检索结果-内蒙古大学图书馆

中国病毒病杂志 2019年第3期9卷 188-194页

作者：耿嘉谦贾怀杰陈国华何小兵房永祥景志忠王晓霞兰州大学公共卫生学院营养与食品卫生学研究所甘肃兰州730000 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃兰州730046

目的克隆羊口疮病毒QH02株ORF011基因并进行序列分析及原核表达、鉴定。方法提取羊口疮病毒QH02株的DNA,根据GenBank中(GU320351.1)的序列设计并合成引物,PCR扩增ORF011基因。将测序正确的序列用生物信息学软件对其基因及蛋白的结构进... 详细信息

目的克隆羊口疮病毒QH02株ORF011基因并进行序列分析及原核表达、鉴定。方法提取羊口疮病毒QH02株的DNA,根据GenBank中(GU320351.1)的序列设计并合成引物,PCR扩增ORF011基因。将测序正确的序列用生物信息学软件对其基因及蛋白的结构进行预测,并将基因构建至pET-32a(+)原核表达载体,转化至大肠埃希菌BL21(DE3),挑取阳性克隆测序正确后用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-d-thiogalactoside, IPTG)诱导表达,经十二烷基硫酸钠-十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE)、Western-blot验证重组蛋白反应原性。结果 PCR扩增得到1 137 bp的ORF011基因片段,重组蛋白在大肠埃希菌中以包涵体的形式存在,重组蛋白相对分子质量为60×10~3,且纯度较高,Western-blot检测结果表明目的蛋白具有较好的反应原性。结论构建的原核表达系统可以成功表达B2L蛋白,经Western-blot验证具有良好的反应原性,可作为羊口疮防控产品研发的候选分子。

关键词：羊口疮病毒 ORF011基因克隆生物信息学分析原核表达

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猪瘟C株疫苗诱导PBMCs中SLA等位基因差异性表达分析

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动物医学进展 2018年第2期39卷 7-13页

作者：李守杰贾怀杰成温玉王春燕金启旺景志忠中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃兰州730046

猪主要组织相容性复合体(SLA)广泛参与机体免疫应答与调节,具有重要的免疫学研究意义。在转录水平上对猪瘟C株疫苗免疫后猪外周血单个核细胞(PBMCs)中SLA的表达情况进行了初步研究。猪瘟C株疫苗免疫试验猪后,在0、3、5、9d分别采集4头... 详细信息

猪主要组织相容性复合体(SLA)广泛参与机体免疫应答与调节,具有重要的免疫学研究意义。在转录水平上对猪瘟C株疫苗免疫后猪外周血单个核细胞(PBMCs)中SLA的表达情况进行了初步研究。猪瘟C株疫苗免疫试验猪后,在0、3、5、9d分别采集4头猪的抗凝血分离外周血单个核细胞,通过逆转录荧光定量PCR技术(RT-qPCR)对外周血单个核细胞中的SLA进行转录水平的相对定量检测;并对试验猪SLA上调表达明显的cDNA模板进行了SLAⅡ类分子的克隆、测序及其系统发育树分析。结果显示,猪瘟C株疫苗免疫后,PBMCs中SLAⅠ、SLAⅡ类分子在短时间内均出现上调表达,一段时间后发生回降;测序分析发现,上调表达的SLA-DRA、SLA-DRB分子中存在高频表达序列。结果提示,猪瘟C株疫苗能够刺激机体产生猪瘟病毒相关的免疫应答,并存在SLA等位基因优势选用现象,这种优势选用可为猪瘟表位肽疫苗的研制提供理论依据。

关键词：猪主要组织相容性复合体猪瘟C株疫苗差异表达

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基于serpin重组蛋白的豆状囊尾蚴病间接ELISA诊断方法的初步建立

