检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2022年第4期52卷 417-428页

作者：赵登率申超超张大俊杨博郝雨张婷杨金柯史喜娟崔卉梅陈学辉袁兴国闫文倩刘霞张克山郑海学刘湘涛甘肃农业大学生命科学技术学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业农村部畜禽病毒学重点开放实验室国家非洲猪瘟区域实验室甘肃兰州730046

为探究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)对非洲猪瘟病毒(ASFV)复制的调控作用,本研究通过荧光观察、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、Western-blot检测PRRSV疫苗株和ASFV基因缺失株共感染后ASFV在猪肺泡巨噬细胞(PAMs)中的复制水平以及干扰素... 详细信息

为探究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)对非洲猪瘟病毒(ASFV)复制的调控作用,本研究通过荧光观察、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、Western-blot检测PRRSV疫苗株和ASFV基因缺失株共感染后ASFV在猪肺泡巨噬细胞(PAMs)中的复制水平以及干扰素和炎症相关细胞因子的转录水平。结果显示,同时感染和先感染PRRSV疫苗株JXA1-R可抑制ASFV基因缺失株在PAMs中的复制,且上调IFN-β、ISG-56、MX1以及TNF-α的转录水平。而间隔6/12 h再感染PRRSV疫苗株则抑制/不抑制ASFV基因缺失株的复制。本研究结果证明了PRRSV疫苗株JXA1-R可抑制ASFV基因缺失株在PAMs中的复制,并诱导干扰素和炎症相关因子的转录水平,且和PRRSV疫苗株感染时间相关。该结果为PRRSV和ASFV相关共感染研究奠定了基础。

关键词：非洲猪瘟病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒共感染猪肺泡巨噬细胞抑制

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基于16S rRNA测序技术分析山羊皮肤脓包菌群结构特征

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中国兽医科学 2021年第9期51卷 1073-1081页

作者：杨金柯郝雨崔卉梅赵登率袁兴国陈学辉杨博张婷郑海学刘湘涛张克山中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

为探讨山羊体表脓包中的微生物多样性,运用高通量测序技术对脓包积液中的16S rRNA和ITS基因测序。根据获得的有效序列和操作分类单元(OTU)数目,进行α多样性分析和菌群结构组成分析。结果表明,脓包中细菌和真菌OTU数目分别为53和410;细... 详细信息

为探讨山羊体表脓包中的微生物多样性,运用高通量测序技术对脓包积液中的16S rRNA和ITS基因测序。根据获得的有效序列和操作分类单元(OTU)数目,进行α多样性分析和菌群结构组成分析。结果表明,脓包中细菌和真菌OTU数目分别为53和410;细菌群落中优势菌属分别为葡萄球菌属(Staphylococcus,98.04%)、梭杆菌属(Fusobacterium,80.62%)和拟杆菌属(Bacteroides,19.32%),真菌群落中没有明显优势菌群。本研究通过16S rRNA高通量测序技术,分析了可能引起山羊皮肤脓包的病原微生物,为皮肤脓包病的防控和临床指导用药提供了参考。

关键词：山羊皮肤脓包 16S rRNA 微生物多样性菌群结构

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小反刍兽疫根除计划及其疫苗的最新研究进展

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中国兽医科学 2021年第4期51卷 412-420页

作者：张大俊杨博史喜绢张婷杨金柯崔卉梅赵登率袁兴国郑海学刘湘涛张克山中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

主要介绍了小反刍兽疫国内外控制和根除战略方面的内容以及近年来小反刍兽疫疫苗的最新研究进展,以期为我国小反刍兽疫的净化和根除提供参考。

关键词：小反刍兽疫全球根除计划疫苗控制

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猪繁殖与呼吸综合征病毒的纯化与形态观察

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中国兽医科学 2021年第12期51卷 1519-1524页

作者：魏德陇张婧李坤孙普白兴文包慧芳李冬刘在新卢曾军曹轶梅中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

为制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)全病毒抗原,用于免疫学研究,本研究在Marc-145细胞上繁殖了PRRSV基因Ⅱ型VR2332株,经聚乙二醇浓缩后,用蔗糖密度梯度离心法纯化PRRSV病毒粒子。用电子显微镜观察病毒粒子形态结构,并用SDS-PAGE、免... 详细信息

