检索结果-内蒙古大学图书馆

免疫学杂志 2013年第6期29卷 531-534页

作者：周涛贾怀杰何小兵管齐赛景志忠中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室 730046

CD4+T细胞表位通过激活CD4+T细胞从而介导并调节抗肿瘤或抗感染免疫反应。本文根据CD4+T细胞表位分析方法的最新研究进展,简要介绍CD4+T细胞表位预测分析法与实验鉴定法的基本原理和方法,为高通量筛选和鉴定CD4+T细胞表位提供指导。

关键词： T细胞表位 CD4+T细胞表位预测表位鉴定

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寄生性蠕虫组织蛋白酶F研究进展

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2013年第5期31卷 406-409页

作者：曲自刚付宝权中国农业科学院兰州兽医研究所.家畜疫病病原生物学国家重点实验室.农业部兽医公共卫生重点开放实验室.甘肃省动物寄生虫病重点实验室.兰州730046

组织蛋白酶F(cathepsin F)是半胱氨酸蛋白酶家族木瓜蛋白酶亚家族的重要成员。寄生性蠕虫组织蛋白酶F可水解半胱氨酸蛋白酶特异性底物,降解血红蛋白等宿主蛋白作为营养物质,参与虫体入侵,且具有免疫反应性,可作为寄生虫病免疫诊断、疫... 详细信息

组织蛋白酶F(cathepsin F)是半胱氨酸蛋白酶家族木瓜蛋白酶亚家族的重要成员。寄生性蠕虫组织蛋白酶F可水解半胱氨酸蛋白酶特异性底物,降解血红蛋白等宿主蛋白作为营养物质,参与虫体入侵,且具有免疫反应性,可作为寄生虫病免疫诊断、疫苗研制和抗寄生虫药物筛选的潜在靶点,对寄生虫病防治具有重要意义。本文综述了组织蛋白酶F的结构特征、作用机制及寄生性蠕虫组织蛋白酶F的研究进展。

关键词：寄生性蠕虫组织蛋白酶F 酶活性免疫反应性

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伪狂犬病病毒载体及其应用的研究进展

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中国兽医科学 2013年第10期43卷 1094-1099页

作者：何妍萍贾怀杰王盈盈刘太安景志忠中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃兰州730046 武威市畜牧兽医局甘肃武威733000

随着对伪狂犬病病毒(PRV)基因组及其分子生物学特性研究的逐渐深入,人们应用基因工程原理与技术不断对PRV进行有目的的改造,从而研发了多种PRV载体疫苗。这种疫苗不仅可以提供对猪伪狂犬病的免疫预防,而且还能产生针对其他病原的保护性... 详细信息

随着对伪狂犬病病毒(PRV)基因组及其分子生物学特性研究的逐渐深入,人们应用基因工程原理与技术不断对PRV进行有目的的改造,从而研发了多种PRV载体疫苗。这种疫苗不仅可以提供对猪伪狂犬病的免疫预防,而且还能产生针对其他病原的保护性反应,具有非常大的潜在应用价值。本文对伪狂犬病病毒载体及其应用研究进行了综述,并对动物病毒基因工程疫苗今后的发展方向作了展望,以探讨更安全、高效新型疫苗的设计和创制。

关键词：伪狂犬病病毒基因缺失疫苗重组病毒载体

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旋毛虫组织蛋白酶B基因TsCB1的克隆与生物信息学分析

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中国兽医科学 2013年第7期43卷 661-667页

作者：谢志宙李文卉曲自刚刘静宜高小磊岳龙张德林付宝权中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

为了研究旋毛虫组织蛋白酶B的功能,对GenBank中旋毛虫基因组数据库和EST数据库进行检索,获得旋毛虫组织蛋白酶B的cDNA序列并设计引物。以旋毛虫肌幼虫总RNA为模板,进行RT-PCR,将PCR产物克隆到pMD18-T载体后测序并进行生物信息学分析。... 详细信息

为了研究旋毛虫组织蛋白酶B的功能,对GenBank中旋毛虫基因组数据库和EST数据库进行检索,获得旋毛虫组织蛋白酶B的cDNA序列并设计引物。以旋毛虫肌幼虫总RNA为模板,进行RT-PCR,将PCR产物克隆到pMD18-T载体后测序并进行生物信息学分析。结果表明,成功克隆到旋毛虫组织蛋白酶B基因(TsCB1)的cDNA序列,TsCB1cDNA含有1个由1 449个核苷酸组成的完整的开放阅读框,编码482个氨基酸残基组成的多肽,蛋白质分子质量理论值为55.1ku,理论等电点为7.66。TsCB1第1～35位氨基酸残基为信号肽序列,有2个潜在的N-糖基化位点,具有1个生长调节素B结构域和半胱氨酸蛋白酶结构域,半胱氨酸残基活性位点被丝氨酸残基所替换,同源性分析表明与其他线虫组织蛋白酶B的一致性在60%左右。