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中国兽医科学 2018年第4期48卷 443-449页

作者：王莉杰张少华毛立梁盼红王力王立群骆学农中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室

为检测兔豆状囊尾蚴（Cysticercus pisiformis）感染，利用cDNA末端快速扩增技术（RACE）扩增豆状囊尾蚴serpin基因，并对其开放阅读框（ORF）及编码的氨基酸序列进行生物信息学分析。构建pET-30a（＋）-Cpserpin重组表达载体，并在大... 详细信息

为检测兔豆状囊尾蚴（Cysticercus pisiformis）感染，利用cDNA末端快速扩增技术（RACE）扩增豆状囊尾蚴serpin基因，并对其开放阅读框（ORF）及编码的氨基酸序列进行生物信息学分析。构建pET-30a（＋）-Cpserpin重组表达载体，并在大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达。以纯化的重组蛋白（rCpserpin）为包被抗原．优化反应条件，建立检测兔豆状囊尾蚴病血清抗体的间接ELISA方法。结果表明，Cpserpin基因的完整ORF长为l149bp，含有serpin家族保守基序（DEEGAE）、serpin标签序列（FKVDHPFIFFI）以及serpin特有的反应中心环结构域（RCL）；rCpserpin主要以包涵体形式表达，且能被家兔豆状囊尾蚴阳性血清所识别。所建立的间接ELISA的最佳反应条件包括：rCpserpin包被质量浓度为2μg／mL，待检血清和酶标二抗的稀释度分别为1：100和1：2500，包被液和封闭液分别为pH9．6碳酸盐缓冲液和10g/L牛血清白蛋白。利用上述条件检测60份家兔豆状囊尾蚴阳性血清和108份阴性血清，证实该方法的临界值为0．368，敏感性和特异性分别为96．7％和93．5％。结果表明，基于Cpserpin重组蛋白的间接ELISA方法可用于家兔豆状囊尾蚴病的血清学诊断。

关键词：豆状囊尾蚴 Cpserpin 原核表达间接ELISA

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禽滑液囊支原体诊断与防控技术研究进展

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黑龙江畜牧兽医 2018年第9期 31-34,245页

作者：王昆宫晓炜陈启伟郑福英中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室/草食动物细菌病创新团队

禽滑液囊支原体（Mycoplasma synoviae,MS）感染是一种以亚临床型上呼吸道感染为最常表现特征的禽支原体感染,一经发病,会给养殖户带来严重的经济损失。MS感染引起的滑膜炎可引起鸡关节肿大,同时累及气囊、腱鞘和胸骨。肿胀的足垫和关... 详细信息

禽滑液囊支原体（Mycoplasma synoviae,MS）感染是一种以亚临床型上呼吸道感染为最常表现特征的禽支原体感染,一经发病,会给养殖户带来严重的经济损失。MS感染引起的滑膜炎可引起鸡关节肿大,同时累及气囊、腱鞘和胸骨。肿胀的足垫和关节可作为MS感染进展的指标,会导致鸡进行性消瘦。文章从MS诊断方法、药物治疗、疫苗免疫及净化鸡群等方面综合阐述了实验室检测MS所涉及的相关技术要点、鸡场MS防治所采取的相关措施及研究进展,旨在为鸡场MS清除计划提供最佳方案。

关键词：滑液囊支原体(MS) 流行病学诊断方法耐药性疫苗防控措施

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禽滑液囊支原体WF224株的分离鉴定及其致病性的研究

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中国兽医科学 2018年第4期48卷 472-478页

作者：王昆宫晓炜郑福英陈启伟刘永生杜晓华甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃兰州730046

摘要：用禽支原体16SrRNA引物对山东省潍坊市某养鸡场疑似禽滑液囊支原体（Mycoplasma synoviae，MS）感染的气管棉拭子病料进行了PCR鉴定。结果可扩增到特异性条带。通过分离纯化获得MS分离株CHN—WF224—2016；低倍显微镜观察到，菌... 详细信息

