检索结果-内蒙古大学图书馆

细胞与分子免疫学杂志 2007年第11期23卷 1034-1037页

作者：林彤常惠芸杜惠芬邵军军独军政丛国正中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 甘肃省雅华生物技术有限公司甘肃兰州730050

目的:制备AsiaI口蹄疫病毒VP1蛋白单克隆抗体(mAb)并进行鉴定。方法:用纯化的AsiaI型口蹄疫病毒VP1表位重组蛋白为抗原免疫6～8周龄的雌性BALB/c小鼠,经过3次免疫后,取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合。采用有限稀释法和间接ELISA克隆和... 详细信息

目的:制备AsiaI口蹄疫病毒VP1蛋白单克隆抗体(mAb)并进行鉴定。方法:用纯化的AsiaI型口蹄疫病毒VP1表位重组蛋白为抗原免疫6～8周龄的雌性BALB/c小鼠,经过3次免疫后,取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合。采用有限稀释法和间接ELISA克隆和筛选阳性杂交瘤细胞株,用SDS-PAGE电泳、间接ELISA以及微量细胞中和试验对所获得的mAb的特异性进行鉴定。结果:成功获得3株能稳定传代并分泌抗AsiaImAb的杂交瘤细胞株,分别命名为:1B8、5E1、5E2,其分泌的mAb为IgG1(1B8)和IgG2a(5E1、5E2)亚类,他们均能特异性的识别VP1重组蛋白和AsiaI型全病毒,其腹水效价在1:105～1:106。微量细胞中和试验表明该mAb能很好地识别灭活的FMDV,中和效价达1:1024以上。交叉试验表明该mAb具有高度特异性,型间无交叉反应,证明所获得的mAb均完全针对AsiaI FMDV抗原决定簇。结论:在口蹄疫病毒mAb的研究中,VP1重组蛋白有望代替活病毒来制备mAb。AsiaI口蹄疫病毒VP1mAb的成功制备,为进一步研究和开发新型口蹄疫的检测方法和抗原表位奠定了基础。

关键词： AsiaI型口蹄疫 VP1蛋白重组抗原单克隆抗体

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

山羊痘病毒温度敏感株基因组DNA复制非必需区的筛选

引用

中国兽医科学 2007年第9期37卷 737-741页

作者：施程洪张强吴国华颜新敏鞠厚斌李健朱海霞朱彩珠谢芳韩若婵才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室

提取山羊痘病毒温度敏感株基因组DNA，用HindⅢ酶切，随机克隆到pUC18质粒中，限制性内切酶片段电泳分析和序列测定结果表明，克隆到4个不同大小的HindⅢ片段pUA、pUB、pUC和pUD。随后，将它们和羊痘病毒Pellor（AY077835）株进行了同... 详细信息

提取山羊痘病毒温度敏感株基因组DNA，用HindⅢ酶切，随机克隆到pUC18质粒中，限制性内切酶片段电泳分析和序列测定结果表明，克隆到4个不同大小的HindⅢ片段pUA、pUB、pUC和pUD。随后，将它们和羊痘病毒Pellor（AY077835）株进行了同源性比较，发现核苷酸同源性为90。0％～94．5％，氨基酸同源性为83．0％～91．4％。选取克隆或亚克隆后的单一酶切位点，插入P11P7.5-LacZ报告基因，构建了pUAl、pUBl、pUCl和pUDl共4个重组载体质粒。通过脂质体分别转染山羊痘病毒感染的BHK-21细胞，在X-gal存在条件下经蓝白斑筛选重组病毒，获得1株重组病毒，证明筛选出了1个复制非必需区片段。

关键词：山羊痘病毒非必需区基因克隆序列分析转染

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

口蹄疫病毒P12A-3C免疫原基因在百脉根中的遗传转化与表达

引用

中国人兽共患病学报 2007年第3期23卷 236-239,247页

作者：王炜张永光潘丽王永录方玉珍蒋守田张维德吕建亮孙元智晓莹黄振华刘力宽中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

