检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧兽医学报 2021年第7期52卷 1953-1962页

作者：侯景申超超张大俊杨博史喜绢张婷崔卉梅袁兴国赵登率陈学辉张克山郑海学刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业农村部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

旨在通过预测分析和亚细胞定位研究非洲猪瘟病毒(ASFV)D1133L基因结构、亚细胞定位与功能间的关系。作者使用Mega6.0软件绘制了7株不同基因型的D1133L解旋酶和ASFV编码的其他5个解旋酶基因的系统进化树,使用EXPASY、PRABI和SWISS-MODEL... 详细信息

旨在通过预测分析和亚细胞定位研究非洲猪瘟病毒(ASFV)D1133L基因结构、亚细胞定位与功能间的关系。作者使用Mega6.0软件绘制了7株不同基因型的D1133L解旋酶和ASFV编码的其他5个解旋酶基因的系统进化树,使用EXPASY、PRABI和SWISS-MODEL软件预测了该基因所编码蛋白序列的二、三级结构;根据GenBank公布的ASFV序列(LR743116.1),合成D1133L基因并构建其重组真核表达质粒pCMV-D1133L,蛋白免疫印迹(Western blot,WB)验证该基因表达后,将重组质粒转染至PK-15细胞,应用间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)研究了该蛋白的亚细胞定位。结果表明,通过ASFV解旋酶的基因系统进化树,发现5种解旋酶基因均相对保守。D1133L基因全长3402 bp,表达的蛋白为124.63 ku,G+C含量为6.1%,A+T含量为10.6%;二级结构分析表明α螺旋占48.90%,扩展链占13.50%,无规卷曲为33.27%;三级结构分析表明六自由度结构(six degree of freedom,QMQE)为0.20,覆盖率84%,且预测以α螺旋为主的高级结构;通过LOCSVMPSI分析预测,显示D1133L蛋白定位于细胞核内与细胞质内的概率是相同的。WB结果显示pCMV-D1133L质粒正常表达,IFA试验证明ASFV编码的解旋酶D1133L同时分布于细胞核和细胞质。本研究通过对D1133L基因序列、结构功能预测,并通过IFA验证了D1133L亚细胞分布,为进一步揭示D1133L基因功能奠定了一定基础。

关键词：非洲猪瘟病毒解旋酶 D1133L基因序列分析结构预测亚细胞定位

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硫酸乙酰肝素受体介导的病毒感染作用

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中国人兽共患病学报 2008年第9期24卷 874-877页

作者：赵建勇独军政高闪电丛国正林彤邵军军伏小平常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

病毒受体多为蛋白聚糖、糖脂或脂、糖蛋白且以单个或多个分子的复合体形式才能存在,硫酸乙酰肝素(Heparan sulfate,HS)存在于细胞表面,是病毒特异性结合的主要糖蛋白受体,最初发现以硫酸乙酰肝素为受体的病毒是人类单纯疱疹病毒(HSV-1)... 详细信息

病毒受体多为蛋白聚糖、糖脂或脂、糖蛋白且以单个或多个分子的复合体形式才能存在,硫酸乙酰肝素(Heparan sulfate,HS)存在于细胞表面,是病毒特异性结合的主要糖蛋白受体,最初发现以硫酸乙酰肝素为受体的病毒是人类单纯疱疹病毒(HSV-1)和(HSV-2)。硫酸乙酰肝素可作为多种病毒的受体,其可与病毒的多个吸附位点结合,它作为病毒受体来介导病毒进入细胞特定的部位或促进病毒与其第二受体的吸附。[第一段]

关键词：硫酸乙酰肝素病毒受体受体介导感染作用人类单纯疱疹病毒 sulfate 糖蛋白受体特异性结合

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两种用于鉴别山羊痘病毒和绵羊痘病毒方法的应用与比较研究

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华北农学报 2009年第6期24卷 50-53页

作者：颜新敏张强吴国华李健朱海霞中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学开放实验室甘肃兰州730046

为探讨鉴别山羊痘病毒和绵羊痘病毒的分子生物学方法,对实验室分离保存的3株山羊痘病毒和2株绵羊痘病毒进行p32基因和GpCR基因扩增、克隆及序列分析。将获得的p32基因序列与GenBank上登陆的羊痘病毒p32基因进行HinfⅠ酶切位点分析表明,... 详细信息

为探讨鉴别山羊痘病毒和绵羊痘病毒的分子生物学方法,对实验室分离保存的3株山羊痘病毒和2株绵羊痘病毒进行p32基因和GpCR基因扩增、克隆及序列分析。将获得的p32基因序列与GenBank上登陆的羊痘病毒p32基因进行HinfⅠ酶切位点分析表明,所有绵羊痘病毒p32基因在391 bp和691 bp处存在2处酶切位点,而山羊痘病毒仅在688 bp处存在1个酶切位点。将获得的GpCR基因序列与GenBank上登录的31条相应序列进行系统进化树分析发现,根据GpCR基因序列信息可将绵羊痘病毒和山羊痘病毒分成两个独立的进化分枝。这些结果表明,利用p32基因的HinfⅠ酶切位点信息和对GpCR基因进行分子进化分析可鉴别山羊痘病毒和绵羊痘病毒,p32基因和GpCR基因可作为鉴别绵羊痘病毒和山羊痘病毒的特异性标记基因。

