检索结果-内蒙古大学图书馆

甘肃农业大学学报 2015年第3期50卷 35-39,48页

作者：龚真莉蒋韬祁淑芸陈国栋李勇刘艳红中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 中农威特生物科技股份有限公司甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

利用微波多肽合成仪Liberty,合成O型口蹄疫病毒VP1 140～160和200～213氨基酸序列的两条肽段,并用高压液相色谱仪及质谱分析仪就合成的多肽片段进行分析纯化和鉴定;将合成的多肽片段作为半抗原与载体蛋白BSA偶联,免疫小鼠,进行血清制备... 详细信息

利用微波多肽合成仪Liberty,合成O型口蹄疫病毒VP1 140～160和200～213氨基酸序列的两条肽段,并用高压液相色谱仪及质谱分析仪就合成的多肽片段进行分析纯化和鉴定;将合成的多肽片段作为半抗原与载体蛋白BSA偶联,免疫小鼠,进行血清制备和抗体效价测定.结果表明：成功合成了口蹄疫2条免疫功能短肽,其纯度均达到80%以上.半抗原成功与载体蛋白偶联;小鼠抗血清经过抗体效价检测证明半抗原与载体蛋白偶联组的抗体水平高于其余2个对照组,但是达不到免疫保护的水平.同时说明Liberty是一种操作简单、方便,合成效率高的多肽合成仪,可高效合成研究用多肽.

关键词：口蹄疫病毒微波多肽合成免疫功能肽段

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表达H120 S基因膜外区段的重组鸡传染性支气管炎病毒的拯救

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病毒学报 2014年第6期30卷 668-674页

作者：魏衍全郭慧琛王海明孙德惠韩世充孙世琪中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

为探索以鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)Beaudette毒株为骨架表达H120纤突蛋白膜外区的可行性,本研究利用RT-PCR技术,扩增得到H120纤突基因膜外区段(1 302bp),将其置换到IBV Beaudette株全长cDNA克隆相应区段,... 详细信息

为探索以鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)Beaudette毒株为骨架表达H120纤突蛋白膜外区的可行性,本研究利用RT-PCR技术,扩增得到H120纤突基因膜外区段(1 302bp),将其置换到IBV Beaudette株全长cDNA克隆相应区段,构建了含有上述区段的重组IBV cDNA克隆BeauR-H120(S1)。然后直接将BeauR-H120(S1)作为DNA模板在体外转录出病毒基因组RNA,该转录产物电转入Vero细胞后48h收获细胞继续传代,直至第4代时出现合胞体,拯救获得一株重组IBV(rBeau-H120(S1))。通过RT-PCR方法证明rBeauH120(S1)基因组中包含有完整的H120纤突基因膜外区段。Western-blot试验证实rBeau-H120(S1)的N蛋白有表达,表明重组病毒在Vero细胞内进行了增殖。经连续传代后测定rBeau-H120(S1)的TCID50和EID50,结果显示,该重组病毒在Vero细胞中的滴度可达到105.90±0.22 TCID50/mL,在9日龄SPF鸡胚中生长滴度为106.13±0.23EID50/mL。免疫保护实验表明,在接种重组病毒21d时,鸡群抗体阳性率达到90%,使用强毒株M41(103 EID50/只)攻毒时免疫保护率为85%。本研究采用反向遗传操作技术构建的重组IBV,为进一步研制IBV重组基因工程疫苗奠定了基础。

关键词：传染性支气管炎病毒重组病毒纤突蛋白膜外区 H120株

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口蹄疫病毒O/CHN/Mya98/33-P株前导蛋白对病毒感染性的影响

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微生物学通报 2014年第10期41卷 2052-2060页

作者：张萌白兴文李平花范朋举包慧芳孙普卢曾军曹轶梅陈应理刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

