检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2014年第10期44卷 1029-1035页

作者：乔洋洋陈蕾孙铭苑朱学亮王海明窦永喜才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃兰州730046

为了研究绵羊CD46蛋白的功能,根据从GenBank数据库获得的绵羊CD46基因的部分cDNA序列设计引物,以绵羊外周血淋巴细胞总RNA为模板,应用RACE方法扩增了绵羊CD46基因的完整开放阅读框序列,利用生物信息学软件对CD46cDNA及CD46蛋白结构进行... 详细信息

为了研究绵羊CD46蛋白的功能,根据从GenBank数据库获得的绵羊CD46基因的部分cDNA序列设计引物,以绵羊外周血淋巴细胞总RNA为模板,应用RACE方法扩增了绵羊CD46基因的完整开放阅读框序列,利用生物信息学软件对CD46cDNA及CD46蛋白结构进行了预测分析。结果显示,绵羊CD46cDNA序列开放阅读框长1 083bp,编码由360个氨基酸残基组成的多肽,该多肽的理论分子质量为39ku,理论等电点为6.5。对该蛋白结构分析时发现,绵羊CD46第1~42位氨基酸残基为信号肽序列,共有5处N糖基化位点,4处蛋白激酶C磷酸化位点,5处Ⅱ-酪蛋白激酶磷酸化位点,7处N-豆蔻酰化位点。二级结构中无α螺旋,β折叠占26.1%,其余73.9%为转角,该蛋白具有4个结构域,与人源CD46的同源性较高。同时将CD46基因克隆到pCMV-Myc载体中,构建了真核表达质粒pCMV-Myc-CD46;将构建的重组质粒转染哺乳动物细胞CHO-K1以进行瞬时表达。Western-blot结果显示,CD46基因在真核细胞中成功获得了表达。上述研究结果为以后开展绵羊CD46的功能研究奠定了基础。

关键词：绵羊 CD46基因 3′/5′RACE 序列分析免疫印迹

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羊口疮病毒甘肃流行株的分离鉴定及其ORF059基因和ORF109基因的序列分析

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中国兽医科学 2013年第8期43卷 782-787页

作者：王盈盈贾怀杰白刚何妍萍景志忠中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃兰州730046

利用羊睾丸(lamp testicles,LT)细胞从采自甘肃省玉门市疑似羊口疮病羊的病料中分离病毒,并对其进行培养和PCR鉴定;结果,从疑似病料中成功分离到1株流行于我国甘肃省的羊口疮病毒,遂将其命名为ORFV/GSYM/2012/China。然后对分离株的ORF... 详细信息

利用羊睾丸(lamp testicles,LT)细胞从采自甘肃省玉门市疑似羊口疮病羊的病料中分离病毒,并对其进行培养和PCR鉴定;结果,从疑似病料中成功分离到1株流行于我国甘肃省的羊口疮病毒,遂将其命名为ORFV/GSYM/2012/China。然后对分离株的ORF059基因(编码F1L蛋白)和ORF109基因(编码EEV糖蛋白)进行克隆、测序并进行遗传进化分析和编码蛋白的二级结构预测。序列分析表明,F1L基因长1 017bp,共编码338个氨基酸,与ORFV Jilin、Jilin-Nongan、Shanxi、GanS和NA1-11株的核苷酸同源性分别为97.9%、99.8%、96.2%、97.3%和99.9%。遗传进化分析结果表明,此分离株与我国Jilin-Nongan、GanS株,意大利Ov-7、Ov-C2株及新西兰NZ2分离株的亲缘性较近,表明不同地区分离毒株的F1L基因差异不大。该分离毒株ORF109基因长495bp,编码164个氨基酸。ORF109基因序列分析表明,此分离株与德国D1701株的相似性最高;经预测,ORF109蛋白的二级结构中含1个跨膜区,属于亲水性膜蛋白。

关键词：羊口疮病毒甘肃分离鉴定 F1L基因 ORF109基因克隆序列分析

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牛趋化因子受体4基因的克隆表达及序列分析

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中国兽医科学 2009年第11期39卷 1003-1009页

作者：李小庆何延华陈国华房永祥冯海燕赵娜景志忠中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃兰州730046

