检索结果-内蒙古大学图书馆

中国人兽共患病学报 2007年第12期23卷 1249-1251,1254页

作者：易华山侯顺利独军政常惠芸丛国正胡永浩中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046 甘肃农业大学动物医学院兰州730070

目的对禽流感病毒HA基因进行原核表达并对其产物进行免疫反应性分析。方法采用PCR方法扩增禽流感病毒A/Ck/GS/2/99(H9N2)的HA基因(1723bp);并将该片段克隆至pET-28a(+)质粒,构建重组质粒pET-HA,用该重组质粒转化***21(DE3)感受态细胞,... 详细信息

目的对禽流感病毒HA基因进行原核表达并对其产物进行免疫反应性分析。方法采用PCR方法扩增禽流感病毒A/Ck/GS/2/99(H9N2)的HA基因(1723bp);并将该片段克隆至pET-28a(+)质粒,构建重组质粒pET-HA,用该重组质粒转化***21(DE3)感受态细胞,以终浓度0.7mmol/L的IPTG诱导表达7h。结果成功构建了表达载体pET-HA,该载体能高效表达HA蛋白,相对分子质量约62kDa,在约62kDa处出现一条明显的特异性蛋白条带。结论成功表达了禽流感病毒HA蛋白,该蛋白纯化产物能与H9亚型的AIV鸡血清发生特异性反应。

关键词：禽流感血凝素 H9N2 原核表达免疫反应性

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猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体间接ELISA方法的建立

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生物工程学报 2007年第5期23卷 961-966页

作者：王光华独军政丛国正邵军军林彤薛慧文常惠芸谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046 甘肃农业大学动物医学院兰州730076

将口蹄疫病毒(FMDV)的VP1基因,通过pPROex-HT表达载体在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达,获得大小为31ku的融合蛋白,Westernblot检测证实表达的该蛋白具有良好的生物学活性。以纯化的融合蛋白为抗原建立了猪FMDVVP1蛋白间接ELISA检测方法... 详细信息

将口蹄疫病毒(FMDV)的VP1基因,通过pPROex-HT表达载体在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达,获得大小为31ku的融合蛋白,Westernblot检测证实表达的该蛋白具有良好的生物学活性。以纯化的融合蛋白为抗原建立了猪FMDVVP1蛋白间接ELISA检测方法。通过对80份田间血清样品的检测表明,该方法与FMDV液相阻断ELISA(国标试剂盒)的总符合率为96.25%,表明建立的VP1蛋白间接ELISA检测方法具有很好的特异性和敏感性。

关键词：口蹄疫病毒抗体 VP1蛋白间接ELISA

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O型口蹄疫病毒OA58株3C基因的克隆与真核表达

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中国兽医科学 2007年第1期37卷 20-23页

作者：刘萍丛国正杨孝朴沈小燕邵军军独军政林彤王光华易华山常惠芸谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

利用RT-PCR技术扩增获得了长度约640 bp的口蹄疫病毒目的基因,回收片段后与pMD18-T载体进行连接,测序结果表明获得了口蹄疫病毒3C基因。将重组质粒pMD18-3C与表达载体pEGFP-N1分别用BamHⅠ+XhoⅠ双酶切后,进行定向亚克隆,对重组表达质粒... 详细信息

利用RT-PCR技术扩增获得了长度约640 bp的口蹄疫病毒目的基因,回收片段后与pMD18-T载体进行连接,测序结果表明获得了口蹄疫病毒3C基因。将重组质粒pMD18-3C与表达载体pEGFP-N1分别用BamHⅠ+XhoⅠ双酶切后,进行定向亚克隆,对重组表达质粒pEGFP-3C进行PCR、酶切鉴定及DNA测序,结果表明重组表达质粒所含的3C基因读码框正确。用pEGFP-3C转染BHK-21细胞,荧光显示目的基因EGFP发出绿色荧光;对3C转录的mRNA进行RT-PCR鉴定,证实3C基因在BHK-21细胞中得到了表达。

关键词：口蹄疫病毒 3C基因真核表迭

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高山冰缘植物粗脂肪、可溶性糖和类黄酮的含量变异与环境适应关系的研究

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冰川冻土 2007年第6期29卷 947-952页

作者：刘艳红安黎哲郭凤霞徐世健中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 兰州大学教育部干旱与草地农业生态重点实验室甘肃兰州730000 中国科学院寒区旱区环境与工程研究所甘肃兰州730000

以乌鲁木齐河源区3个植被垂直分布带的22种主要冰缘植物花期叶片为实验材料,分析了叶片的粗脂肪、可溶性糖和类黄酮的含量.研究结果表明:同一植被带有些植物之间的这3种生理抗性物质含量接近,有些植物的含量却存在显著差异,与植物自身... 详细信息