为制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)全病毒抗原,用于免疫学研究,本研究在Marc-145细胞上繁殖了PRRSV基因Ⅱ型VR2332株,经聚乙二醇浓缩后,用蔗糖密度梯度离心法纯化PRRSV病毒粒子。用电子显微镜观察病毒粒子形态结构,并用SDS-PAGE、免疫印迹等方法分析了纯化效果。结果显示,电子显微镜观察到PRRSV形状呈球形或椭圆形,囊膜表面有微绒毛样突起,病毒粒子大小不一,大多数直径在50~80 nm之间,有极少数直径超过120 nm。SDS-PAGE可见病毒的多个结构蛋白条带,利用感染康复猪血清进行免疫印迹检测显示,M蛋白的印迹条带最深,显示纯化病毒具有良好的反应活性,为后续免疫学研究奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒纯化形态学蔗糖密度梯度

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猪源组织蛋白酶S抑制O型口蹄疫病毒在PK-15细胞复制

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畜牧兽医学报 2021年第6期52卷 1652-1661页

作者：史喜绢刘原子张大俊侯景申超超杨博张婷袁兴国任瑞瑞杜晓华张克山郑海学刘湘涛甘肃农业大学动物医学院兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

前期研究数据表明组织蛋白酶S(cathepsin S,CTSS)在猪初乳中表达水平显著高于常乳,且CTSS有抑制病毒复制的作用,本研究旨在探究猪源CTSS对O型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus serotype O,FMDV-O)复制及对FMDV诱导的抗病毒细胞... 详细信息

前期研究数据表明组织蛋白酶S(cathepsin S,CTSS)在猪初乳中表达水平显著高于常乳,且CTSS有抑制病毒复制的作用,本研究旨在探究猪源CTSS对O型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus serotype O,FMDV-O)复制及对FMDV诱导的抗病毒细胞因子的影响。FMDV-O感染PK-15细胞,利用RT-qPCR和Western blot分别在转录和翻译水平探究FMDV-O感染对内源性CTSS表达的影响;使用CTSS活性检测试剂盒测定FMDV-O感染对CTSS酶活性的影响;根据GenBank公布的 CTSS 基因序列(XM_021089893.1)构建CTSS真核表达质粒,利用脂质体方法转染PK-15细胞,通过Western blot检测CTSS表达情况,并在此基础上通过Western blot和RT-qPCR检测过表达CTSS对FMDV-O复制及FMDV-O诱导的抗病毒细胞因子mRNA水平的影响;进一步针对CTSS设计合成3对特异性siRNA,利用Western blot和RT-qPCR检测CTSS和FMDV-O的变化。结果表明,FMDV-O感染PK-15细胞能显著上调猪源CTSS表达并增强CTSS酶活性;过表达CTSS能抑制FMDV-O在 PK-15 细胞中复制,这种抑制作用可能是通过促进FMDV-O诱导的抗病毒细胞因子产生而发挥功能的;干扰序列siRNA-2947下调内源性CTSS表达进而促进FMDV-O的复制。猪源CTSS促进宿主抗病毒细胞因子产生可能是抑制FMDV-O复制的原因之一,本研究为深入探究宿主CTSS在抗FMDV天然免疫应答中的作用及机制提供依据。

关键词：组织蛋白酶S FMDV-O PK-15细胞抗病毒功能

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布鲁氏菌S2、M5及A19疫苗不同免疫程序对细胞因子的影响

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免疫学杂志 2020年第11期36卷 984-993页

作者：孙晶晶吴锦艳陈妍曹小安尹双辉周建华兰喜李学瑞刘永生尚佑军中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室730046

目的通过对不同布鲁氏菌疫苗免疫接种途径与免疫效果之间的关系来评价商品化布鲁氏菌疫苗免疫羊后非应答组与应答组之间细胞因子分泌水平的影响,进一步探索其合理的免疫方案。方法采用试管凝集试验(SAT)和虎红平板凝集试验(RBPT)方法检... 详细信息