采用RT-PCR技术,从被刺激诱导的牛外周血单个核细胞（PBMC）中克隆了牛趋化因子受体4（CXCR4）全长基因,并将CXCR4基因和CXCR4基因N端1~126 bp（CXCR442 aa）片段分别亚克隆到原核表达载体pGEX-4T-1中,命名为pGEX-4T-1-CXCR4、pGEX-4T-1... 详细信息

采用RT-PCR技术,从被刺激诱导的牛外周血单个核细胞（PBMC）中克隆了牛趋化因子受体4（CXCR4）全长基因,并将CXCR4基因和CXCR4基因N端1~126 bp（CXCR442 aa）片段分别亚克隆到原核表达载体pGEX-4T-1中,命名为pGEX-4T-1-CXCR4、pGEX-4T-1-CXCR442 aa。获得重组菌株后,采用不同的IPTG浓度、不同诱导时间、不同温度和不同培养基等组合诱导表达这两种重组菌,其中pGEX-4T-1-CX-CR442 aa重组菌获得了表达,并在37℃、IPTG浓度为0.8 mmol/L、诱导6 h时表达量最大,约占菌体总蛋白的45%,目的蛋白主要以包涵体的形式存在;而pGEX-4T-1-CXCR4重组菌未表达出目的蛋白。

关键词：牛 CXCR4基因克隆表达结构预测

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猪T细胞受体β链CDR3的多样性及其分子结构的遗传特征

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中国兽医科学 2014年第6期44卷 641-649页

作者：姚文娟房永祥贾怀杰何小兵曾爽陈国华刘泰安景志忠中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃兰州730046

通过带谱分型技术研究临床健康猪T细胞受体(TCR)β链CDR3的谱型种类及多样性,并对其序列进行生物信息学分析,以探究CDR3分子结构的遗传特征。结果显示,20个TRBV家族在3头猪中均有表达,且大部分TRBV家族CDR3的谱型呈现类高斯分布,具有丰... 详细信息

通过带谱分型技术研究临床健康猪T细胞受体(TCR)β链CDR3的谱型种类及多样性,并对其序列进行生物信息学分析,以探究CDR3分子结构的遗传特征。结果显示,20个TRBV家族在3头猪中均有表达,且大部分TRBV家族CDR3的谱型呈现类高斯分布,具有丰富的多样性;同一个体中不同TRBV家族CDR3出现的频次相差较大,同一TRBV家族在不同个体中出现的频次也不相同;100多条猪TCRβ链基因序列的CDR3分析发现,其大小在33~66nt之间,出现频次最多的序列为第42位碱基;在CDR3核苷酸序列组成中,鸟嘌呤的含量较高,推测其编码甘氨酸的频次较高;TCRβ链CDR3的两侧由相对保守的氨基酸组成,中间部分氨基酸变化较大,其中在第5位和第8位的氨基酸组成差异最大,确认CDR3的多样性和复杂性主要由D区两端的N插入序列及拼接时的灵活性造成。本研究结果为T细胞TCR分子的功能复杂性与特异性研究提供了一定的理论依据。

关键词： T细胞受体 TRBV家族带谱分型技术 CDR3 分子结构

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牛胸腺素原α基因的原核表达与分析鉴定

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中国兽医科学 2011年第12期41卷 1242-1247页

作者：李小庆陈国华房永祥何延华冯海燕景志忠中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃兰州730046

为了把牛胸腺素原α(ProTα)开发为免疫增强剂,从重组克隆载体pMD18-T-ProTα上扩增ProTα基因,分别构建和筛选出了pGEX-4T-1-ProTα、pET-30a(+)-ProTα的BL21、BL21codon plus和Rosetta Blue(DE3)plys重组原核表达菌株,采用不同的条件组合对其进行诱导表达。结果,重组菌BL21codon plus-pET-30a(+)-ProTα表达出约24ku和30ku两个蛋白条带,且在37℃、IPTG浓度为0.5mmol/L、诱导3h时表达量最大,重组蛋白主要以可溶性形式存在;而pGEX-4T-1-ProTα重组菌在诸多条件下都未表达出目的蛋白。纯化产物的Western-blot分析显示,重组蛋白可与兔抗人ProTα多抗发生特异性免疫反应,表明重组蛋白具有免疫学活性结构。研究结果为重组ProTα蛋白的结构与功能研究奠定了基础。

关键词：胸腺素原α 原核表达优化鉴定

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寄生性线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂研究进展