关键词： p32基因 GpCR基因山羊痘病毒绵羊痘病毒鉴别

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筛选细菌毒力基因方法的研究进展

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中国兽医学报 2011年第2期31卷 288-291页

作者：张念章储岳峰贺英逯忠新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

细菌的致病过程涉及多个毒力基因表达产物的相互作用。然而,随着越来越多的微生物基因组测序工作的相继或即将完成,对其毒力基因的研究却相对滞后。这不但影响了致病机理等基础研究的进展,还成为制约抗菌药物和疫苗研发的瓶颈。本文从... 详细信息

细菌的致病过程涉及多个毒力基因表达产物的相互作用。然而,随着越来越多的微生物基因组测序工作的相继或即将完成,对其毒力基因的研究却相对滞后。这不但影响了致病机理等基础研究的进展,还成为制约抗菌药物和疫苗研发的瓶颈。本文从生物信息学、筛选差异表达基因等4个方面介绍了筛选细菌毒力基因的方法及其应用,并综合了研究致病菌与宿主间相互作用关系的方法。为发现和研究致病菌新的毒力因子,理顺病原与宿主关系开拓了思路。

关键词：细菌毒力基因筛选方法应用

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口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白αvβ6的细胞定位及组织分布

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畜牧兽医学报 2009年第4期40卷 533-537页

作者：赵建勇常惠芸独军政高闪电宋帅伏小平谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

利用pcDNA3.1(+)-β6p真核表达载体稳定转染CHOK1细胞,间接免疫荧光法(IFA)检测整联蛋白αvβ6在转染细胞中的表达分布。以间接免疫组化法(IHA)检测整联蛋白αvβ6在健康猪舌、唇、气管等组织的表达分布。采用抗猪源整联蛋白β6亚基的... 详细信息

利用pcDNA3.1(+)-β6p真核表达载体稳定转染CHOK1细胞,间接免疫荧光法(IFA)检测整联蛋白αvβ6在转染细胞中的表达分布。以间接免疫组化法(IHA)检测整联蛋白αvβ6在健康猪舌、唇、气管等组织的表达分布。采用抗猪源整联蛋白β6亚基的单克隆抗体作为一抗,FITC标记山羊抗小鼠IgG、辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG分别作为二抗。结果表明,pcDNA3.1(+)-β6p真核表达载体稳定转染的CHOK1细胞的细胞膜及细胞质内可见致密的绿色荧光(IFA),猪舌、唇、气管等组织细胞的细胞膜及细胞质内均出现了棕黄色的特异阳性反应物,表明整联蛋白αvβ6受体广泛分布于猪体的器官组织细胞中,为深入研究整联蛋白αvβ6在口蹄疫病毒感染过程中的作用奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒受体整联蛋白细胞定位组织分布

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口蹄疫病毒OT株的全基因组序列测定及比较分析

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畜牧兽医学报 2012年第1期43卷 90-97页

作者：吕占禄王光祥尚佑军刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒病重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

参考GenBank上已发表的口蹄疫病毒(FMDV)全长基因组序列,设计了覆盖基因组全长的数对引物,通过RT-PCR方法对口蹄疫病毒OT株进行分段克隆及序列测定。结果表明不含poly(C)序列的OT株基因组全序列长8 142nt,开放读码框(ORF)长6 969nt、编... 详细信息

参考GenBank上已发表的口蹄疫病毒(FMDV)全长基因组序列,设计了覆盖基因组全长的数对引物,通过RT-PCR方法对口蹄疫病毒OT株进行分段克隆及序列测定。结果表明不含poly(C)序列的OT株基因组全序列长8 142nt,开放读码框(ORF)长6 969nt、编码2 322aa,5′UTR长1 004nt,3′UTR长93nt,3′UTR之后为23nt的poly(A)尾巴。应用分子生物学软件将OT株与FMDV其它参考毒株进行序列比对,并对其基因特征进行分析。结果显示,OT株的假结节(Pseudoknots)从第415—499位连续缺失85nt,但是其3A基因却未发生碱基的缺失。其VP1基因的核苷酸同源性与O/Akesu58、OMⅢ两株最高,但OT株在进化时间上要比O/Akesu58、OMIII早很多,其毒株起源和遗传衍化关系还需要进一步的关注。

关键词：口蹄疫病毒全基因组编码区分子生物学特性序列比对

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羊痘病毒3个结构蛋白的克隆与抗原性分析

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中国预防兽医学报 2010年第11期32卷 889-891页

作者：颜新敏吴国华李健朱海霞朱彩珠张强中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学开放实验室甘肃兰州730046

为研究羊痘病毒结构蛋白的功能,本研究将羊痘病毒的ORF57、ORF95和ORF117分别克隆至pGEX4T-1原核表达载体后转染到大肠杆菌中。重组表达菌经1 mmol/L的IPTG诱导后进行SDS-PAGE电泳,结果显示3个重组蛋白均在原核细胞中获得有效表达。表... 详细信息