目的利用植物反应器研究口蹄疫转基因植物疫苗是近些年来科学家研究的热点,本研究以豆科牧草百脉根为转化受体,将口蹄疫病毒P12A-3C基因通过根癌农杆菌介导法导入百脉根基因组。方法百脉根外植体经过浸菌,抗性培养基上愈伤、出芽和生根... 详细信息

目的利用植物反应器研究口蹄疫转基因植物疫苗是近些年来科学家研究的热点,本研究以豆科牧草百脉根为转化受体,将口蹄疫病毒P12A-3C基因通过根癌农杆菌介导法导入百脉根基因组。方法百脉根外植体经过浸菌,抗性培养基上愈伤、出芽和生根等阶段。结果最终获得了转基因抗性植株。结论对转基因植株进行PCR、RT-PCR检测,表明外源基因整合在植物染色体基因组,并且具有转录活性,ELISA检测表明,转基因植株表达出外源目的蛋白。

关键词：口蹄疫百脉根转基因植物疫苗

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

口蹄疫病毒P1+3CD基因重组腺病毒的构建

引用

中国人兽共患病学报 2007年第3期23卷 222-226页

作者：李志勇柳纪省张兴旺王辉殷相平兰喜李宝玉谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

目的构建包含有O型口蹄疫病毒(FMDV)强毒结构蛋白(P1)基因及弱毒非结构蛋白(3CD)基因的重组腺病毒,为进一步研制FMD活载体疫苗奠定基础。方法通过RT-PCR方法扩增得到含有FMDV P1、3CD编码区的目的基因。P1基因经BglⅡ和XhoⅠ,3CD基因经... 详细信息

目的构建包含有O型口蹄疫病毒(FMDV)强毒结构蛋白(P1)基因及弱毒非结构蛋白(3CD)基因的重组腺病毒,为进一步研制FMD活载体疫苗奠定基础。方法通过RT-PCR方法扩增得到含有FMDV P1、3CD编码区的目的基因。P1基因经BglⅡ和XhoⅠ,3CD基因经XhoⅠ和XbaⅠ双酶切后与经BglⅡ和XbaⅠ双酶切处理的腺病毒穿梭载体pAd Track-CMV连接。将获得的重组穿梭质粒与腺病毒骨架载体在大肠杆菌内同源重组获得重组腺病毒质粒。线性化后的重组腺病毒质粒转染293细胞,通过观测细胞病变及报告基因绿色荧光蛋白的表达鉴定重组的腺病毒。结果在pAd Track-CMV载体中成功克隆了P1+3CD基因,并与腺病毒骨架载体在大肠杆菌中实现了同源重组。线性化后的重组腺病毒质粒转染293细胞后可观测到典型的细胞病变与绿色荧光蛋白的表达。结论成功获得了含有FMD P1+3CD基因的重组腺病毒,为FMD活载体疫苗的研制提供了依据。

关键词：口蹄疫病毒 P1+3CD基因重组腺病毒

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

牛口蹄疫病毒受体通用亚基αv配体结合域的原核表达和多克隆抗体制备

引用

细胞与分子免疫学杂志 2007年第10期23卷 975-977页

作者：独军政常惠芸高闪电王光华王景锋丛国正邵军军林彤才学鹏谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

目的:利用原核细胞表达牛口蹄疫病毒受体通用亚基整联蛋白αv的配体结合域(LBD)片段,分离纯化目的蛋白后制备兔多克隆抗体。方法:以含有牛整联蛋白全长cDNA的质粒为模板PCR扩增得到位于αv成熟肽氨基端的LBD基因片段,经酶切消化处理后,... 详细信息