摘要：用禽支原体16SrRNA引物对山东省潍坊市某养鸡场疑似禽滑液囊支原体（Mycoplasma synoviae，MS）感染的气管棉拭子病料进行了PCR鉴定。结果可扩增到特异性条带。通过分离纯化获得MS分离株CHN—WF224—2016；低倍显微镜观察到，菌落呈典型的“荷包蛋”状；生化鉴定结果表明，该分离株能发酵葡萄糖，不水解精氨酸，不利用尿素。然后，将测序后的16SrRNA序列上传GenBank。MEGA分析和构建的系统发育树表明，CHN—WF224—2016分离株与其他MS菌株在同一进化分支上，为禽滑液囊支原体；其中与MS标准菌株（WVU1853）和河南商丘分离株（CHN-SQ27—2017）的相似性分别为99％和98％。用MS分离株CHN-WF224—2016感染21日龄的鸡．攻毒后第11天和第21天进行实验室解剖，观察临床症状及气管粘膜病理形态学改变：结果表明．分离株CHN—WF224-2016能引起典型的足垫肿胀和关节滑液囊炎。本研究结果证实。CHN—WF224—2016分离株致病性强，可作为今后疫苗研究的候选菌株。

关键词：禽滑液囊支原体 16sRNA 系统发育树致病性

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人工感染细粒棘球蚴犬粪中蛋白质组的分析

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动物医学进展 2018年第1期39卷 7-15页

作者：李双男闫鸿斌李立姚刚田文俊李文卉张念章吴燕涛付宝权贾万忠中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点实验室/甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

收集感染细粒棘绦虫原头蚴后不同时间的犬粪,分离和提取蛋白质,对蛋白质在胶内酶切后,依次进行质谱分析、生物信息学和蛋白质功能富集分析。结果发现,在犬粪中共鉴定出蛋白质3 242个,其中宿主(犬)蛋白有3 107个、细粒棘球绦虫蛋白有135... 详细信息

收集感染细粒棘绦虫原头蚴后不同时间的犬粪,分离和提取蛋白质,对蛋白质在胶内酶切后,依次进行质谱分析、生物信息学和蛋白质功能富集分析。结果发现,在犬粪中共鉴定出蛋白质3 242个,其中宿主(犬)蛋白有3 107个、细粒棘球绦虫蛋白有135个。蛋白质功能富集结果显示,犬感染细粒棘球绦虫后,寄生虫与宿主相互作用,虫体在不同时间分泌特定蛋白,而蛋白质的分子生物学功能存在一定差异。研究结果对建立粪抗原诊断方法和研究细粒棘球绦虫感染宿主后的代谢途径及其生活机制提供了重要依据。

关键词：细粒棘球绦虫犬粪不同时间蛋白质组生物信息学分析

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cGAS-STING信号通路抗ECTV感染的作用机制研究

cGAS-STING信号通路抗ECTV感染的作用机制研究

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中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第六次学术研讨会

作者：成温玉何小兵贾怀杰高真贞景志忠中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室

天花的消灭为人类疾病防治和免疫学的发展奠定了伟大的基础。然而,随着恐怖主义的猖獗,痘病毒可能被恐怖分子作为一种生物武器而威胁公众的生命安全;加之正痘病毒属的其他病原,例如猴痘病毒(monkeypox,MPXV),牛痘病毒(cowpox,CPXV)以及... 详细信息