目的通过对不同布鲁氏菌疫苗免疫接种途径与免疫效果之间的关系来评价商品化布鲁氏菌疫苗免疫羊后非应答组与应答组之间细胞因子分泌水平的影响,进一步探索其合理的免疫方案。方法采用试管凝集试验(SAT)和虎红平板凝集试验(RBPT)方法检测羔羊进行疫苗免疫后是否产生抗体分为非应答组和应答组,并采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测羊血清中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、MCP-1和IFN-γ细胞免疫水平。结果羔羊灌服接种S2疫苗免疫14 d内,非应答组细胞因子IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、MCP-1和IFN-γ表达量均高于对照组,且IL-10表达量极显著升高(P<0.01),在免疫14 d时MCP-1的表达量显著升高(P<0.05);与非应答组相比,应答组IL-2、IL-4、IL-6和IL-10表达量均降低,MCP-1表达量升高,IFN-γ表达量则差异不大,且IL-2表达量极显著降低(P<0.01),在免疫7 d时IL-4和IL-6的表达量显著降低(P<0.05)。灌服接种M5疫苗免疫14 d内,非应答组与对照组相比,细胞因子IL-2、IL-4、IL-6和MCP-1的表达量先降低后升高,IL-10和IFN-γ表达量高于对照组;与非应答组相比,应答组IL-6和IFN-γ表达量升高,IL-4、IL-10和MCP-1先升高后降低,IL-2表达量则极显著降低(P<0.01),IL-4、IL-10、在免疫7 d时MCP-1和IFN-γ的表达量极显著升高(P<0.01)。皮下接种M5疫苗免疫14 d内,非应答组细胞因子IL-10、MCP-1和IFN-γ表达量均高于对照组,IL-2和IL-4,IL-6表达量先降低后升高,IFN-γ和MCP-1表达量显著升高(P<0.05);与非应答组相比,应答组IL-2、IL-6和IL-10的表达量均降低,IL-4的表达量升高,MCP-1和IFN-γ表达量则差异不大,且IL-2表达量极显著降低(P<0.01),在免疫14 d时IL-4的表达量显著升高(P<0.05)。皮下接种A19疫苗免疫14 d内,非应答组IL-4、IL-6、IL-10、MCP-1表达量均低于对照组,IL-2和IFN-γ表达量先升高后降低;与非应答组相比,应答组IL-4、IL-10、MCP-1和IFN-γ表达量均升高,IL-6表达量先升高后降低,IL-2的表达量则显著降低(P<0.05),在免疫7 d时IL-4和MCP-1的表达量显著升高(P<0.05),在免疫14 d时IL-4的表达量极显著升高(P<0.01),IL-10、MCP-1和IFN-γ的表达量显著升高(P<0.05)。结论 M5疫苗皮下注射接种免疫效果优于灌服接种;在灌服接种方面:S2疫苗免疫效果优于M5疫苗;在皮下注射接种方面:M5疫苗免疫效果优于A19疫苗。本研究为制定羊布鲁氏菌病合理的疫苗免疫方案提供了科学依据。

关键词：布鲁氏菌病绵羊布鲁氏菌疫苗细胞因子

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羊传染性脓疱病毒感染山羊皮肤成纤维上皮细胞差异表达miRNA分析

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畜牧兽医学报 2020年第8期51卷 1932-1938页

作者：张大俊侯景申超超徐国伟孔汉金成伟伟郑海学刘湘涛张克山中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

旨在研究羊传染性脓疱病毒(orf virus,orfv)感染山羊皮肤成纤维细胞(goat skin fibroblasts cell,GSF)对GSF细胞microRNA(miRNA)表达谱影响,探究miRNA在orfv感染过程中的作用及调控机制。分别提取感染和未感染orfv的GSF细胞总RNA,构建mi... 详细信息

旨在研究羊传染性脓疱病毒(orf virus,orfv)感染山羊皮肤成纤维细胞(goat skin fibroblasts cell,GSF)对GSF细胞microRNA(miRNA)表达谱影响,探究miRNA在orfv感染过程中的作用及调控机制。分别提取感染和未感染orfv的GSF细胞总RNA,构建miRNA文库,利用高通量测序技术进行miRNA差异表达分析,对差异表达miRNA靶基因进行预测,并进行GO和KEGG分析,随机选取10个差异miRNA进行RT-qPCR验证。结果显示,orfv感染组和未感染GSF细胞组相比共有678个显著差异表达的miRNA(fold change≥1.5),其中,上调表达miRNA有509个,下调表达miRNA有169个,uniq_miRNA的Venn图分析显示,感染组和对照组共有的miRNA仅占8.21%;GO和KEGG分析显示,差异表达miRNA主要参与脂质代谢、受体及细胞因子信号转导等细胞生物学过程,RT-qPCR验证结果与高通量测序结果一致。本研究结果表明,orfv感染GSF细胞对其编码的miRNA有显著影响,获得大量GSF细胞编码的与orfv感染相关的差异miRNA,为进一步从宿主miRNA层面揭示orfv感染和致病机制提供了参考依据。