【目的】研究口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)前导蛋白对于病毒感染性的影响。【方法】利用反向遗传操作技术,以O/CHN/93现用疫苗株的感染性克隆为骨架,分别构建了含口蹄疫病毒中国分离株O/CHN/Mya98/33-P和O/CHN/Mya98/... 详细信息

【目的】研究口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)前导蛋白对于病毒感染性的影响。【方法】利用反向遗传操作技术,以O/CHN/93现用疫苗株的感染性克隆为骨架,分别构建了含口蹄疫病毒中国分离株O/CHN/Mya98/33-P和O/CHN/Mya98/HN1前导蛋白的两株嵌合全长cDNA感染性克隆,采用实时荧光定量PCR检测两株不同的嵌合病毒感染猪肾原代细胞后细胞内IFNβ和OAS mRNA的转录情况。【结果】嵌合病毒rOHN1Lab增殖能力较弱,其对应诱导产生的IFNβ和OAS mRNA含量较高,而嵌合毒rO33Lab相对于rOHN1Lab增殖能力较强,他们诱导产生的IFNβ和OAS mRNA含量较低。【结论】研究表明口蹄疫病毒中国分离株O/CHN/Mya98/33-P前导蛋白具有更强的抗IFNβmRNA转录的能力,该研究能够为进一步鉴定FMDV前导蛋白抗宿主先天性免疫的关键性位点奠定基础。

关键词：口蹄疫病毒嵌合病毒前导蛋白 IFNβ 转录影响

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山羊痘病毒L1蛋白的原核表达及其功能分析

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中国兽医科学 2014年第12期44卷 1257-1261页

作者：高顺平吴国华颜新敏赵志荀于少雄朱海霞李健张强中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

为了探究山羊痘病毒L1蛋白在病毒感染Vero细胞过程中的作用,将山羊痘病毒L1蛋白基因亚克隆到pET-32a(+)原核表达载体并转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,用SDS-PAGE和Western-blot分析表达产物。表达的目的蛋白经镍亲和柱纯化后免... 详细信息

为了探究山羊痘病毒L1蛋白在病毒感染Vero细胞过程中的作用,将山羊痘病毒L1蛋白基因亚克隆到pET-32a(+)原核表达载体并转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,用SDS-PAGE和Western-blot分析表达产物。表达的目的蛋白经镍亲和柱纯化后免疫家兔制备了抗血清,通过蛋白封闭试验和血清抑制试验研究了纯化蛋白及其抗血清对山羊痘病毒感染的抑制作用。结果显示,成功表达了山羊痘病毒的L1蛋白,表达产物为48ku左右的重组蛋白,它能被山羊抗山羊痘病毒阳性血清识别。加入L1蛋白封闭,可使山羊痘病毒感染细胞的病变时间推迟12h,病毒与L1蛋白抗血清作用后效价下降了87.8%。结果表明,L1蛋白可能是山羊痘病毒的受体结合蛋白,并能在病毒侵入宿主细胞的过程中发挥重要作用。

关键词：山羊痘病毒 L1蛋白原核表达受体结合蛋白

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口蹄疫病毒A型SAP突变毒株的构建及其生物学特性的测定

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中国兽医科学 2014年第10期44卷 1003-1007页

作者：杨洋杨帆杨波郑海学中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

为了获得对牛和猪低致病性或无致病性的口蹄疫(FMD)疫苗毒株,提高疫苗毒株的生物安全性,选择口蹄疫病毒(FMDV)L蛋白酶编码基因SAP区域进行突变。利用反向遗传操作技术,构建FMDV SAP区域突变的A型病毒重组质粒prA-SAP-FMDV。利用脂质体... 详细信息