关键词：旋毛虫组织蛋白酶B 克隆生物信息学分析

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羊痘野毒感染与弱毒免疫iELISA鉴别诊断方法的建立

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中国兽医科学 2013年第7期43卷 701-706页

作者：李慧霞朱学亮刘振勇窦永喜李辉骆学农才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

为建立一种方便、灵敏、有效的检测羊痘野毒感染的iELISA方法,以山羊痘病毒基因组DNA为模板,PCR扩增获得ORF95和ORF103基因的完整ORF,连接至克隆载体pMD18-T。测序正确后,将两基因片段分别与表达载体pET-30a(+)连接,构建原核表达载体pET... 详细信息

为建立一种方便、灵敏、有效的检测羊痘野毒感染的iELISA方法,以山羊痘病毒基因组DNA为模板,PCR扩增获得ORF95和ORF103基因的完整ORF,连接至克隆载体pMD18-T。测序正确后,将两基因片段分别与表达载体pET-30a(+)连接,构建原核表达载体pET-95和pET-103,转入BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导,SDS-PAGE分析后,用纯化的两种重组蛋白进行iELISA方法研究。结果显示,ORF95和ORF103大小分别为483bp和570bp,重组菌经1mmol/L IPTG诱导5h后,分别在30ku和35ku处有高水平的融合表达,且均以包涵体形式存在。两种目的蛋白以10ng+20ng混合作为包被抗原时,该iELISA方法检测羊痘自然感染血清、弱毒疫苗免疫羊血清和阴性血清的D450nm有明显差异,且与口蹄疫病毒、小反刍兽疫病毒、羊口疮病毒无交叉反应。因此,该方法能有效排除羊痘弱毒疫苗免疫造成的干扰,可特异性检测羊痘野毒感染的血清样品。

关键词：山羊痘病毒绵羊痘病毒 ORF95基因 ORF103基因间接酶联免疫吸附试验

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稳定表达外源TLR9基因的山羊胎儿成纤维细胞系的建立

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中国兽医科学 2013年第6期43卷 605-611页

作者：刘太安房永祥贾怀杰马保华何小兵管齐赛陈国华曾爽姚文娟景志忠中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃兰州730046 西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100

为提供制备抗病转基因山羊核供体细胞,研究Toll样受体9(Toll like receptor 9,TLR9)对山羊抗病性能的影响,应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从山羊外周血单核细胞中克隆了TLR9基因,并对其遗传进化关系及分子结构特征进行了分析,... 详细信息

为提供制备抗病转基因山羊核供体细胞,研究Toll样受体9(Toll like receptor 9,TLR9)对山羊抗病性能的影响,应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从山羊外周血单核细胞中克隆了TLR9基因,并对其遗传进化关系及分子结构特征进行了分析,发现克隆的基因具有Toll样受体家族的典型结构特征,其遗传进化关系与物种亲缘关系密切相关。将克隆的山羊TLR9基因亚克隆至pIRES2-EGFP真核表达载体,转染山羊胎儿成纤维细胞,经G418筛选以及阳性细胞基因组PCR鉴定和荧光观察证实,外源TLR9基因确已稳定整合入转染阳性细胞克隆基因组中并获得表达。成功建立了稳定表达外源TLR9的山羊胎儿成纤维细胞系,为培育抗病转基因山羊奠定了基础。

关键词： TLR9基因转基因山羊山羊胎儿成纤维细胞稳定表达

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羊口疮病毒ORF129基因重组质粒的构建及其在BHK-21细胞中的表达

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甘肃农业大学学报 2013年第5期48卷 8-13页

作者：白刚贾怀杰何小兵王盈盈何妍萍吴润景志忠甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃兰州730046

为研究羊口疮病毒(ORFV)ORF129基因编码的锚蛋白调节宿主天然免疫应答的作用机制,利用PCR技术对ORFV/QH01/2010分离株ORF129基因进行扩增,并连接到pGEM-T easy载体,构建pGEM-ORF129重组质粒,双酶切后与pEGFP-N1真核表达载体连接,构建pEG... 详细信息

为研究羊口疮病毒(ORFV)ORF129基因编码的锚蛋白调节宿主天然免疫应答的作用机制,利用PCR技术对ORFV/QH01/2010分离株ORF129基因进行扩增,并连接到pGEM-T easy载体,构建pGEM-ORF129重组质粒,双酶切后与pEGFP-N1真核表达载体连接,构建pEGFP-ORFV-ORF129真核表达质粒,经酶切、PCR鉴定及测序正确后转染BHK-21细胞,观察其在细胞中的表达情况.结果表明:ORFV ORF129基因在BHK-21细胞中获得稳定表达,并为进一步研究其编码蛋白在ORFV感染过程中的分子机制奠定了基础.

