检索结果-内蒙古大学图书馆

生物技术通报 2009年第5期25卷 130-134页

作者：刘光瑞李宝玉柳纪省胡永浩甘肃农业大学动物医学院兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室兰州730046

研究采用RT-PCR技术对猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)E基因进行了克隆、测序和特征分析,得到长度为603 bp,编码201个氨基酸残基的目的基因片段。将克隆到的E基因插入到pAdTrack-CMV穿梭质粒中,再将重组穿梭质粒pAdTrack-CMV/E用PmeⅠ线... 详细信息

研究采用RT-PCR技术对猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)E基因进行了克隆、测序和特征分析,得到长度为603 bp,编码201个氨基酸残基的目的基因片段。将克隆到的E基因插入到pAdTrack-CMV穿梭质粒中,再将重组穿梭质粒pAdTrack-CMV/E用PmeⅠ线性化后电转化携带有腺病毒骨架载体pAdeasy-1的大肠杆菌BJ5183感受态细胞,经细菌内同源重组产生重组腺病毒质粒pAdEasy-E,成功获得了含有PRRSVE基因的重组腺病毒表达载体。为猪繁殖与呼吸综合症活载体疫苗的研制提供了依据。

关键词：猪繁殖与呼吸综合症病毒 E基因腺病毒表达

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新城疫病毒Roakin株HN基因的克隆及真核表达载体的构建

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西北农业学报 2009年第2期18卷 19-23,37页

作者：张继乐陈豪泰丁耀忠孙德惠马丽娜张杰金雷高云英刘永生西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

克隆新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)Roakin株HN基因,并构建真核表达载体。应用RT-PCR扩增出NDV Roakin株HN基因,将其克隆入pMD18-T载体,并进行了测序鉴定和HN基因的序列分析。然后分别将NDV的HN基因和选择标记基因—二氢叶酸... 详细信息

克隆新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)Roakin株HN基因,并构建真核表达载体。应用RT-PCR扩增出NDV Roakin株HN基因,将其克隆入pMD18-T载体,并进行了测序鉴定和HN基因的序列分析。然后分别将NDV的HN基因和选择标记基因—二氢叶酸还原酶(dhfr)基因插入到真核表达载体pCI-neo中,通过PCR扩增、酶切分析和测序分析等鉴定所构建的重组真核表达载体。RT-PCR扩增的NDVRoakin株HN序列与GenBank中标准毒株(登录号AY289000)HN序列同源性为99.8%,构建了HN基因的真核表达质粒pCI-HN-D。成功构建了含有NDV Roakin株HN基因和dhfr基因的真核表达载体。

关键词：新城疫病毒 HN基因 dhfr基因真核表达载体

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口蹄疫A型病毒AF/72株特异性鉴定及其豚鼠标准血清的制备

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江苏农业科学 2009年第4期37卷 253-256页

作者：杜进鑫王永录张永光方玉珍蒋守田吕建亮潘丽刘力宽中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

用口蹄疫A型病毒AF/72株的细胞毒AF/72/MF6/BF12,经测定其TCID50为108.0/ml;经RT-PCR获得其VP1基因序列,并与GenBank中的其他7株口蹄疫A型病毒株比对,同源性均大于85%;经间接夹心ELISA测定,OD值均大于0.2,且该毒仅能被口蹄疫A型标准血... 详细信息

用口蹄疫A型病毒AF/72株的细胞毒AF/72/MF6/BF12,经测定其TCID50为108.0/ml;经RT-PCR获得其VP1基因序列,并与GenBank中的其他7株口蹄疫A型病毒株比对,同源性均大于85%;经间接夹心ELISA测定,OD值均大于0.2,且该毒仅能被口蹄疫A型标准血清中和,具有型特异性;经紫外分光光度法测定其146S含量,均值为189 ng/ml,远大于22 ng/ml的国际标准。将此细胞毒与弗氏佐剂联合制成灭活疫苗免疫豚鼠后分离血清,经无菌检验和外源病毒检验,纯净性达到兽用生物制品标准要求;经ELISA检测此血清的抗体滴度、原血清、强阳性血清和弱阳性血清的中和效价均远小于1∶45。参照标准的要求,确定强阳性血清为口蹄疫A型病毒株AF/72的参考血清。

关键词： FMD 标准毒株血清

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口蹄疫A型病毒AF/72株参考血清的研制

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安徽农业科学 2009年第11期37卷 5007-5009页

作者：杜进鑫王永录张永光方玉珍蒋守田吕建亮潘丽刘力宽张淑刚李正丰张昱张中旺甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