关键词：羊传染性脓疱病毒山羊皮肤成纤维细胞病毒感染差异表达miRNA

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非洲猪瘟病毒MGF 360-9L基因序列分析、蛋白结构预测及亚细胞定位

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畜牧兽医学报 2020年第6期51卷 1371-1381页

作者：申超超李国丽张大俊徐国伟侯景李丹党文张克山郑海学刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所、家畜疫病病原生物学国家重点实验室、农业部畜禽病毒学重点开放实验室、国家口蹄疫参考实验室兰州730046

前期研究结果表明,非洲猪瘟病毒(ASFV)MGF 360-9L能显著抑制宿主天然免疫应答,故通过比较、分析ASFV中MGF 360基因序列,进一步研究MGF 360-9L基因结构和功能间的关系。本研究采用生物信息学方法,分析该基因的一级结构并预测该基因的表... 详细信息

前期研究结果表明,非洲猪瘟病毒(ASFV)MGF 360-9L能显著抑制宿主天然免疫应答,故通过比较、分析ASFV中MGF 360基因序列,进一步研究MGF 360-9L基因结构和功能间的关系。本研究采用生物信息学方法,分析该基因的一级结构并预测该基因的表达蛋白二、三级结构;根据GenBank公布的Georgia 2007/1(FR682468.1)序列,合成MGF 360-9L基因并构建其重组真核表达质粒,Western blot验证该基因表达后,将重组质粒转染至PK-15细胞,经染色后观察其蛋白的亚细胞定位。结果表明,以Ⅱ型Georgia 2007/1基因组中MGF 360-9L基因为参照,其在Ⅱ型ASFV毒株中高度保守,在54株不同基因型毒株间的相似性与ASFV系统进化关系一致,保守序列为3′末端378 bp片段,高级结构以α螺旋为主,核定位序列预测其定位于细胞核内;构建真核表达质粒,成功表达目的蛋白且定位于细胞核内。本研究结果为进一步研究MGF 360-9L基因抑制免疫应答和明确MGF 360基因家族在ASFV的致病机制积累了资料。

关键词：非洲猪瘟病毒 MGF 360-9L基因序列分析结构预测亚细胞定位

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PK-15细胞的TPL2基因敲除有利于口蹄疫病毒和塞内卡病毒复制

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畜牧兽医学报 2020年第5期51卷 1060-1073页

作者：闫鸣昊郝军红张大俊申超超徐国伟侯景张克山郑海学刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

旨在构建TPL2(MAP3K8/COT)基因敲除PK-15细胞系PK-15-TPL2^-/-,评估该基因敲除前后对口蹄疫病毒(FMDV)和塞内卡病毒(SVA)复制的影响及产生影响的原因,为研究TPL2在病毒感染过程中的作用机制提供良好的生物材料,也为疫苗生产过程中进一... 详细信息