目的:利用原核细胞表达牛口蹄疫病毒受体通用亚基整联蛋白αv的配体结合域(LBD)片段,分离纯化目的蛋白后制备兔多克隆抗体。方法:以含有牛整联蛋白全长cDNA的质粒为模板PCR扩增得到位于αv成熟肽氨基端的LBD基因片段,经酶切消化处理后,与同样酶切处理的原核表达载体pPRoEXTMHTb相连,构建原核表达质粒pPRo/αvLBD,测序确认读码框正确后,将其转化感受态细胞BL21(DE3),以IPTG诱导表达αvLBD蛋白。通过SDS-PAGE鉴定后提取包涵体,以电泳分离纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。通过ELISA和Western blot鉴定血清效价和特异性。结果:成功构建了pPRo/αvLBD原核表达载体,实现了重组αvLBD蛋白在大肠杆菌中的高效表达,SDS-PAGE显示其Mr约为40000,主要以包涵体形式存在于菌体中。制备的兔多克隆抗体效价达1∶25600以上。以Western blot检测,该血清可与目的蛋白发生特异性反应,证明其具有良好的免疫原性。结论:实现了牛口蹄疫病毒受体通用亚基αvLBD的高效表达和高效价多克隆抗体的制备,为深入研究整联蛋白αv在口蹄疫病毒致病过程中的作用奠定基础。

关键词：牛口蹄疫病毒受体 αv配体结合域原核表达多克隆抗体

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

FMDV OA/58病毒株VP1蛋白结构构建与B细胞抗原表位的预测

引用

华北农学报 2007年第4期22卷 176-179页

作者：周建华丛国正高闪电常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

以口蹄疫病毒株OA/58 RNA为模板,反转录并扩增目的cDNA,然后与pGEM-T easy载体连接并转化JM109菌株,提取的重组质粒用凝胶电泳、PCR和EcoR I酶切法鉴定。运用同源模建得到OA/58 VP1蛋白3D结构,并结合理化性质、亲水性、可塑性和免疫原... 详细信息

以口蹄疫病毒株OA/58 RNA为模板,反转录并扩增目的cDNA,然后与pGEM-T easy载体连接并转化JM109菌株,提取的重组质粒用凝胶电泳、PCR和EcoR I酶切法鉴定。运用同源模建得到OA/58 VP1蛋白3D结构,并结合理化性质、亲水性、可塑性和免疫原性进行分析,预测OA/58 VP1的抗原表位。结果OA/58 VP1存在多个潜在的抗原表位位点,可能的蛋白质抗原表位区域:2～11,15～35,38～50,77～88,90～107,121～125,131～135,140～149,154～163,169～175,178～189,197～213。应用同源模建得到的OA/58 VP1蛋白3D模型来预测其B细胞表位,为进一步研究OA/58 VP1功能,构建突变体和选择表达新型OA/58 VP1蛋白分子提供有参考价值的信息。

关键词：口蹄疫病毒 VP1蛋白 B细胞抗原表位

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

口蹄疫病毒株OA/583C蛋白酶的结构模拟和功能分析

引用

华北农学报 2007年第6期22卷 9-13页

以口蹄疫病毒株OA/58 RNA为模板,反转录并扩增目的cDNA,然后与pGEM-TEasy载体连接并转化JM109菌株,提取的重组质粒用凝胶电泳、PCR和EcoRⅠ酶切法鉴定。该毒株与Poliovirus,Hepatitis Avirus和Human rhi-novirus 89毒株3C序列对比分析... 详细信息

以口蹄疫病毒株OA/58 RNA为模板,反转录并扩增目的cDNA,然后与pGEM-TEasy载体连接并转化JM109菌株,提取的重组质粒用凝胶电泳、PCR和EcoRⅠ酶切法鉴定。该毒株与Poliovirus,Hepatitis Avirus和Human rhi-novirus 89毒株3C序列对比分析发现核苷酸序列一致性分别为38.8%,37.1%和36.5%,氨基酸序列一致性分别为23.7%,19.2%和17.6%。通过Swiss-pdbViewer软件模拟出FMDVOA/58 3C蛋白酶的3D结构和表面模型。并鉴定出此毒株3C蛋白酶的活性中心为Cys31-His46-Asp84。

关键词：口蹄疫病毒 3C蛋白酶活性位点

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

口蹄疫病毒株OA/58 L蛋白酶的结构构建和功能分析

引用

华北农学报 2007年第4期22卷 172-175页

以口蹄疫病毒株OA/58 RNA为模板,反转录并扩增目的cDNA,然后与pGEM-T Easy载体连接并转化JM109菌株,提取的重组质粒用凝胶电泳、PCR和EcoR I酶切法鉴定。该毒株与A12,O1K,O1Campos和TW45/97毒株序列通过对比分析发现,L基因中有2个起始... 详细信息