为了获得对牛和猪低致病性或无致病性的口蹄疫(FMD)疫苗毒株,提高疫苗毒株的生物安全性,选择口蹄疫病毒(FMDV)L蛋白酶编码基因SAP区域进行突变。利用反向遗传操作技术,构建FMDV SAP区域突变的A型病毒重组质粒prA-SAP-FMDV。利用脂质体将构建的重组质粒转染BHK21细胞,重组质粒能够致细胞病变(CPE)。连续传代后,经RT-PCR鉴定和间接免疫荧光试验等,SAP突变的重组病毒rA-SAP-FMDV被成功拯救。另外,比较测定了该重组毒与亲本毒rA-WT-FMDV对BHK21细胞和乳鼠的致病性;结果显示,rA-SAP-FMDV的TCID50/mL为10-7.17,LD50为10-6.5/0.2mL,与亲本毒株的生物学特性相似。这一突变SAP域的A型FMDV的获得为研发生物安全性高的A型FMD疫苗奠定了基础。

关键词： A型口蹄疫病毒反向遗传操作 SAP突变病毒拯救

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羊传染性脓疱病毒血管内皮生长因子功能研究进展

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中国人兽共患病学报 2014年第9期30卷 960-964页

作者：成伟伟张克山刘永杰孔汉金尚佑军刘湘涛刘磊中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046 甘肃农业大学动物医学院兰州730070

羊传染性脓疱是由副痘病毒属的羊传染性脓疱病毒(orfv)引起的一种重要的人兽共患性传染病,orfv血管内皮生长因子(VEGF)是其重要的毒力基因之一。VEGF具有促进宿主表皮细胞增生、引起血管内皮细胞增殖和毛细血管通透性增加等功能。本文从... 详细信息

羊传染性脓疱是由副痘病毒属的羊传染性脓疱病毒(orfv)引起的一种重要的人兽共患性传染病,orfv血管内皮生长因子(VEGF)是其重要的毒力基因之一。VEGF具有促进宿主表皮细胞增生、引起血管内皮细胞增殖和毛细血管通透性增加等功能。本文从orfv编码VEGF的抗宿主免疫活性、结构、受体和配体相互作用、结合肝素和神经粘蛋白活性等方面进行了综述,以期全面阐明orfv编码的VEGF功能。

关键词：羊传染性脓疱病毒血管内皮生长因子功能

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口疮病毒VIR蛋白多克隆抗体的制备及VIR蛋白的亚细胞定位观察

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中国兽医科学 2014年第11期44卷 1160-1165页

作者：成伟伟刘永杰孔汉金尚佑军刘湘涛刘磊张克山甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

为研究口疮病毒VIR蛋白的生物学特性,构建了含有VIR基因的重组表达质粒pET-VIR和含有绿色荧光蛋白融合真核重组质粒pEGFP-VIR;诱导表达和纯化VIR蛋白,并用纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,利用间接ELISA测定抗体效价,用Western... 详细信息

为研究口疮病毒VIR蛋白的生物学特性,构建了含有VIR基因的重组表达质粒pET-VIR和含有绿色荧光蛋白融合真核重组质粒pEGFP-VIR;诱导表达和纯化VIR蛋白,并用纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,利用间接ELISA测定抗体效价,用Western-blot鉴定抗体的反应原性。利用脂质体介导法将pEGFP-VIR质粒转染绵羊睾丸细胞,4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)进行细胞核染色后激光扫描共聚焦显微镜观察VIR在细胞内的表达和亚细胞定位。结果显示,表达和纯化了含有GST标签的GSTVIR蛋白,主要以可溶性形式存在,其分子质量约27ku,制备的多克隆抗体效价达1∶218;Western-blot分析结果显示,此多克隆抗体有较好的特异性反应;VIR蛋白主要定位于细胞核内。本试验结果为VIR生物学功能的深入研究奠定了基础。

关键词：口疮病毒 VIR蛋白抗体亚细胞定位

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山羊支原体山羊肺炎亚种单克隆抗体的制备及抗体结合抗原表位的筛选

