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口蹄疫细胞免疫研究进展

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生物技术通报 2009年第5期25卷 14-17,20页

作者：杜进鑫王永录中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046 甘肃农业大学动物医学院兰州730070

口蹄疫是世界性重大动物疫病之一,接种疫苗是预防该病的重要策略之一。随着对口蹄疫疫苗及其免疫特性的深入研究和探讨,许多学者对口蹄疫细胞免疫机制的研究更进了一步,就参与口蹄疫细胞免疫的各类细胞及细胞免疫与新疫苗设计的研究进... 详细信息

口蹄疫是世界性重大动物疫病之一,接种疫苗是预防该病的重要策略之一。随着对口蹄疫疫苗及其免疫特性的深入研究和探讨,许多学者对口蹄疫细胞免疫机制的研究更进了一步,就参与口蹄疫细胞免疫的各类细胞及细胞免疫与新疫苗设计的研究进展作一综述。

关键词： FMD 细胞免疫进展

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羊痘病毒载体研究进展

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中国畜牧兽医 2009年第5期36卷 98-101页

作者：朱学亮张强杨帆才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046 新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052

羊痘病毒能引起山羊痘、绵羊痘和牛的结节性疹块病。羊痘病毒基因组较大,可容纳较大的外源基因。重组病毒载体是当今病毒基因工程研究的热点之一,目前以动物病毒为基础设计的基因克隆及表达载体主要有取代型的重组病毒载体和重组的病毒... 详细信息

羊痘病毒能引起山羊痘、绵羊痘和牛的结节性疹块病。羊痘病毒基因组较大,可容纳较大的外源基因。重组病毒载体是当今病毒基因工程研究的热点之一,目前以动物病毒为基础设计的基因克隆及表达载体主要有取代型的重组病毒载体和重组的病毒-质粒载体。作者综述了羊痘病毒载体构建策略和羊痘病毒活载体疫苗研究的最新进展。

关键词：羊痘病毒转移载体重组病毒载体疫苗

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共表达AsiaⅠ型口蹄疫病毒P1-2A和3C基因重组山羊痘病毒的构建及鉴定

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中国畜牧兽医 2009年第5期36卷 87-91页

作者：鞠厚斌张强周锦萍刘佩红卫广森上海市动物疫病预防控制中心上海201103 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

将口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因与启动绿色荧光蛋白双向串连痘苗病毒启动子相连,以KpnⅠ为插入位点,将整体基因片段插入山羊痘病毒转移载体骨架pUC119-TK之中,构建共表达重组山羊痘病毒转移载体pTK-P7.5-GFP-P1... 详细信息

将口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因与启动绿色荧光蛋白双向串连痘苗病毒启动子相连,以KpnⅠ为插入位点,将整体基因片段插入山羊痘病毒转移载体骨架pUC119-TK之中,构建共表达重组山羊痘病毒转移载体pTK-P7.5-GFP-P12A3C。与疫苗弱毒株山羊痘病毒共转染BHK21细胞,经绿色荧光筛选,RT-PCR检测,成功获得能正确表达目的蛋白的重组山羊痘病毒株vTK-3CP1-GFP。

关键词：口蹄疫病毒山羊痘病毒 P12A基因 3C基因 TK基因

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C型口蹄疫病毒衣壳蛋白前体P1基因的原核表达及其生物活性的初步分析

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华北农学报 2009年第5期24卷 7-10页

作者：常惠芸丛国正独军政邵军军林彤冯金瑞刘萍中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046 中农威特生物科技股份有限公司甘肃兰州730046

将口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白基因P1的完整cDNA序列插入原核表达性载体pET-28α(+)中,获得融合表达质粒pET-P1,转化***21(DE3),经IPTG诱导,SDS-PAGE结果表明,pET-P1获得融合表达,Western Blot检测证实表达的融合蛋白具有免疫活性,表达产... 详细信息

