检索结果-内蒙古大学图书馆

猪源口蹄疫病毒China99/S株基因组全长cDNA的构建及其感染性鉴定

畜牧兽医学报 2009年第2期40卷 213-220页

作者：常艳燕郑海学靳野王光祥尚佑军刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046 广东省农业科学院兽医研究所广州510640

提取猪源FMDV China99/S组织样品总RNA,利用设计的引物对,分段进行扩增,获得覆盖全基因组的4个重叠片段(A、B、C和E),然后用BsmBⅠ/XmaⅠ、XmaⅠ/BamHⅠ、BamHⅠ/NotⅠ、HpaⅠ/KpnⅠ分别双酶切A、B、E、C,并纯化回收,依次定向克隆到带... 详细信息

提取猪源FMDV China99/S组织样品总RNA,利用设计的引物对,分段进行扩增,获得覆盖全基因组的4个重叠片段(A、B、C和E),然后用BsmBⅠ/XmaⅠ、XmaⅠ/BamHⅠ、BamHⅠ/NotⅠ、HpaⅠ/KpnⅠ分别双酶切A、B、E、C,并纯化回收,依次定向克隆到带有聚合酶Ⅰ的pPⅠcDNA3.1(+)转录载体内,最终得到重组质粒pPⅠ-FMDVcDNA3.1(+);然后对该质粒进行序列测定。结果表明,China99/S株基因组全基因组序列长8 116 nt(含Poly(C)和Poly(A)片段),其中5′NCR长1 064 nt,蛋白编码区核苷酸序列为6 318 nt,编码1个由2 106个氨基酸组成的聚合蛋白,3′NCR长93 nt,其后是含有38个A碱基的Poly(A)尾。其中5′NCR引入含41个C的Poly(C)片段。将pPⅠFMDVcDNA3.1(+)用脂质体转染法导入BHK-21细胞,传代培养,可以观察到典型的FMDV致细胞病变效应。利用CPE、电镜、动物试验、RT-PCR和序列测定进行检测,结果表明,从该系统中成功拯救出具有感染性的猪源FMDV China99/S株重组病毒。

关键词：口蹄疫病毒全长cDNA克隆 Poly(C) 反向遗传学

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口蹄疫病毒受体猪源β1亚基基因的克隆和分子特征

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华北农学报 2007年第6期22卷 14-18页

作者：高闪电独军政常惠芸周建华谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

首次从FMDV试验感染康复猪的舌皮和肺组织中克隆到了整联蛋白β1亚基的基因并对其核苷酸序列和推导的氨基酸序列以及蛋白结构进行了分析。猪整联蛋白β1亚基基因的编码区含有2397个核苷酸，编码798个氨基酸残基，含有10个潜在的糖基化... 详细信息

首次从FMDV试验感染康复猪的舌皮和肺组织中克隆到了整联蛋白β1亚基的基因并对其核苷酸序列和推导的氨基酸序列以及蛋白结构进行了分析。猪整联蛋白β1亚基基因的编码区含有2397个核苷酸，编码798个氨基酸残基，含有10个潜在的糖基化位点（NXTX/NXSX），2个表皮生长因子相似结构域和3个半胱氨酸丰富区。其信号肽由20个氨基酸组成，胞外域由708个氨基酸组成，跨膜区由29个氨基酸组成，胞浆域由41个氨基酸组成。猪脚基因与牛、猩猩、猫、犬、人、小鼠和鸡的脚基因的核苷酸序列一致性分别为99．5％，90．0％，91．8％，90．7％，90．2％，86．5％和77．4％，推导的氨基酸序列一致性分别为99．9％，93．9％，97．5％，96．7％，94．2％，92．4％和94．9％。通过生物学软件分析发现β1亚基形成复杂的二、三级结构，其中1～20位、729～757位氨基酸区段疏水性较强，分别是该亚基的信号肽和跨膜区。为进一步深入研究FMDV嗜性、与宿主细胞的相互作用、病毒的侵入机制等问题奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒受体猪整联蛋白β1基因分子特征