关键词：羊口疮病毒 ORF129基因 BHK-21细胞融合表达

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猪伪狂犬病毒BarthaK61株TK缺失株的构建

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甘肃农业大学学报 2013年第6期48卷 13-18页

作者：何妍萍贾怀杰蔺国珍王盈盈白刚胡永浩景志忠甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃兰州730046

为构建猪伪狂犬病毒BarthaK61株TK缺失株,利用PCR法从猪伪狂犬病毒BarthaK61株基因组分别扩增出TK基因的左右2条臂TKR和TKL,并将TKR和TKL定向插入到pQCXIX载体中,构建pTK-转移质粒.进一步将EGFP基因插入到pTK-质粒中,构建pTK-/EGFP转移... 详细信息

为构建猪伪狂犬病毒BarthaK61株TK缺失株,利用PCR法从猪伪狂犬病毒BarthaK61株基因组分别扩增出TK基因的左右2条臂TKR和TKL,并将TKR和TKL定向插入到pQCXIX载体中,构建pTK-转移质粒.进一步将EGFP基因插入到pTK-质粒中,构建pTK-/EGFP转移质粒.用pTK-/EGFP质粒与伪狂犬病毒BarthaK61株基因组共转染BHK-21细胞,通过挑取病变荧光蚀斑的方法获得了PRV/gE-/TK-/EGFP重组病毒.

关键词：伪狂犬病毒 TK缺失转移载体

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羊衣原体的分离鉴定及PCR诊断方法的建立

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黑龙江畜牧兽医 2013年第12期 104-106页

作者：王光华叶成玉周继章陆艳马利青青海省畜牧兽医科学院西宁810016 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室兰州730046

为了研究青海省乌兰县牧户母羊流产的病因,试验采用临床症状观察、显微镜观察、鸡胚培养和PCR检测等方法对病原进行了鉴定,并建立衣原体PCR诊断方法对病原体进行了敏感性和稳定性检测。结果表明:引起母羊流产的病原为羊流产嗜性衣原体... 详细信息

为了研究青海省乌兰县牧户母羊流产的病因,试验采用临床症状观察、显微镜观察、鸡胚培养和PCR检测等方法对病原进行了鉴定,并建立衣原体PCR诊断方法对病原体进行了敏感性和稳定性检测。结果表明:引起母羊流产的病原为羊流产嗜性衣原体。说明建立的PCR方法能够对羊衣原体病原作出正确的检测,可用于羊衣原体病的实验室诊断。

关键词：羊衣原体病分离鉴定 MOMP基因

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青海牦牛BVDV E0基因的表达与抗原性检测

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中国兽医杂志 2013年第4期49卷 12-14页

作者：王光华叶成玉蔡其刚王戈平陆艳张芳芳马利青周继章青海省畜牧兽医科学院青海西宁810016 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃兰州730046

将青海牦牛病毒性腹泻病毒(BVDV)QHZK株的E0基因亚克隆入原核表达载体pET-32(α),构建了重组表达载体pET-32(α)-E0,然后用重组质粒转化Rosetta(DE3)感受态细胞,并利用IPTG诱导蛋白表达。表达的蛋白用His-Band镍柱进行亲合层析纯化,West... 详细信息

将青海牦牛病毒性腹泻病毒(BVDV)QHZK株的E0基因亚克隆入原核表达载体pET-32(α),构建了重组表达载体pET-32(α)-E0,然后用重组质粒转化Rosetta(DE3)感受态细胞,并利用IPTG诱导蛋白表达。表达的蛋白用His-Band镍柱进行亲合层析纯化,Western-blot鉴定表达蛋白。结果显示,E0基因可在大肠杆菌中获得表达,表达产物的分子质量约为44ku,与预计的蛋白分子质量大小一致。Western-blot分析表明,该蛋白可以与BVDV标准阳性血清产生特异性结合反应,具有良好的抗原性,为BVDV亚单位疫苗的研究奠定了基础。

关键词： BVDV E0基因原核表达抗原性

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