天花的消灭为人类疾病防治和免疫学的发展奠定了伟大的基础。然而,随着恐怖主义的猖獗,痘病毒可能被恐怖分子作为一种生物武器而威胁公众的生命安全;加之正痘病毒属的其他病原,例如猴痘病毒(monkeypox,MPXV),牛痘病毒(cowpox,CPXV)以及痘苗病毒(vaccinia virus,VACV)引起人和动物零星的甚至小规模的感染,使得人们再一次注重对痘病毒的研究。鉴于鼠痘病毒(ectromelia virus,ECTV)与其他正痘病毒具有相近的遗传特性与类似的感染症状,但其宿主范围较窄,只感染鼠类,而其它正痘病毒却能感染人类和动物,宿主范围广泛,因此ECTV可作为研究正痘病毒与宿主互作机制以及痘病毒跨种感染与传播机制的理想模型。为了探究机体对痘病毒感染的免疫应答机制,选取ECTV感染小鼠为痘病毒的疾病模型,利用芯片转录组学分析感染ECTV后小鼠的免疫应答反应,我们发现c GAS-STING通路及相关分子的表达出现了显著性上调。依据cGAS在天然免疫应答中的重要性,利用感染试验证实ECTV具有诱导早期Ⅰ型IFNs的表达能力。采用双荧光素酶报告系统发现,cGAS和STING都具有启动ECTV诱导的IFN-β表达的能力;在鼠源细胞系L929上的过表达和RNAi试验证实,cGAS和STING具有显著影响ECTV诱导的IFN-β表达的能力,而在NIH3T3上却没有相似的作用。TBK1和IRF3的磷酸化检测证实,ECTV能够诱导L929和RAW264.7细胞中TBK1和IRF3磷酸化以及IFN-β的分泌,却不能诱导NIH3T3细胞中这些分子的表达,表明NIH3T3对ECTV的感染不应答。利用基因敲除细胞证实,cGAS-STING-TBK1-IRF3信号通路参与了ECTV诱导的IFN-β的产生,同时cGAS和STING具有限制ECTV增殖的能力。低剂量的ECTV感染试验显示,缺失TLR9和STING的小鼠Ⅰ型IFNs的表达受到抑制,脾脏和肝脏存在更多的病毒量且小鼠对ECTV更易感;而在高感染剂量(106PFU)的情况下,缺失cGAS(cGAS-/-)的小鼠才表现出类似的结果。总之,这些数据充分证实,c GAS-STING信号转导通路在拮抗ECTV感染中起到至关重要的作用。不仅为宿主与痘病毒的研究提供了线索,而且加深了我们对机体抗病毒机制的认识。

关键词：鼠痘病毒 cGAS-STING信号通路 Ⅰ型IFNs 抗病毒免疫

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载脂蛋白B mRNA编辑酶催化亚基3A的表达及其DNA去甲基化功能鉴定

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兰州大学学报（医学版） 2018年第3期44卷 8-15页

作者：魏小乐王晓霞贾怀杰景志忠王永祥谭继英兰州大学基础医学院免疫学研究所甘肃兰州730000 兰州大学公共卫生学院营养与食品卫生学研究所甘肃兰州730000 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃兰州730046

目的真核细胞内,DNA甲基化调控在转座子沉默、基因表达调控、甚至病毒感染过程中起关键作用,其中HIV-1启动子的甲基化修饰在病毒潜伏感染中扮演重要角色。为明确载脂蛋白B mRNA编辑酶催化亚基3A(APOBEC3A,A3A)对HIV-1启动子5'LTR上... 详细信息