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应用双重PCR方法检测羊支原体肺炎病原

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畜牧与兽医 2009年第12期41卷 23-26页

作者：储岳峰高鹏程赵萍贺英郭晗逯忠新赵海燕中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

通过对丝状支原体山羊亚种(*** ***,Mmc)特异性引物MmcF/MmcR和绵羊肺炎支原体(***,Mo)特异性引物LmF/LmR退火温度、引物浓度比例等条件的选择,建立了一个可以同时检测Mmc和Mo的双重PCR方法。该方法可同时扩增出Mmc 195 bp和Mo 361 bp... 详细信息

通过对丝状支原体山羊亚种(*** ***,Mmc)特异性引物MmcF/MmcR和绵羊肺炎支原体(***,Mo)特异性引物LmF/LmR退火温度、引物浓度比例等条件的选择,建立了一个可以同时检测Mmc和Mo的双重PCR方法。该方法可同时扩增出Mmc 195 bp和Mo 361 bp目的片段,但对其他病原菌不能扩增出任何条带,具有良好的特异性。敏感性试验表明,该方法能够分别检测出0.1ng的Mmc DNA和0.01 ng的Mo DNA,或同时检测出1ng Mmc和1ng Mo混合的DNA。用该双重PCR方法可对实验室保存的4株绵羊肺炎支原体和2株丝状支原体山羊亚种进行准确鉴定,并可从临床病料中检测出相应支原体,表明建立的双重PCR方法可用于Mmc和Mo的快速鉴定、实验室诊断和病原学调查。

关键词：丝状支原体山羊亚种绵羊肺炎支原体双重PCR 检测

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细胞型朊蛋白(PrP^c)研究进展

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中国人兽共患病学报 2008年第1期24卷 83-86页

作者：张杰路伟刘永生中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜龠病毒学重点开放实验室兰州730046

众所周知的疯牛病是海绵状脑病的一种,海绵状脑病还包括动物的羊痒病、鹿慢性消耗性疾病等等及人的克雅氏症、GSS综合征和库鲁症等。大量的研究表明,海绵状脑病是由哺乳动物体内一种正常存在的蛋白质——朊蛋白构象发生转变后导致的。... 详细信息

众所周知的疯牛病是海绵状脑病的一种,海绵状脑病还包括动物的羊痒病、鹿慢性消耗性疾病等等及人的克雅氏症、GSS综合征和库鲁症等。大量的研究表明,海绵状脑病是由哺乳动物体内一种正常存在的蛋白质——朊蛋白构象发生转变后导致的。关于海绵状脑病和朊蛋白的研究可谓如火如荼,每年都有大量报道。本文就海绵状脑病的特征,尤其是近年来细胞型朊蛋白(PrP^c)的研究进展作一简要综述。[第一段]

关键词：细胞型朊蛋白海绵状脑病慢性消耗性疾病 GSS综合征动物体内克雅氏症蛋白构象疯牛病

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布鲁氏菌S2、M5及A19疫苗免疫羊抗体消长规律研究

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中国预防兽医学报 2020年第3期42卷 287-292页

作者：孙晶晶吴锦艳曹小安陈妍尹双辉周建华兰喜李学瑞刘永生尚佑军中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

为评价不同商品化布鲁氏菌疫苗对小尾寒羊免疫后抗体消长规律及疫苗免疫效果,本研究选取3月龄~6月龄的羔羊随机分为5组,分别为布鲁氏菌疫苗S2口服组(70只)、A19皮下注射组(30只)、M5皮下注射组(70只)、M5口服组(70只)和对照组(30只),并... 详细信息

为评价不同商品化布鲁氏菌疫苗对小尾寒羊免疫后抗体消长规律及疫苗免疫效果,本研究选取3月龄~6月龄的羔羊随机分为5组,分别为布鲁氏菌疫苗S2口服组(70只)、A19皮下注射组(30只)、M5皮下注射组(70只)、M5口服组(70只)和对照组(30只),并采用ELISA方法检测疫苗免疫后不同时间段羊血清中IgM和IgG抗体的消长规律,用虎红平板凝集试验(RBPT)和ELISA方法检测疫苗免疫后不同时间段羊血清中抗体转阳率和抗体持续期的变化趋势,统计分析其抗体消长规律。结果显示,免疫前,所有实验羊均未检测到抗体,不同疫苗免疫后羊产生的IgM抗体水平最高的是A19皮下注射组,最低的是M5口服组,在免疫7 d^14 d内4组实验组羊的IgM抗体水平均达到峰值,其抗体持续时间在45 d^60 d。不同疫苗免疫后羊产生IgG抗体水平最高的是M5皮下注射组,最低的是M5口服组,在免疫7 d^28 d内4组实验组羊的IgG抗体水平均达到峰值,其抗体持续时间在60 d以上。M5皮下注射组、A19皮下注射组、M5口服组和S2口服组羊在免疫7 d^14 d内抗体转阳率均达到最大值:采用RBPT方法检测抗体转阳率分别为67%、56%、41%和45%,采用ELISA方法检测其抗体转阳率分别为71%、56%、37%和38%,其抗体水平持续时间约为150 d。抗体水平结果表明,A19疫苗可以用于羊布鲁氏菌病的免疫,M5疫苗皮下注射免疫羊的效果最好,口服S2的疫苗免疫效果要优于口服M5疫苗。本研究为制定羊布鲁氏菌病合理的疫苗免疫方案提供了科学依据。