将口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白基因P1的完整cDNA序列插入原核表达性载体pET-28α(+)中,获得融合表达质粒pET-P1,转化***21(DE3),经IPTG诱导,SDS-PAGE结果表明,pET-P1获得融合表达,Western Blot检测证实表达的融合蛋白具有免疫活性,表达产物主要以包涵体的形式存在,进一步采用纯化试剂盒纯化P1蛋白做为诊断抗原。

关键词： C型口蹄疫病毒重组蛋白P1 表达生物活性

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保护剂及其在口蹄疫疫苗中的研究进展

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生物技术通报 2009年第3期25卷 6-10页

作者：李正丰王永录中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室兰州730046 甘肃农业大学动物医学院兰州730070

保护剂在动物疫苗中具有重要的作用,直接影响疫苗的质量。以保护剂为核心介绍了在疫苗保存前病毒抗原和保护剂的准备,保护剂的选用原则,分类、作用机理,着重讨论了保护剂在口蹄疫疫苗中的研究进展以及当前存在的问题,并对其应用前景提... 详细信息

保护剂在动物疫苗中具有重要的作用,直接影响疫苗的质量。以保护剂为核心介绍了在疫苗保存前病毒抗原和保护剂的准备,保护剂的选用原则,分类、作用机理,着重讨论了保护剂在口蹄疫疫苗中的研究进展以及当前存在的问题,并对其应用前景提出展望。

关键词：保护剂口蹄疫疫苗研究进展

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表达狂犬病毒糖蛋白和核蛋白的重组腺病毒的生物学特性及免疫研究

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甘肃农业大学学报 2009年第4期44卷 19-24页

作者：殷相平李志勇李江涛李宝玉兰喜杨彬李学瑞柳纪省甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

对狂犬病毒G+N双基因复制缺陷型腺病毒穿梭载体进行转染,以获得融合表过狂犬病毒糖蛋白和核蛋白重组腺病毒,并对其进行生物学特性和免疫学研究.结果表明:将含有狂犬病毒G+N的重组穿梭质粒pAdTrack-CMV/G+N与腺病毒骨架载体pAdEasy-1在... 详细信息

对狂犬病毒G+N双基因复制缺陷型腺病毒穿梭载体进行转染,以获得融合表过狂犬病毒糖蛋白和核蛋白重组腺病毒,并对其进行生物学特性和免疫学研究.结果表明:将含有狂犬病毒G+N的重组穿梭质粒pAdTrack-CMV/G+N与腺病毒骨架载体pAdEasy-1在大肠杆菌细胞内同源重组,可获得带有目的基因的重组腺病毒载体pAd/G+N,经PacI酶切后转染HEK-293细胞,可获得带有目的基因的重组腺病毒.重组腺病毒在HEK-293细胞中连续传代15代次后,在细胞内的病变时间缩短为20 h以内.经测定,重组腺病毒对HEK-293细胞的TCID50为***-1,用RT-PCR法可检测到狂犬病毒糖蛋白和核蛋白基因片段;重组腺病毒经口服免疫小白鼠,对狂犬病毒CVS毒株的免疫保护率可达80%.

关键词：狂犬病毒重组腺病毒生物学特性免疫

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双效表达载体的构建及其U6启动子的功能效率鉴定

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生物技术通报 2009年第4期25卷 82-85,90页

作者：项海涛杨彬温峰琴胡永浩柳纪省甘肃农业大学动物医学院兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室兰州730046

利用pBudcE4.1双表达载体构建shRNA与蛋白共表达载体,为双效疫苗的研制提供新的研究思路。以含U6启动子的载体为模板,PCR扩增得到U6启动子,用其置换载体pBudcE4.1内的CMV启动子的核心部分构建shRNA与蛋白共表达载体。用干扰绿色荧光蛋... 详细信息