[目的]研制口蹄疫A型病毒AF/72株参考血清,筛选对实际防疫更具针对性的A型FMD标准血清,为研发安全高效优质的A型FMD疫苗提供实物支撑。[方法]用国家口蹄疫参考实验室提供的口蹄疫A型病毒AF/72株的第12代细胞毒AF/72/MF6-BF12,经测定并经... 详细信息

[目的]研制口蹄疫A型病毒AF/72株参考血清,筛选对实际防疫更具针对性的A型FMD标准血清,为研发安全高效优质的A型FMD疫苗提供实物支撑。[方法]用国家口蹄疫参考实验室提供的口蹄疫A型病毒AF/72株的第12代细胞毒AF/72/MF6-BF12,经测定并经Kaber法计算其TCID50为10-8.0/ml;经紫外分光光度法测定其146 S含量,均值为189.0 ng/ml,远大于22.0 ng/ml的国际标准。将此细胞毒与弗氏佐剂联合制成灭活疫苗免疫豚鼠后分离得到血清。[结果]经物理性状检验、无菌检验和外源病毒检验,纯净性符合兽用生物制品标准要求;参照国际标准血清的抗体效价测定方法ELISA和微量细胞中和试验检测了此血清的抗体滴度,原血清,强阳性血清和弱阳性血清的中和效价均远小于1∶45,符合标准的要求。[结论]对比国际口蹄疫参考血清的抗体滴度确定强阳性血清为口蹄疫A型病毒AF/72株的参考血清,为以后筛选抗原谱广的制苗毒株提供实物支撑。

关键词： FMD 疫苗参考血清

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T细胞表位预测及其在抗口蹄疫病毒疫苗研发中的应用研究进展

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江苏农业科学 2009年第6期37卷 19-23页

作者：陈启伟王永录中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

随着分子免疫学研究的不断发展,对T淋巴细胞免疫分子机制的阐释,大量T细胞表位信息以及功能基因组学资料的积累,使得基于数据驱动的预测T细胞表位的研究受到重视,可能成为疫苗研发的重要工具之一。本文阐述了T细胞表位预测的理论和方法... 详细信息

随着分子免疫学研究的不断发展,对T淋巴细胞免疫分子机制的阐释,大量T细胞表位信息以及功能基因组学资料的积累,使得基于数据驱动的预测T细胞表位的研究受到重视,可能成为疫苗研发的重要工具之一。本文阐述了T细胞表位预测的理论和方法及其在抗口蹄疫病毒疫苗研发中的应用,并讨论了未来的研究方向。

关键词： T细胞表位预测疫苗口蹄疫病毒

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牛疙瘩皮肤病概述

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动物医学进展 2009年第11期30卷 118-121页

作者：芦晓立颜新敏张强中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730030

牛疙瘩皮肤病是20世纪发现的在牛群中传播的一种皮肤传染病,该病1929年最早发现于非洲,后传播到世界其他地区,常带来较大的经济损失。论文综述了牛疙瘩皮肤病病原学、流行病学、诊断和防控技术。

关键词：牛疙瘩皮肤病羊痘病毒诊断防控

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口蹄疫病毒VP31基因在昆虫细胞中的表达

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甘肃农业大学学报 2009年第5期44卷 16-19,54页

作者：孙甲川曹轶梅卢曾军刘在新魏彦明甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

研究了口蹄疫病毒(FMDV)VP31基因在昆虫细胞中的表达.结果表明:利用重组杆状病毒在昆虫细胞中成功表达了AsiaⅠ型口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白VP31基因,目的基因经亚克隆插入到含有一段蜂毒溶血肽序列的转移载体pMelBac B中,构建出穿梭质粒... 详细信息

研究了口蹄疫病毒(FMDV)VP31基因在昆虫细胞中的表达.结果表明:利用重组杆状病毒在昆虫细胞中成功表达了AsiaⅠ型口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白VP31基因,目的基因经亚克隆插入到含有一段蜂毒溶血肽序列的转移载体pMelBac B中,构建出穿梭质粒pMel-VP31.将含有目的基因的穿梭载体与线性化的杆状病毒骨架共转染昆虫Sf9细胞,通过噬斑筛选和PCR鉴定,获得了含有目的基因的重组杆状病毒.重组病毒经扩增后感染Sf9细胞,用Western-blot和间接夹心ELISA检测,证实VP31蛋白获得了表达.