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2012年第2期30卷 146-151页

作者：姚菊霞付宝权中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室兰州730046

半胱氨酸蛋白酶抑制剂(cysteine protease inhibitor,CPI或cystatin)是半胱氨酸蛋白酶可逆性紧密结合的天然抑制剂。寄生性线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂不仅具有独特的半胱氨酸蛋白酶抑制活性,而且还可以调节宿主免疫反应,在寄生虫逃避宿... 详细信息

半胱氨酸蛋白酶抑制剂(cysteine protease inhibitor,CPI或cystatin)是半胱氨酸蛋白酶可逆性紧密结合的天然抑制剂。寄生性线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂不仅具有独特的半胱氨酸蛋白酶抑制活性,而且还可以调节宿主免疫反应,在寄生虫逃避宿主免疫应答,适应寄生生活中起着重要作用。本文综述了半胱氨酸蛋白酶抑制剂的基本类型、结构特征和作用机制,以及寄生性线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂的研究进展。

关键词：寄生性线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂免疫调节

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豆状囊尾蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂(serpin)的多抗制备、组织分布及活性研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2020年第5期38卷 595-601页

作者：王莉杰王立群刘婷丽张少华刘光学李艳萍梁盼红骆学农中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室兰州730046

目的研究豆状囊尾蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂(Cpserpin)的组织分布及其对丝氨酸蛋白酶的抑制效果。方法利用原核表达的重组Cpserpin (rCpserpin)免疫家兔,采用间接ELISA检测免疫后血清的效价,取免疫兔血清,制备抗体并纯化后,采用Western blot... 详细信息

目的研究豆状囊尾蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂(Cpserpin)的组织分布及其对丝氨酸蛋白酶的抑制效果。方法利用原核表达的重组Cpserpin (rCpserpin)免疫家兔,采用间接ELISA检测免疫后血清的效价,取免疫兔血清,制备抗体并纯化后,采用Western blotting对多克隆抗体进行特异性分析,通过免疫组化试验分别观察rCpserpin在豆状带绦虫成虫和幼虫中的组织分布。构建重组质粒pPIC9K-Cpserpin,线性化后转化至毕赤酵母KM71感受态细胞,用G418筛选的高拷贝菌株进行诱导表达并纯化rCpserpin,采用发色底物法检测不同浓度(6、9、 18、 21μg/ml) rCpserpin对0.5μg/mlα-糜蛋白酶、胰蛋白酶和弹性蛋白酶等3种丝氨酸蛋白酶活性的抑制效果。结果间接ELISA检测结果显示,免疫血清多抗IgG抗体的效价达1∶51 200。Western blotting分析结果显示,纯化后的多克隆抗体可与rCpserpin和兔豆状囊尾蚴虫体可溶性抗原产生特异性反应。免疫组化试验结果显示,Cpserpin在囊尾蚴阶段表达量很低,但在成节和孕节中高度表达,广泛分布于虫体体壁和虫卵中。酵母表达的rCpserpin随浓度增加对α-糜蛋白酶、胰蛋白酶和弹性蛋白酶的抑制效果分别增强,在21μg/ml浓度时,对3种丝氨酸蛋白酶的抑制率最高,分别为(50.5±2.5)%、(71.5±1.5)%和(77.4±1.5)%(均P <0.05)。结论 rCpserpin多克隆抗体具有特异性,在豆状囊尾蚴成节和孕节中高表达,且其对α-糜蛋白酶、胰蛋白酶和弹性蛋白酶有较强的抑制作用。

关键词：豆状囊尾蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂组织分布酶活性

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弓形虫入侵宿主机制及免疫学研究进展

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2012年第6期30卷 480-485,490页

作者：蒲元华张德林中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室兰州730046

刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种专性细胞内寄生虫,对人类健康和畜牧业的发展造成严重危害。近年来,对弓形虫入侵宿主的机制及免疫学方面进行了大量研究,取得了许多重要的研究进展,有助于深入了解弓形虫的致病机制和进行免疫预防... 详细信息

刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种专性细胞内寄生虫,对人类健康和畜牧业的发展造成严重危害。近年来,对弓形虫入侵宿主的机制及免疫学方面进行了大量研究,取得了许多重要的研究进展,有助于深入了解弓形虫的致病机制和进行免疫预防。本文拟从细胞与分子生物学角度阐述弓形虫入侵宿主细胞的过程,并综述宿主感染弓形虫后不同免疫细胞的作用以及不同器官的免疫应答。