利用pBudcE4.1双表达载体构建shRNA与蛋白共表达载体,为双效疫苗的研制提供新的研究思路。以含U6启动子的载体为模板,PCR扩增得到U6启动子,用其置换载体pBudcE4.1内的CMV启动子的核心部分构建shRNA与蛋白共表达载体。用干扰绿色荧光蛋白表达的方法鉴定重组载体中的U6启动子能否启动shRNA的表达。经PCR扩增、双酶切鉴定及DNA测序证明成功构建了载体pBudcE4.1-U6。用干扰载体pBudcE4.1-U6-eGFPshRNA与含eGFP的载体共转染293T细胞后,荧光显微镜观察显示eGFP的表达量下降;流式细胞仪检测细胞的转染效率降低。研究结果证明U6启动子正常发挥作用。成功构建RNAi与蛋白共表达载体,为利用该载体研制动物双效疫苗奠定了基础。

关键词： RNAi 共表达载体 U6启动子构建鉴定

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猪戊型肝炎病毒swCH-GS189株ORF2基因的克隆及序列分析

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生物技术通报 2009年第5期25卷 122-126页

作者：郝宝成兰喜柳纪省胡永浩甘肃农业大学动物医学院兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室兰州730046

为进行猪戊型肝炎病毒(HEV)ORF2基因特征研究,参照GenBank中已发表的戊型肝炎病毒(HEV)核酸序列,设计了一对扩增HEVORF2基因的引物,利用RT-PCR等方法克隆出了一株猪戊型肝炎病毒甘肃分离株GS189的ORF2基因cDNA片段。序列测定结果表明,sw... 详细信息

为进行猪戊型肝炎病毒(HEV)ORF2基因特征研究,参照GenBank中已发表的戊型肝炎病毒(HEV)核酸序列,设计了一对扩增HEVORF2基因的引物,利用RT-PCR等方法克隆出了一株猪戊型肝炎病毒甘肃分离株GS189的ORF2基因cDNA片段。序列测定结果表明,swCH-GS189株的ORF2基因长2 025 bp,编码674个氨基酸,与GenBank中公布的其它毒株间的核苷酸序列同源性为79.1%～91.8%,推导的氨基酸序列同源性为89.5%～98.8%。系统发育进化树结果表明,该分离株为基因Ⅳ型。

关键词：戊型肝炎病毒 ORF2基因克隆序列分析

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猪繁殖与呼吸综合征病毒兰州分离株ORF3基因的克隆及杆状病毒载体的构建

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西北农业学报 2009年第3期18卷 1-5页

作者：赵娜田宏祁燕蓉满自萍吴锦艳尚佑军何生虎刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 宁夏大学农学院宁夏银川750021

根据猪繁殖与呼吸综合症病毒已知序列(ch-1a,AY032626)设计包含完整ORF3序列的1对引物,采用RT-PCR方法扩增PRRSV甘肃Lanzhou株的ORF3基因,将其克隆到杆状病毒载体pFastBac HTA上,经酶切鉴定、PCR鉴定筛选出阳性重组转移载体pFastBac HTA... 详细信息

根据猪繁殖与呼吸综合症病毒已知序列(ch-1a,AY032626)设计包含完整ORF3序列的1对引物,采用RT-PCR方法扩增PRRSV甘肃Lanzhou株的ORF3基因,将其克隆到杆状病毒载体pFastBac HTA上,经酶切鉴定、PCR鉴定筛选出阳性重组转移载体pFastBac HTA-ORF3,并对阳性质粒进行测序及序列分析;将pFastBac HTA-ORF3转化到DH10Bac感受态细胞中,与Bacmid发生位点特异性转座作用,获得重组转座子rBacmid-ORF3。成功构建了PRRSV Lanzhou株ORF3基因的杆状病毒载体,为基因工程疫苗的研制奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF3基因克隆杆状病毒表达载体

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猪繁殖与呼吸综合征病毒分子生物学研究进展

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生物技术通报 2009年第12期25卷 37-41页

作者：李国娟田永强李建强李宝玉柳纪省兰州交通大学化工学院兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室兰州730046

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是严重危害养猪业的病原,对PRRSV的分子生物学研究进展进行了综述,主要包括PRRSV的基因组结构、病毒的非结构蛋白和结构蛋白及其功能、致病机理及复制与转录等。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒分子生物学研究进展

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