旨在构建TPL2(MAP3K8/COT)基因敲除PK-15细胞系PK-15-TPL2^-/-,评估该基因敲除前后对口蹄疫病毒(FMDV)和塞内卡病毒(SVA)复制的影响及产生影响的原因,为研究TPL2在病毒感染过程中的作用机制提供良好的生物材料,也为疫苗生产过程中进一步提升FMDV和SVA产量指明方向。筛选2条针对TPL2基因的单向导RNA(sg RNA),合成sg RNA并将其插入到含有GFP标签的慢病毒表达载体,构建sg RNA/Cas9慢病毒表达质粒,包装慢病毒并感染PK-15细胞,通过流式细胞仪分选出已被转入sg RNA的单细胞。通过测序确认细胞系中TPL2的DNA序列,通过蛋白质印迹(Western blot)方法检测细胞系中TPL2表达情况。使用FMDV和SVA感染构建好的细胞系,利用IFA、RT-qPCR、Western blot和TCID50评估FMDV和SVA在PK-15-TPL2^-/-细胞中的复制水平,在此基础上通过测定干扰素(IFN)和IFN刺激基因(ISG)的mRNA表达水平,研究了FMDV或SVA感染的PK-15-TPL2^-/-细胞中干扰素途径的激活状态。TPL2基因敲除PK-15细胞系中TPL2基因发生了碱基插入突变和碱基缺失突变,构建的细胞系中均未检测到TPL2蛋白质表达。测定并比较了FMDV和SVA感染的PK-15和PK-15-TPL2^-/-细胞中病毒含量,表明TPL2基因敲除显著促进了FMDV和SVA的复制。同时,RT-qPCR进一步表明与FMDV和SVA感染期间的PK-15细胞相比,PK-15-TPL2^-/-细胞中IFN-α、IFN-β、IFN-γ、ISG15、ISG54和ISG56的mRNA表达明显降低。综上所述,本研究成功构建了TPL2基因敲除的PK-15细胞系,与对照细胞相比,TPL2基因的敲除更利于FMDV和SVA的复制,这可能与IFN-α、IFN-β、IFN-γ、ISG15、ISG54和ISG56表达的抑制有关。本研究提示CRISPR/Cas9基因编辑技术可以作为在动物和疫苗开发过程中编辑细胞系以提高病毒产量的有效工具,本结果为进一步提升FMDV和SVA产量指明了方向,也为研究TPL2在病毒感染过程中的作用机制提供了良好的生物材料。

关键词： TPL2基因 PK-15细胞基因敲除口蹄疫病毒塞内卡病毒

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布鲁氏菌S2、M5及A19疫苗免疫羊抗体消长规律研究

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中国预防兽医学报 2020年第3期42卷 287-292页

作者：孙晶晶吴锦艳曹小安陈妍尹双辉周建华兰喜李学瑞刘永生尚佑军中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

为评价不同商品化布鲁氏菌疫苗对小尾寒羊免疫后抗体消长规律及疫苗免疫效果,本研究选取3月龄~6月龄的羔羊随机分为5组,分别为布鲁氏菌疫苗S2口服组(70只)、A19皮下注射组(30只)、M5皮下注射组(70只)、M5口服组(70只)和对照组(30只),并... 详细信息

为评价不同商品化布鲁氏菌疫苗对小尾寒羊免疫后抗体消长规律及疫苗免疫效果,本研究选取3月龄~6月龄的羔羊随机分为5组,分别为布鲁氏菌疫苗S2口服组(70只)、A19皮下注射组(30只)、M5皮下注射组(70只)、M5口服组(70只)和对照组(30只),并采用ELISA方法检测疫苗免疫后不同时间段羊血清中IgM和IgG抗体的消长规律,用虎红平板凝集试验(RBPT)和ELISA方法检测疫苗免疫后不同时间段羊血清中抗体转阳率和抗体持续期的变化趋势,统计分析其抗体消长规律。结果显示,免疫前,所有实验羊均未检测到抗体,不同疫苗免疫后羊产生的IgM抗体水平最高的是A19皮下注射组,最低的是M5口服组,在免疫7 d^14 d内4组实验组羊的IgM抗体水平均达到峰值,其抗体持续时间在45 d^60 d。不同疫苗免疫后羊产生IgG抗体水平最高的是M5皮下注射组,最低的是M5口服组,在免疫7 d^28 d内4组实验组羊的IgG抗体水平均达到峰值,其抗体持续时间在60 d以上。M5皮下注射组、A19皮下注射组、M5口服组和S2口服组羊在免疫7 d^14 d内抗体转阳率均达到最大值:采用RBPT方法检测抗体转阳率分别为67%、56%、41%和45%,采用ELISA方法检测其抗体转阳率分别为71%、56%、37%和38%,其抗体水平持续时间约为150 d。抗体水平结果表明,A19疫苗可以用于羊布鲁氏菌病的免疫,M5疫苗皮下注射免疫羊的效果最好,口服S2的疫苗免疫效果要优于口服M5疫苗。本研究为制定羊布鲁氏菌病合理的疫苗免疫方案提供了科学依据。

关键词：布鲁氏菌病绵羊布鲁氏菌疫苗抗体消长规律

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