以口蹄疫病毒株OA/58 RNA为模板,反转录并扩增目的cDNA,然后与pGEM-T Easy载体连接并转化JM109菌株,提取的重组质粒用凝胶电泳、PCR和EcoR I酶切法鉴定。该毒株与A12,O1K,O1Campos和TW45/97毒株序列通过对比分析发现,L基因中有2个起始密码子,第二个是首选;并且确定氨基酸保守区主要位于第35～39,43～54,65～67,75～80,90～111,113～142,144～146,148～157,159～172和176～187位。L蛋白酶含有球状区域,碳端有一柔性杆状结构。合成的L蛋白酶可形成二聚体结构。第144位的Lys、148位的His和163位的Asp可能是L蛋白酶的活性位点。保守区氨基酸残基在维持蛋白的空间构像和功能方面具有重要作用。由拉马钱德兰图可证明本试验构建L蛋白酶的空间结构是合理的,它对于进一步的研究具有指导性。

关键词：口蹄疫病毒 L蛋白酶活性位点

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

口蹄疫病毒受体猪源β1亚基基因的克隆和分子特征

引用

华北农学报 2007年第6期22卷 14-18页

作者：高闪电独军政常惠芸周建华谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

首次从FMDV试验感染康复猪的舌皮和肺组织中克隆到了整联蛋白β1亚基的基因并对其核苷酸序列和推导的氨基酸序列以及蛋白结构进行了分析。猪整联蛋白β1亚基基因的编码区含有2397个核苷酸，编码798个氨基酸残基，含有10个潜在的糖基化... 详细信息

首次从FMDV试验感染康复猪的舌皮和肺组织中克隆到了整联蛋白β1亚基的基因并对其核苷酸序列和推导的氨基酸序列以及蛋白结构进行了分析。猪整联蛋白β1亚基基因的编码区含有2397个核苷酸，编码798个氨基酸残基，含有10个潜在的糖基化位点（NXTX/NXSX），2个表皮生长因子相似结构域和3个半胱氨酸丰富区。其信号肽由20个氨基酸组成，胞外域由708个氨基酸组成，跨膜区由29个氨基酸组成，胞浆域由41个氨基酸组成。猪脚基因与牛、猩猩、猫、犬、人、小鼠和鸡的脚基因的核苷酸序列一致性分别为99．5％，90．0％，91．8％，90．7％，90．2％，86．5％和77．4％，推导的氨基酸序列一致性分别为99．9％，93．9％，97．5％，96．7％，94．2％，92．4％和94．9％。通过生物学软件分析发现β1亚基形成复杂的二、三级结构，其中1～20位、729～757位氨基酸区段疏水性较强，分别是该亚基的信号肽和跨膜区。为进一步深入研究FMDV嗜性、与宿主细胞的相互作用、病毒的侵入机制等问题奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒受体猪整联蛋白β1基因分子特征

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

用原位杂交技术对牛组织中FMDV RNA检测和定位

引用

畜牧兽医学报 2007年第12期38卷 1341-1344页

作者：邵军军常惠芸林彤丛国正独军政谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

采用原位杂交技术对6头试验牛易感染组织中的FMDVRNA进行了检测和定位。结果显示，接毒后7～28d4头牛舌上皮组织、7～21d的喉咽部有强阳性染色；接毒后35d的牛及正常对照牛舌上皮没有阳性染色；接毒牛及对照牛的扁桃体、淋巴结和蹄叉等... 详细信息

采用原位杂交技术对6头试验牛易感染组织中的FMDVRNA进行了检测和定位。结果显示，接毒后7～28d4头牛舌上皮组织、7～21d的喉咽部有强阳性染色；接毒后35d的牛及正常对照牛舌上皮没有阳性染色；接毒牛及对照牛的扁桃体、淋巴结和蹄叉等其他组织中均没有阳性染色，表明牛舌上皮和喉咽部上皮组织中感染了FMDV，本研究为进一步阐明FMDV在宿主体内的持续感染机理提供极有价值的线索。

关键词： FMDV 原位杂交牛

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：