMV启动转录egfp的pGFPN1质粒在细胞中的表达水平进行了比较。该载体的成功构建为体外表达双基因、双顺反子逆转录载体构建以及相关应用奠定基础,并有作为基因疫苗和标记定位基因治疗载体的潜力。

关键词：口蹄疫病毒 IRES 双顺反子双顺反子载体

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自杀性DNA疫苗

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中国兽医学报 2007年第1期27卷 142-144页

作者：孙世琪郭慧琛谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

基因疫苗与传统疫苗相比,具有许多优势:比较稳定,便于保存和运输;将抗原以天然的形式提供给免疫系统,可同时引起全面的体液免疫和细胞免疫应答;对不同亚型的病原体有交叉抵抗作用,没有减毒活疫苗毒力回复的危险性等。基因疫苗一出现,就... 详细信息

基因疫苗与传统疫苗相比,具有许多优势:比较稳定,便于保存和运输;将抗原以天然的形式提供给免疫系统,可同时引起全面的体液免疫和细胞免疫应答;对不同亚型的病原体有交叉抵抗作用,没有减毒活疫苗毒力回复的危险性等。基因疫苗一出现,就受到普遍关注,迅速成为疫苗研究领域的一大热点,甚至将其称为自传统疫苗、亚单位疫苗之后的第3代疫苗。在短短的十几年里,[第一段]

关键词：甲病毒复制于载体自杀性DNA疫苗基因疫苗

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牛口蹄疫病毒受体通用亚基αv的基因克隆及分子特征

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畜牧兽医学报 2007年第2期38卷 190-195页

作者：独军政常惠芸丛国正邵军军林彤高闪电刘湘涛才学鹏谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

研究发现,4种整联蛋白αvβ1、αvβ3、αvβ6、αvβ8能够介导口蹄疫病毒感染自然宿主,其中αv是4种受体的共用亚基。本试验对牛口蹄疫病毒受体通用亚基αv基因进行了克隆测序并对其编码蛋白的二级结构进行了预测。结果显示,牛αv亚基... 详细信息

研究发现,4种整联蛋白αvβ1、αvβ3、αvβ6、αvβ8能够介导口蹄疫病毒感染自然宿主,其中αv是4种受体的共用亚基。本试验对牛口蹄疫病毒受体通用亚基αv基因进行了克隆测序并对其编码蛋白的二级结构进行了预测。结果显示,牛αv亚基基因的编码区含有3147个核苷酸,编码1048个氨基酸,其中信号肽由30个氨基酸组成,胞外域由957个氨基酸组成,跨膜区由29个氨基酸组成,胞浆域由32个氨基酸组成;在890和891位氨基酸之间有1个蛋白酶裂解位点(KR-D);胞外域含有13个潜在的糖基化位点(NXT/NXS)、2个Ca2+结合位点[DX(D/N)XDGXXD]、18个半胱氨酸残基。该基因在GenBank中的登录号为DQ871215。牛αv基因与猕猴、家鼠、犬、人、鸡的αv基因的核苷酸序列同源性分别为91.0%、85.7%、90.1%、91.2%、73.1%,推导的氨基酸序列同源性分别为94.7%、91.6%、96.3%、95.0%、81.6%。牛αv亚基存在复杂多变的二级结构,这是其具有多种生物学功能的分子基础,其中1-30位、988-1017位氨基酸区段疏水性较强,形成表面蛋白结构的可能性较差,分别是该亚基的信号肽和跨膜区。本试验为进一步深入研究口蹄疫病毒与宿主细胞的相互关系奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒受体牛αv基因克隆分子特征

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