关键词：弓形虫入侵机制免疫细胞免疫学

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羊传染性脓疱病毒ORF047基因表达及其蛋白在细胞中的定位分析

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中国人兽共患病学报 2018年第2期34卷 129-132页

作者：陈国华贾怀杰何小兵王春燕金启旺景志忠中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点实验室兰州730046

目的克隆羊传染性脓疱病毒(Orf virus,ORFV)ORF047基因,并进行真核表达及亚细胞定位,为筛选与其相互作用的蛋白提供依据。方法提取羊传染性脓疱病毒分离株的DNA,以其为模板,参照OV-SA00毒株(NC-005336.1)基因ORF047序列,采用PCR技术扩增... 详细信息

目的克隆羊传染性脓疱病毒(Orf virus,ORFV)ORF047基因,并进行真核表达及亚细胞定位,为筛选与其相互作用的蛋白提供依据。方法提取羊传染性脓疱病毒分离株的DNA,以其为模板,参照OV-SA00毒株(NC-005336.1)基因ORF047序列,采用PCR技术扩增ORFV ORF047基因片段,凝胶回收后将其插入pEGFP-N1载体,构建重组质粒pEGFPORF047,测序后重组质粒共转染293T细胞,Western blotting鉴定融合蛋白的表达。后将重组质粒pEGFP-ORF047与pHcRed1-Nuc、pHCRed1-mito、pHcRed1-ER分别共转染Vero-E6细胞,通过激光共聚焦显微镜对融合蛋白进行亚细胞定位分析。结果 ORFV ORF047基因片段大小为735bp;重组质粒pEGFP-ORF047能够在293T细胞中明显表达融合有目的分子的绿色荧光蛋白,Western blotting检测表达的融合蛋白大小约54kD;亚细胞定位分析表明,ORF047蛋白主要定位于胞浆中,少量在线粒体中。结论成功分析了ORF047基因的表达与其蛋白在亚细胞定位。

关键词：羊传染性脓疱病毒 ORF047基因定位

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CpG DNA重组质粒对猪O型口蹄疫病毒抗原的免疫佐剂效应

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畜牧兽医学报 2009年第6期40卷 862-866页

作者：景志忠蒙学莲窦永喜陈国华房永祥黄银君王超英刘西兰张军才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室兰州730046

作者应用含CpG基序序列的重组质粒（即CpG DNA）作为免疫佐剂,评价其对猪O型口蹄疫病毒抗原疫苗的免疫增强效果。结果表明：CpG DNA重组质粒与猪口蹄疫灭活病毒抗原疫苗配伍免疫小鼠,CpG DNA重组质粒对小鼠具有较强的免疫佐剂效应,能促... 详细信息

作者应用含CpG基序序列的重组质粒（即CpG DNA）作为免疫佐剂,评价其对猪O型口蹄疫病毒抗原疫苗的免疫增强效果。结果表明：CpG DNA重组质粒与猪口蹄疫灭活病毒抗原疫苗配伍免疫小鼠,CpG DNA重组质粒对小鼠具有较强的免疫佐剂效应,能促进口蹄疫病毒抗原诱导产生较高水平的特异性抗体,其抗体滴度是空载体疫苗对照的2倍。CpG DNA重组质粒与商品化猪口蹄疫灭活疫苗配伍免疫试验猪,其增强抗原诱导的特异性抗体滴度最高可达标准疫苗的4倍以上,也显著高于空载体疫苗对照与病毒纯化抗原配伍免疫动物,攻毒后其免疫保护效力的PD50高达13.00,远高于标准疫苗对照（PD504.69）。在CpG DNA重组质粒剂量选择试验中,含低剂量的CpG DNA疫苗（50、200μg.头份-1）都比高剂量组（500μg.头份-1）诱导的抗体滴度高,其中50和200μg.头份-1的CpG DNA剂量,在接种后14~32 d诱导的抗体滴度高达1∶1500,是标准疫苗的4~5倍,而500μg.头份-1剂量诱导的抗体仅是标准疫苗的2倍,说明CpG DNA重组质粒在低剂量时即可发挥强烈的佐剂效应。研究表明CpG DNA对猪O型口蹄疫病毒抗原疫苗有较强的免疫佐剂效应,且使用剂量低,应用前景广阔。

关键词： CpGDNA O型口蹄疫病毒抗原佐剂效应

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