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中国畜牧兽医 2014年第8期41卷 21-24页

作者：郑莹莹骈亚亚储岳峰赵萍贺英简莹娜姜永强逯忠新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

本研究旨在制备山羊支原体山羊肺炎亚种(***,Mccp)的单克隆抗体并筛选与抗体结合的抗原表位。试验用甲醛灭活的Mccp免疫BALB/c小鼠,运用传统的细胞融合技术进行融合获得杂交瘤细胞,亚克隆,制备单克隆抗体腹水,采用酶联免疫技术(ELISA)... 详细信息

本研究旨在制备山羊支原体山羊肺炎亚种(***,Mccp)的单克隆抗体并筛选与抗体结合的抗原表位。试验用甲醛灭活的Mccp免疫BALB/c小鼠,运用传统的细胞融合技术进行融合获得杂交瘤细胞,亚克隆,制备单克隆抗体腹水,采用酶联免疫技术(ELISA)和免疫印迹(Western blotting)技术鉴定单克隆抗体的特异性及胶内酶切鉴定与抗体结合的抗原表位。最终成功筛选获得5株单克隆抗体,鉴定到3个与抗体结合的抗原表位,为下一步科学研究提供了初步且可靠的试验基础。

关键词：山羊支原体山羊肺炎亚种单克隆抗体抗体结合的抗原表位

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猪瘟病毒P7基因的原核表达及表达产物的寡聚化研究

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中国兽医科学 2014年第3期44卷 235-239页

作者：孙德惠闫丹董虎魏衍全敖大王海明孙世琪中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 四川农业大学动物医学院动物疫病与人类健康四川省重点实验室四川雅安625014

采用RT-PCR方法从接种了猪瘟疫苗的家兔脾组织中扩增出了P7基因,将其克隆到表达载体pSMK中,测序验证后转化入表达菌BL21中进行诱导表达。结果显示,重组菌可以表达出分子质量约为19ku的重组融合蛋白,经终浓度为1mmol/L的IPTG诱导2h的表... 详细信息

采用RT-PCR方法从接种了猪瘟疫苗的家兔脾组织中扩增出了P7基因,将其克隆到表达载体pSMK中,测序验证后转化入表达菌BL21中进行诱导表达。结果显示,重组菌可以表达出分子质量约为19ku的重组融合蛋白,经终浓度为1mmol/L的IPTG诱导2h的表达效果较好。表达产物经Ni柱纯化,可得到纯度较好的目的蛋白。纯化的蛋白置于4℃2d后进行Western-blot检测,发现有多聚体形成;戊二醛交联结果表明,P7蛋白可形成同源寡聚体。此研究结果为进一步研究猪瘟病毒P7基因表达蛋白的性质和功能奠定了基础。

关键词：猪瘟病毒 P7蛋白原核表达同源寡聚

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羊传染性脓疱病毒基因组结构和主要基因功能研究进展

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动物医学进展 2014年第7期35卷 82-85页

作者：成伟伟张克山刘永杰孔汉金尚佑军刘湘涛刘磊中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

羊传染性脓疱(羊口疮)是由羊传染性脓疱病毒(羊口疮病毒,ORFV)引起的一种重要人兽共患传染病,ORFV作为副痘病毒属的代表成员之一,其基因组结构和功能具有明显的种属特异性。ORFV基因组是由中央核心区和两端反向末端重复序列构成,中央核... 详细信息

羊传染性脓疱(羊口疮)是由羊传染性脓疱病毒(羊口疮病毒,ORFV)引起的一种重要人兽共患传染病,ORFV作为副痘病毒属的代表成员之一,其基因组结构和功能具有明显的种属特异性。ORFV基因组是由中央核心区和两端反向末端重复序列构成,中央核心区主要调控病毒的复制、组装和释放,两端重复序列则决定ORFV的毒力、宿主范围、参与免疫逃避及免疫调节。论文综述了ORFV的基因组结构及功能最新研究进展。

关键词：羊传染性脓疱病毒基因组结构及功能

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