关键词：口蹄疫病毒 VP31基因杆状病毒表达

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口蹄疫病毒抗原保护剂的研究

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安徽农业科学 2009年第14期37卷 6445-6447页

作者：李正丰王永录贾宁张永光方玉珍蒋守田潘丽刘力宽吕建亮张淑刚杜进鑫张昱张中旺周鹏甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州7300462

[目的]研究几种(海藻糖、蔗糖、山梨醇、聚乙烯吡咯烷酮、硫脲、明胶、L-精氨酸、抗坏血酸)保护剂,为口蹄疫抗原保护剂配方的形成提供参考。[方法]用三因素、三水平、双重复正交试验方法筛选出了对口蹄疫病毒(FMDV)抗原保护效果最好的I(... 详细信息

[目的]研究几种(海藻糖、蔗糖、山梨醇、聚乙烯吡咯烷酮、硫脲、明胶、L-精氨酸、抗坏血酸)保护剂,为口蹄疫抗原保护剂配方的形成提供参考。[方法]用三因素、三水平、双重复正交试验方法筛选出了对口蹄疫病毒(FMDV)抗原保护效果最好的I(4#)保护剂配方,以加保护剂A(已申请专利)的病毒为对照,比较其在不同条件下的TCID50和146s抗原的含量。[结果]通过方差分析4#保护剂保存病毒测得TCID50极显著的高于1、3、5、6、7、8号,显著高于2、9。将4#保护剂加入被保存的病毒抗原中,分别于4℃下保存90、120、150 d,其logTCID50分别为5.3、5.0和4.5,而加保护剂A(已申请专利)的对照病毒则为5.0、4.5和4.3;在37℃下保存40、50和60 h,其logT-CID50分别为4.5、2.5和1.0;而加保护剂A的对照病毒则为3.5、1.5和0.5,为了进一步验证保护剂对FMDV抗原的保护性能,进行了FMDV146s抗原含量的测定。分别于4℃下保存150 d,37℃下保存40 h,测得结果分别为0.796、0.462μg/ml,而加保护剂A的对照病毒则为0.602、0.307μg/ml。[结论]该复合配方保护剂I(4#)对FMDV有效抗原的保护作用优于保护剂A,尤其是病毒保护剂对提高FMDV的冷冻保存时间和耐热效能作用明显。

关键词：口蹄疫病毒抗原保护剂

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狂犬病病毒核蛋白的原核表达及纯化

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贵州农业科学 2009年第12期37卷 136-139页

作者：焦文强胡永浩殷相平李志勇柳纪省甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

采用RT-PCR方法扩增出狂犬病病毒(RV)CVS株核蛋白(N)基因,并将目的基因亚克隆入原表达载体pET-28a(+)中,经PCR、双酶切以及序列分析,结果表明:已成功构建了重组质粒。将重组质粒转化至大肠埃希氏菌Rossetta(DE3),在37℃,1 mmol/LIPTG条... 详细信息

采用RT-PCR方法扩增出狂犬病病毒(RV)CVS株核蛋白(N)基因,并将目的基因亚克隆入原表达载体pET-28a(+)中,经PCR、双酶切以及序列分析,结果表明:已成功构建了重组质粒。将重组质粒转化至大肠埃希氏菌Rossetta(DE3),在37℃,1 mmol/LIPTG条件下进行诱导表达。诱导产物经SDS-PAGE分析,在分子量约为54 KD附近出现较粗的目的带,与预期的目的蛋白分子量相符合。经表达条件优化,用1 mmol/LIPTG在37℃诱导表达5h,表达量达到最高,Western-Blotting鉴定目的蛋白有较强的免疫原性。为狂犬病毒的N蛋白的新型疫苗的制备奠定了基础。

关键词：狂犬病病毒核蛋白原核表达

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羊痘病毒P32蛋白的研究进展

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中国畜牧兽医 2009年第10期36卷 129-132页

作者：赵志荀王建科张强中国农业科学院兰州兽医研究所家畜病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046 甘肃农业大学动物医学院兰州730070

P32蛋白是所有羊痘病毒具有的结构蛋白之一,含有重要的免疫原性决定簇。P32蛋白既是致病的关键因素,也是激发机体产生抗体并产生保护性免疫的主要成分。作者就羊痘病毒P32蛋白的基因组结构、抗原表位及P32蛋白应用于羊痘病毒诊断和免疫... 详细信息

P32蛋白是所有羊痘病毒具有的结构蛋白之一,含有重要的免疫原性决定簇。P32蛋白既是致病的关键因素,也是激发机体产生抗体并产生保护性免疫的主要成分。作者就羊痘病毒P32蛋白的基因组结构、抗原表位及P32蛋白应用于羊痘病毒诊断和免疫方面的研究进展作一综述。

关键词：羊痘病毒 P32蛋白诊断免疫

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