以乌鲁木齐河源区3个植被垂直分布带的22种主要冰缘植物花期叶片为实验材料,分析了叶片的粗脂肪、可溶性糖和类黄酮的含量.研究结果表明:同一植被带有些植物之间的这3种生理抗性物质含量接近,有些植物的含量却存在显著差异,与植物自身的遗传特性和采取的生态对策有关.从样品平均含量值的统计分析看,高山流石堆植被的粗脂肪、可溶性糖和类黄酮含量高于垫状和高山草甸植被的含量,3个分布带植物的可溶性糖平均含量存在显著差异,类黄酮平均含量不存在显著差异.多数高山冰缘植物积累高含量的粗脂肪、可溶性糖和类黄酮,提高了植物的抗冻和抗紫外线辐射的能力,是植物适应冰缘环境的物质基础,这些生理抗性物质在含量上的差异说明可溶性糖是增加冰缘植物抗冻性的关键物质.

关键词：高山冰缘植物生理抗性物质含量变异环境适应

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转亚洲Ⅱ型口蹄疫病毒VP1基因烟草研究

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2007年第1期35卷 33-36页

作者：王文秀顾节清陈德坤邓文潘丽王宝琴王永录张永光西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

将亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒结构蛋白VP 1基因克隆到植物表达质粒pB in438中,构建了植物表达载体pB in-VP 1,通过根癌农杆菌叶盘转化法,将亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒结构蛋白VP 1基因导入NC 89烟草基因组中,对经卡那霉素筛选获得的20株抗性植株,进行... 详细信息

将亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒结构蛋白VP 1基因克隆到植物表达质粒pB in438中,构建了植物表达载体pB in-VP 1,通过根癌农杆菌叶盘转化法,将亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒结构蛋白VP 1基因导入NC 89烟草基因组中,对经卡那霉素筛选获得的20株抗性植株,进行PCR和RT-PCR检测。结果表明,抗性烟草植株中已整合了VP 1基因。

关键词：亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒 VP1基因植物表达载体

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重组猪瘟病毒E2基因逆转录病毒载体的构建及其表达活性

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中国兽医学报 2007年第4期27卷 460-463页

作者：田宏刘湘涛林彤吴锦艳龚真莉郑海学代兴国孙世琪尚佑军谢庆阁张彦明中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100

从实验感染兔脾组织中提取总RNA,应用RT-PCR得到了CSFV C-株结构蛋白E2基因,定向克隆于逆转录病毒载体pBABEpuro,经PCR、酶切和序列分析鉴定,获取阳性重组质粒。将该重组质粒与水疱性口炎病毒载体pVSV-G共转染GP2-293细胞,收获假型病毒... 详细信息

从实验感染兔脾组织中提取总RNA,应用RT-PCR得到了CSFV C-株结构蛋白E2基因,定向克隆于逆转录病毒载体pBABEpuro,经PCR、酶切和序列分析鉴定,获取阳性重组质粒。将该重组质粒与水疱性口炎病毒载体pVSV-G共转染GP2-293细胞,收获假型病毒,并在Polybrene的介导下感染PK15细胞,嘌呤霉素筛选表达猪瘟E2基因的细胞株。通过细胞传代并结合PCR、免疫荧光及ELISA检测表明,所筛的细胞细胞系能稳定表达猪瘟E2基因,而且表达产物具有良好的生物学活性。

关键词：猪瘟C株E2基因重组逆转录病毒载体 PK15细胞基因表达

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鸡源鹦鹉热衣原体MOMP基因重组腺病毒的稳定性及SPF雏鸡免疫试验

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第四军医大学学报 2007年第2期28卷 100-103页

作者：周继章邱昌庆张小英蔺国珍曹小安张琳程淑敏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开发实验室甘肃兰州730046 兰州市动物检疫站甘肃兰州730050

目的:检测重组腺病毒质粒在HEK293细胞中的稳定性;重组腺病毒是否与减蛋综合征阳性血清发生中和反应,以及用重组腺病毒免疫SPF小鸡是否产生保护.方法:将重组腺病毒质粒在HEK293细胞中连续传代,并用PCR法检测目的基因;用减蛋综合征阳性... 详细信息

目的:检测重组腺病毒质粒在HEK293细胞中的稳定性;重组腺病毒是否与减蛋综合征阳性血清发生中和反应,以及用重组腺病毒免疫SPF小鸡是否产生保护.方法:将重组腺病毒质粒在HEK293细胞中连续传代,并用PCR法检测目的基因;用减蛋综合征阳性血清在体外中和重组腺病毒,接种HEK293细胞;用重组腺病毒免疫SPF小鸡,然后用CpL菌株攻击.结果:重组腺病毒质粒在HEK293细胞中连续传代后,仍然用PCR检测能检测出目的基因;重组腺病毒与减蛋综合征阳性血清之间无交叉反应;用重组腺病毒免疫SPF鸡,用CpL菌株攻击,90%的小鸡获得了保护.结论:重组腺病毒质粒在HEK293细胞中能稳定传代;重组腺病毒不受减蛋综合征阳性血清的影响;用重组腺病毒免疫SPF小鸡,能够获得保护.

