检索结果-内蒙古大学图书馆

福建农林大学学报（自然科学版） 2008年第5期37卷 510-513页

作者：赵萍储岳峰高鹏程贺英赵海燕逯忠新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

利用绵羊肺炎支原体标准株Y98制备抗原,经超声破碎后作为包被抗原建立了间接ELISA检测方法用于检测绵羊肺炎支原体血清抗体.经方正滴定确定了抗原包被质量浓度为2.5μ***-1,血清样品稀释倍数为1∶64,兔抗羊IgG辣根过氧化物酶结合物最佳... 详细信息

利用绵羊肺炎支原体标准株Y98制备抗原,经超声破碎后作为包被抗原建立了间接ELISA检测方法用于检测绵羊肺炎支原体血清抗体.经方正滴定确定了抗原包被质量浓度为2.5μ***-1,血清样品稀释倍数为1∶64,兔抗羊IgG辣根过氧化物酶结合物最佳稀释倍数为1∶40000,抗原抗体最佳结合时间为1 h.试验结果确定的判定标准为:样品D490 nm(P)与标准阴性血清D490 nm(N)之比,即P/N≥3.0为阳性,P/N≤2.5为阴性,介于二者之间的为可疑.试验证明该方法具有良好的稳定性、重复性和特异性,并且与间接血凝试验相比较其敏感性高于后者.

关键词：绵羊肺炎支原体间接ELISA 检测

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病毒多表位疫苗研究进展

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畜牧与兽医 2008年第10期40卷 102-106页

作者：张昱王永录中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

病毒多表位疫苗是利用免疫学和基因工程技术筛选出病毒的抗原表位,同时结合计算机技术对表位进行优化,将同一病毒的不同细胞表位或者不同亚型病毒的细胞表位串联表达而制成的新型疫苗。由于病毒多表位疫苗在安全性、稳定性以及免疫效力... 详细信息

病毒多表位疫苗是利用免疫学和基因工程技术筛选出病毒的抗原表位,同时结合计算机技术对表位进行优化,将同一病毒的不同细胞表位或者不同亚型病毒的细胞表位串联表达而制成的新型疫苗。由于病毒多表位疫苗在安全性、稳定性以及免疫效力等诸多方面的优势,已成为当前病毒疫苗研究的热点。本文从病毒抗原表位的确定方法、不同表位疫苗以及病毒多表位疫苗的免疫途径和安全性等几方面对病毒多表位疫苗作一综述。

关键词：抗原表位病毒多表位疫苗免疫途径安全性

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三株O型口蹄疫病毒单克隆抗体的抗原识别位点分析

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中国兽医科学 2008年第9期38卷 747-752页

作者：宋帅林彤邵军军丛国正独军政常惠芸胡永浩中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

用抗O型口蹄疫病毒(FMDV)单克隆抗体杂交瘤细胞株(4A9、4C3、9F12)制备腹水并进行纯化,经ELISA检测,单抗4A9、4C3和9F12的腹水效价分别为1∶25600、1∶102400和1∶51200,SDS-PAGE分析显示,3株纯化单抗均以IgG重链和轻链为主,其分子质量... 详细信息

用抗O型口蹄疫病毒(FMDV)单克隆抗体杂交瘤细胞株(4A9、4C3、9F12)制备腹水并进行纯化,经ELISA检测,单抗4A9、4C3和9F12的腹水效价分别为1∶25600、1∶102400和1∶51200,SDS-PAGE分析显示,3株纯化单抗均以IgG重链和轻链为主,其分子质量分别约为45ku和25ku。单抗4A9、4C3和9F12的饱和度分别为1∶40、1∶40和1∶1000,叠加试验所得增值指数分别为0.27%、13.05%、13.34%,均小于50%。Western-blotting结果显示,3株单抗均可与O型FMDV结构蛋白VP1发生特异性反应。表明,此3株单抗均识别O型FMDV VP1蛋白上的同一个抗原位点,存在干扰现象。

关键词： O型口蹄疫病毒单克隆抗体抗原位点

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O型口蹄疫病毒P1-2A3C基因在家蚕杆状病毒表达系统中的表达

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蚕业科学 2008年第1期34卷 148-153页

作者：张韵易咏竹李志勇张志芳柳纪省甘肃农业大学动物医学院兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046 中国农业科学院蚕业研究所江苏镇江212018

口蹄疫是一种严重危害畜牧业生产的烈性传染病。为了促进O型口蹄疫病毒(FMDV)基因工程活载体疫苗的研制,选取O型FMDV编码序列中的衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因,插入家蚕杆状病毒转移载体pVL1393中,构建重组载体pVL-P1-2A3C,并... 详细信息