关键词：布鲁氏菌病绵羊布鲁氏菌疫苗抗体消长规律

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靶向抑制PRRSV复制的Nsp9/shRNA的筛选及干扰

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中国兽医学报 2019年第1期39卷 14-20页

作者：吴锦艳田宏陈妍王光祥尚佑军张志东中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达,使机体具有抗病毒的功效,本试验针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp9基因设计多对shRNA序列,并从细胞水平验证其干扰效果,从中筛选可以使Nsp9基因沉默的优势shRNA序列。利用BLOCK-iTTM R... 详细信息

RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达,使机体具有抗病毒的功效,本试验针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp9基因设计多对shRNA序列,并从细胞水平验证其干扰效果,从中筛选可以使Nsp9基因沉默的优势shRNA序列。利用BLOCK-iTTM RNAi Designer软件设计并合成shRNA对应的DNA序列-ds Oligo,构建入门载体pENTR/U6/shRNA;采用共转染技术,经荧光显微镜观察、流式细胞仪检测及Real-time RT-PCR分析等方法筛选优势干扰序列。结果显示:成功构建的6对pENTR/U6/Nsp9-shRNA均具有抑制Nsp9基因表达的效果,其中pENTR/U6/Nsp9-4和pENTR/U6/Nsp9-6的抑制效果更为突出,同时成功构建1对无意义对照pENTR/U6/con-shRNA。结果表明:pENTR/U6/Nsp9-4和pENTR/U6/Nsp9-6两株优势干扰序列的成功筛选可为构建具有干扰PRRSV复制效果的稳定细胞系以及靶向PRRSV的siRNA的转基因动物提供素材。

关键词： PRRSV Nsp9/shRNA RNA干扰筛选

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口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域单克隆抗体的制备

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中国兽医科学 2008年第12期38卷 1065-1069页

作者：赵建勇独军政高闪电林彤邵军军丛国正伏小平常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

以纯化的口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域重组蛋白为抗原,免疫雌性BALB/c小鼠,经3次免疫后取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,制备口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域单克隆抗体(McAb);采用有限稀释法和间接ELIS... 详细信息

以纯化的口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域重组蛋白为抗原,免疫雌性BALB/c小鼠,经3次免疫后取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,制备口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域单克隆抗体(McAb);采用有限稀释法和间接ELISA克隆和筛选阳性杂交瘤细胞株,并用SDS-PAGE、间接ELISA以及间接免疫荧光法对制备的McAb的特异性进行鉴定。结果显示,成功获得5株能稳定传代并分泌抗β6亚基配体结合域的杂交瘤细胞株,分别命名为C4C7、E7C7、B8C9、C2D8和B7B6,其分泌的McAb为IgG2b(C2D8)和IgG2a(C4C7、E7C7、B8C9、B7B6)亚类。制备的口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域McAb可为深入研究整联蛋白αvβ6在口蹄疫病毒感染过程中的作用奠定基础。

关键词：口蹄疫病毒受体整联蛋白β6亚基配体结合域单克隆抗体

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山羊痘病毒A6L基因的克隆及序列分析

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中国畜牧兽医 2015年第8期42卷 1973-1978页

作者：赵银龙吴国华朱海霞吴健颜新敏赵志荀李健吴娜穆晓峰张强中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实室验兰州730046