关键词：衣原体鹦鹉MOMP 重组遗传腺病毒科中和试验雏鸡免疫

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猪流行性腹泻病毒纤突蛋白基因克隆与序列分析

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农业生物技术学报 2007年第4期15卷 562-566页

作者：李建强柳纪省兰喜程杰杨敏吴润殷相平李宝玉李学瑞杨彬甘肃农业大学动物医学院中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室

对猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)DX株纤突蛋白基因进行了克隆与测序。结果表明,该基因核苷酸序列长为4152bp,推导氨基酸序列为1383aa,与比较毒株氨基酸同源性都在90%以上。系统发生树分析结果表明,比较毒株... 详细信息

对猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)DX株纤突蛋白基因进行了克隆与测序。结果表明,该基因核苷酸序列长为4152bp,推导氨基酸序列为1383aa,与比较毒株氨基酸同源性都在90%以上。系统发生树分析结果表明,比较毒株可分为3个基因群,而且每个群的毒株均来自同一个国家。利用生物软件分析结果表明PEDV发生微小的变异,尤其在韩国变异明显,而DX株与中国JS-2004-2株亲缘关系很近。

关键词：猪源冠状病毒猪流行性腹泻病毒纤突蛋白基因克隆特征分析

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牛朊蛋白27-30基因的克隆与表达

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中国预防兽医学报 2007年第4期29卷 277-281页

作者：路伟张鹏张杰刘永生卫广森陈豪泰姜海霞朱小玲中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室辽宁省动物疫病预防控制中心辽宁沈阳110161 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

利用PCR技术,从含有牛朊蛋白(Prion protein,PrP)基因Prnp的开放阅读框的克隆质粒BoPrnp-T中扩增出约420 bp的目的基因(PrP^(27-30)基因)。将PrP^(27-30)基因和载体pPIC9K分别用限制性核酸内切酶EcoR I和Not I进行双酶切,T4 DNA连接酶... 详细信息

利用PCR技术,从含有牛朊蛋白(Prion protein,PrP)基因Prnp的开放阅读框的克隆质粒BoPrnp-T中扩增出约420 bp的目的基因(PrP^(27-30)基因)。将PrP^(27-30)基因和载体pPIC9K分别用限制性核酸内切酶EcoR I和Not I进行双酶切,T4 DNA连接酶作用后,转化至*** JM109中,构建重组表达载体pPIC9K-boPrP^(27-30) pPIC9K-boPrP^(27-30)经限制性核酸内切酶Sal I线性化后电转至毕赤酵母GS115中,经G418筛选后得到高拷贝的重组菌株GS115/pPIC9K-boPrP^(27-30)。GW115/pPIC9K_boPrP^(27-30)经1.0%甲醇诱导后,表达产物用SDS-PAGE和Western blot分析,结果表明牛PrP^(27-30)基因在毕赤酵母细胞中获得表达,表达产物的分子量约为27 Ku。能够被单克隆抗体SAF-70识别。

关键词：牛PrP^27-30基因克隆表达

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牛、羊、人叠朊基因的克隆与分析

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中国预防兽医学报 2007年第3期29卷 194-198页

作者：张杰张鹏刘永生陈豪泰姜海霞路伟朱小玲谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室辽宁省动物疫病预防控制中心甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730001 沈阳农业大学沈阳农业大学辽宁沈阳110161

为了解我国哺乳动物叠朊基因Prnd的生物信息,本实验采用PCR方法克隆了秦川黄牛、甘肃土种绵羊和汉族人的Prnd,运用分子生物学软件对这些序列进行了分析比较。结果表明,获得的三种哺乳动物的Prnd均位于1个单一的外显子内,与GenBank登录... 详细信息

为了解我国哺乳动物叠朊基因Prnd的生物信息,本实验采用PCR方法克隆了秦川黄牛、甘肃土种绵羊和汉族人的Prnd,运用分子生物学软件对这些序列进行了分析比较。结果表明,获得的三种哺乳动物的Prnd均位于1个单一的外显子内,与GenBank登录的相应序列具有高度同源性。秦川黄牛与甘肃土种绵羊Prnd的同源性为96.8%,推导氨基酸序列同源性为93.3%。汉族人Prnd与秦川黄牛和甘肃土种绵羊Prnd的同源性均为80%,推导的氨基酸序列同源性均为76.3%。氨基酸一级结构分析显示3种Prnd编码的叠朊均由氨基端的信号肽、中间的成熟蛋白和羧基端的GPI锚结合区组成。二级结构预测表明,3种Prnd编码的叠朊均由3个α-螺旋和2个β-片层组成。本研究获得的这3种主要哺乳动物的Prnd信息为一进步研究叠朊的结构与功能奠定了基础。

关键词：传染性海绵状脑病叠朊朊蛋白叠朊基因朊蛋白基因

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