口蹄疫是一种严重危害畜牧业生产的烈性传染病。为了促进O型口蹄疫病毒(FMDV)基因工程活载体疫苗的研制,选取O型FMDV编码序列中的衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因,插入家蚕杆状病毒转移载体pVL1393中,构建重组载体pVL-P1-2A3C,并与线性化病毒Bm-BacPAK6 DNA共转染家蚕BmN细胞,获得重组病毒Bm-P1-2A3C。将重组病毒感染家蚕5龄幼虫,以双抗体夹心ELISA法和间接血凝方法检测血淋巴中的表达产物:目的蛋白在感染病毒后120 h的蚕血淋巴中表达量最高,抗原表达呈阳性的最大稀释倍数为1∶128。结果显示O型FMDV的P1-2A3C基因已在家蚕体内获得表达。

关键词： O型口蹄疫病毒基因工程疫苗 P1-2A3C基因家蚕杆状病毒表达系统

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口蹄疫病毒非结构蛋白3AB基因的可溶性表达与反应原性的鉴定

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农业生物技术学报 2008年第1期16卷 15-19页

作者：祝秀梅卢曾军胡永浩曹轶梅马江涛刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃农业大学动物医学院

设计特异性引物扩增得到完整的口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白(NSP)3AB基因,定向克隆到表达载体pET-30a中,获得了重组质粒pET-3AB,并转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3),重组菌分别在37℃和28℃条件下诱导表达,表达产物经SDS-PAGE电... 详细信息

设计特异性引物扩增得到完整的口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白(NSP)3AB基因,定向克隆到表达载体pET-30a中,获得了重组质粒pET-3AB,并转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3),重组菌分别在37℃和28℃条件下诱导表达,表达产物经SDS-PAGE电泳鉴定,观察到37℃培养条件下目的蛋白形成包涵体,在28℃条件下培养目的蛋白以可溶性的形式表达。Western blot分析表明,表达的目的蛋白能与FMDV感染牛血清发生特异性反应。以纯化的3AB蛋白作为抗原,采用间接ELISA模式检测了部分FMDV感染动物血清和健康动物血清,证明表达蛋白与FMDV感染血清有很好的反应而与健康动物血清无反应。

关键词：口蹄疫病毒非结构蛋白3AB ELISA

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羊痘病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立

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江西农业大学学报 2008年第5期30卷 860-864页

作者：吴国华张强颜新敏李健朱海霞邵长春邬向东中国农业科学院兰州兽医研究所／家畜疫病病原生物学国家重点实验室／农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 江西农业大学动物科学技术学院江西南昌330045

用纯化的山羊痘病毒分别免疫家兔和豚鼠,制备高效价的抗血清。经方阵滴定测定捕获抗体、检测抗体、酶结合物和标准抗原的稀释倍数。通过对阴性样品的检测,确定阴阳性的判定标准,初步建立羊痘病毒间接夹心ELISA诊断方法。用建立的ELISA... 详细信息

用纯化的山羊痘病毒分别免疫家兔和豚鼠,制备高效价的抗血清。经方阵滴定测定捕获抗体、检测抗体、酶结合物和标准抗原的稀释倍数。通过对阴性样品的检测,确定阴阳性的判定标准,初步建立羊痘病毒间接夹心ELISA诊断方法。用建立的ELISA方法对31份已知背景样品进行检测,总符合率为93.5%。经特异性试验、批内重复试验和对比试验,说明建立的夹心ELISA诊断方法具有良好的特异性、重复性和敏感性。对田间样品的检测表明,该ELISA诊断方法可应用于对羊痘的鉴别诊断。

关键词：羊痘病毒夹心ELISA 诊断

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口蹄疫病毒株AF72 VP1的结构构建与B细胞表位预测

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生物技术通报 2008年第6期24卷 158-163页

作者：张昱王永录张永光潘丽方玉珍刘力宽蒋守田吕建亮张中旺张淑刚李正丰杜进鑫中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

以口蹄疫病毒株AF72 RNA为模板,反转录并扩增目的基因,PCR纯化产物与pGEM-T easy载体连接并转化JM109菌株,用凝胶电泳、PCR和EcoRⅠ酶切法鉴定为阳性的重组质粒进行测序。比对测序结果确定AF72 VP1的核苷酸序列,利用同源建模的方法建立A... 详细信息

以口蹄疫病毒株AF72 RNA为模板,反转录并扩增目的基因,PCR纯化产物与pGEM-T easy载体连接并转化JM109菌株,用凝胶电泳、PCR和EcoRⅠ酶切法鉴定为阳性的重组质粒进行测序。比对测序结果确定AF72 VP1的核苷酸序列,利用同源建模的方法建立AF72 VP1结构蛋白的3D结构,在此基础上,综合亲水性、可塑性、抗原指数以及表面可能性等参数预测AF72 VP1结构蛋白的B细胞抗原表位。结果显示,VP1结构蛋白呈现较规则的空间构象,其中5-11、24-30、43-47、82-87、132-147和196-203氨基酸区段是AF72 VP1结构蛋白可能的B细胞抗原表位区域,该结果将为进一步的FMDV多表位疫苗研究提供很有价值的参考信息。

关键词：口蹄疫病毒 VP1结构蛋白 3D结构 B细胞表位

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猪传染性胸膜肺炎诊断方法的研究进展