为了分析山羊痘病毒A6蛋白的分子特征,本试验提取了山羊痘病毒古浪分离株的基因组DNA,设计引物进行PCR扩增,克隆A6L基因的DNA序列。将PCR产物连接到pGEM-T Easy载体后转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆进行序列测定,利用生物... 详细信息

为了分析山羊痘病毒A6蛋白的分子特征,本试验提取了山羊痘病毒古浪分离株的基因组DNA,设计引物进行PCR扩增,克隆A6L基因的DNA序列。将PCR产物连接到pGEM-T Easy载体后转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆进行序列测定,利用生物信息学软件对A6L基因序列进行预测分析。结果显示,A6L基因序列含有1个由1 128个核苷酸组成的开放阅读框,编码375个氨基酸残基组成的多肽,蛋白质分子质量的理论值为43.68ku,理论等电点为7.50。该蛋白的二级结构中,α螺旋占53.30%,β折叠占10.24%,其余39.46%为无规则卷曲。多序列比对分析结果显示,不同羊痘病毒分离株A6L序列高度保守,同源性在97%以上。上述研究结果为进一步研究A6蛋白的生物学功能和羊痘病毒早期蛋白的分子相互作用奠定了基础。

关键词：山羊痘病毒 A6L基因基因克隆序列分析

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PCV2衣壳蛋白肽段的表达及其血清抗体间接ELISA检测方法

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西北农业学报 2011年第1期20卷 1-7页

作者：杨顺利尹双辉尚佑军沈小燕刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

利用可溶性重组PCV2-Cap蛋白肽段为抗原,建立PCV2血清抗体间接ELISA诊断方法(rhcap-ELISA)。将PCV2cap基因中含主要表位的片段克隆到表达载体pGEX-6p-1上,转化***,降低诱导温度至18℃诱导,获得大小为34 ku的可溶性融合蛋白。Western blo... 详细信息

利用可溶性重组PCV2-Cap蛋白肽段为抗原,建立PCV2血清抗体间接ELISA诊断方法(rhcap-ELISA)。将PCV2cap基因中含主要表位的片段克隆到表达载体pGEX-6p-1上,转化***,降低诱导温度至18℃诱导,获得大小为34 ku的可溶性融合蛋白。Western blotting试验证实该融合蛋白具有很强的免疫学活性,通过亲和层析柱对可溶性蛋白进行纯化。用融合表达的可溶性蛋白肽段作为抗原,建立猪圆环病毒(PCV2)血清抗体间接ELISA诊断方法。该方法的交叉反应结果表明,重组抗原与PRRSV、CSF、PPV和PRV阳性血清之间不存在交叉反应;用rhcap-ELISA和商品化的同类试剂盒(PCV2-Ab-Kit)检测137送检血清样品,2种试剂盒的阳性检测率分别为79.56%和83.21%。因此,rhcap-ELISA猪圆环病毒抗体检测试剂盒具有良好的敏感性和特异性,适合于在大规模的PCV2血清抗体的检测工作中使用。

关键词：圆环病毒2型可溶性表达 ELISA 抗体检测

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2007—2014年国内外小反刍兽疫流行现状及分析

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中国兽医学报 2016年第4期36卷 687-693页

作者：吴锦艳尚佑军田宏陈妍王光祥栾志舫张志东中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

小反刍兽疫是由小反刍兽疫病毒引起山羊、绵羊、野生反刍动物及骆驼的一种急性、亚急性高度接触性传染病。自2007年小反刍兽疫作为外来动物疫病传入我国以来,在国务院、农业部和国家有关部委的密切关注和大力支持下,使疫情的流行蔓延趋... 详细信息

小反刍兽疫是由小反刍兽疫病毒引起山羊、绵羊、野生反刍动物及骆驼的一种急性、亚急性高度接触性传染病。自2007年小反刍兽疫作为外来动物疫病传入我国以来,在国务院、农业部和国家有关部委的密切关注和大力支持下,使疫情的流行蔓延趋势得到有效控制。但是到了2013年年底,小反刍兽疫风波再次掀起,而且波及面积也逐步扩大,截至2014年6月,疫情已蔓延近20多个省份,严重影响我国国际贸易和经济发展。本文就近几年以及目前国内外小反刍兽疫流行现状进行整理并加以分析,以期为我国小反刍兽疫防控提供参考。

关键词：小反刍兽疫疫情分布

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