为研究羊痘病毒结构蛋白的功能,本研究将羊痘病毒的ORF57、ORF95和ORF117分别克隆至pGEX4T-1原核表达载体后转染到大肠杆菌中。重组表达菌经1 mmol/L的IPTG诱导后进行SDS-PAGE电泳,结果显示3个重组蛋白均在原核细胞中获得有效表达。表达产物经western blot分析,羊痘病毒特异性血清只能识别融合蛋白ORF57和ORF95,不能识别ORF117。本研究为重组诊断抗原的筛选和亚单位疫苗的研制奠定了基础。

关键词： ORF57 ORF95 ORF117 原核表达抗原性分析

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副猪嗜血杆菌抗体间接ELISA检测方法的建立与应用

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中国兽医科学 2009年第7期39卷 597-601页

作者：冯小明储岳峰贺英高鹏程赵萍郭晗樊祜卿逯忠新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

采用超声裂解的副猪嗜血杆菌菌体上清作为包被抗原,建立了检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA方法。通过对试验条件进行筛选优化,确定了最佳反应条件:抗原包被浓度80μg/mL,37℃作用2 h后4℃过夜包被,待检血清的稀释度为1∶320,抗原抗体... 详细信息

采用超声裂解的副猪嗜血杆菌菌体上清作为包被抗原,建立了检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA方法。通过对试验条件进行筛选优化,确定了最佳反应条件:抗原包被浓度80μg/mL,37℃作用2 h后4℃过夜包被,待检血清的稀释度为1∶320,抗原抗体反应时间为1 h,酶标二抗稀释度为1∶15000,作用时间为1 h,底物显色时间为15 min。待检血清S/N值≥2.5时判为阳性,S/N值<2.5时判为阴性。特异性、重复性和敏感性试验以及对200份送检血清的检测结果表明,建立的间接ELISA方法的特异性和重复性良好,敏感性比间接血凝试验高,可用于副猪嗜血杆菌的检疫和流行病学调查。

关键词：副猪嗜血杆菌抗体间接酶联免疫吸附试验

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牛FMDV受体整合素β6亚基LBD的多克隆抗体制备及初步应用

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细胞与分子免疫学杂志 2008年第7期24卷 696-698页

作者：独军政常惠芸高闪电王景锋赵建勇才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

目的:利用大肠杆菌表达牛FMDV受体整合素β6亚基的配体结合域(LBD)片段,纯化重组目的蛋白后制备兔多克隆抗体并对其进行初步应用。方法:以含有牛整合素β6亚基全长cDNA的质粒为模板PCR扩增得到β6LBD基因片段,与原核表达载体pGEX4T-1相... 详细信息

目的:利用大肠杆菌表达牛FMDV受体整合素β6亚基的配体结合域(LBD)片段,纯化重组目的蛋白后制备兔多克隆抗体并对其进行初步应用。方法:以含有牛整合素β6亚基全长cDNA的质粒为模板PCR扩增得到β6LBD基因片段,与原核表达载体pGEX4T-1相连,构建原核表达质粒pGEX/β6LBD,测序确认开放阅读框正确后,转化感受态细胞BL21(DE3),以IPTG诱导表达重组牛β6LBD融合蛋白。SDS-PAGE和Westernblot鉴定后提取包涵体,电泳分离纯化重组融合蛋白,免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,以ELISA、琼脂扩散实验、免疫组化鉴定该抗体的效价和特异性。结果:重组牛β6LBD融合蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达,重组蛋白主要以包涵体形式表达,相对分子质量(Mr)约为45000。制备的兔多克隆抗体效价达1∶12800以上,该抗体可与牛舌上皮细胞中的抗原分子结合,具有很好的特异性。结论:实现了牛FMDV受体整合素β6亚基LBD的原核表达和抗体制备,为研究受体β6亚基在牛体内的分布及其在FMDV感染过程中的作用机制提供了工具。

关键词：牛FMDV受体 β6LBD 多克隆抗体免疫组化

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猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒结构蛋白的研究进展与应用

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中国农学通报 2010年第23期26卷 1-6页

作者：王猛刘永生张杰中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室兰州730046

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)属于动脉炎病毒科的单股正义RNA病毒。病毒基因组共有15kb,编码RNA复制酶(ORF1a和ORF1b)、糖基化蛋白(GP2-GP5)、基膜蛋白M(ORF6)和核衣壳蛋白N(ORF7)。其中每一个PRRSV的结构蛋白在病毒的感染及免疫... 详细信息

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)属于动脉炎病毒科的单股正义RNA病毒。病毒基因组共有15kb,编码RNA复制酶(ORF1a和ORF1b)、糖基化蛋白(GP2-GP5)、基膜蛋白M(ORF6)和核衣壳蛋白N(ORF7)。其中每一个PRRSV的结构蛋白在病毒的感染及免疫原性等的作用均不相同。笔者对PRRSV结构蛋白最新的研究进展及应用进行综述。

关键词：糖基化蛋白免疫原性小结构蛋白异源二聚体

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