目的真核细胞内,DNA甲基化调控在转座子沉默、基因表达调控、甚至病毒感染过程中起关键作用,其中HIV-1启动子的甲基化修饰在病毒潜伏感染中扮演重要角色。为明确载脂蛋白B mRNA编辑酶催化亚基3A(APOBEC3A,A3A)对HIV-1启动子5'LTR上CpG岛甲基化程度的调节作用,本研究构建并筛选出A3A异构体A3A Isotype a(A3Aa)和A3A Isotype b(A3A-b)高表达真核载体,分析其去甲基化功能。方法从THP-1细胞mRNA中扩增得到A3A-a和A3A-b的c DNA,分别克隆至真核表达载体pASIB-HA和pCAGGS-HA。转染HEK-293T细胞,蛋白印迹法检测A3A-a和A3A-b的蛋白表达,并筛选出A3A-a和A3A-b的高表达载体。接着将A3A-a和A3A-b高表达载体与实验室构建并修饰的HIV-1启动子甲基化载体p-me LTR-EGFP共转染HEK-293T,检测指示蛋白EGFP在细胞水平中的表达,评价A3A-a和A3A-b的去甲基化调节作用。结果 PCR结果、酶切鉴定和测序结果均表明A3A真核表达载体pASIB-HA-A3A1-a、pCAGGS-HA-A3A2-a、pASIB-HA-A3A1-b、pCAGGS-HA-A3A2-b构建成功。经过筛选,pCAGGS-HA-A3A2-a和pCAGGS-HA-A3A2-b中A3A蛋白表达量最高,并用于后续实验。甲基化载体共转染实验显示,相较于对照A3G转染组,A3A-a和A3A-b组中EGFP的表达量明显上调。结论本研究在细胞水平上证实A3A分子Isotype a和Isotype b均可识别DNA中5-甲基化胞嘧啶,催化HIV-1启动子CpG岛去甲基化,为后续研究A3A对HIV潜伏感染调控奠定了基础。

关键词： APOBEC3A HIV-1启动子 DNA去甲基化真核表达载体

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畜禽支原体耐药性及耐药机制研究进展

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中国畜牧兽医 2017年第8期44卷 2489-2495页

作者：宫晓炜马文瑛陈启伟郑福英刘永生中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室草食动物细菌病创新团队兰州730046

支原体感染给畜禽养殖造成的危害已受到国内外科研人员的广泛重视。目前控制畜禽支原体感染、降低畜禽养殖经济损失的切实有效方法是大量使用抗生素,其中四环素、大环内酯类及喹诺酮类药物是现阶段临床兽医首选的3类抗菌药。但短短几十... 详细信息

支原体感染给畜禽养殖造成的危害已受到国内外科研人员的广泛重视。目前控制畜禽支原体感染、降低畜禽养殖经济损失的切实有效方法是大量使用抗生素,其中四环素、大环内酯类及喹诺酮类药物是现阶段临床兽医首选的3类抗菌药。但短短几十年的临床实践表明,滥用抗生素已经严重威胁畜禽健康,许多畜禽支原体临床分离株不仅仅对单一抗生素产生耐药性,而且同时对多种抗生素耐药。作者从药物靶位点改变、外排泵系统形成、抗菌药物灭活酶产生等方面对上述抗畜禽支原体药物的耐药机制进行阐述,以期为建立支原体耐药性检测体系、指导临床合理用药、开发新的药物等提供理论依据和策略。

关键词：畜禽支原体耐药性耐药机制

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猪带绦虫Ddi1-like蛋白的真核表达及其抗血清的制备

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中国兽医科学 2017年第5期47卷 582-586页

作者：何伟殷静岳生赟刘仲藜王帅才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

为了对DNA损伤诱导蛋白1(Ddi1-like)基因功能进行研究,本研究参考GeneDB中猪带绦虫基因组注释信息,通过设计5′和3′端特异性引物,利用cDNA末端快速扩增法(RACE)获得全长cDNA,并在毕赤酵母GS115中进行诱导表达;将纯化后的Ddi1-like重组... 详细信息

为了对DNA损伤诱导蛋白1(Ddi1-like)基因功能进行研究,本研究参考GeneDB中猪带绦虫基因组注释信息,通过设计5′和3′端特异性引物,利用cDNA末端快速扩增法(RACE)获得全长cDNA,并在毕赤酵母GS115中进行诱导表达;将纯化后的Ddi1-like重组蛋白免疫新西兰大白兔,制备抗血清。结果,成功利用RACE获得Ddi1-like基因的全长cDNA序列;在真核表达系统中,绦虫上的Ddi1-like重组蛋白获得表达;SDS-PAGE和Western-blot分析表明,获得重组蛋白即为Ddi1-like蛋白;免疫后获得抗血清,其效价达到1∶12 800。上述结果为后续研究Ddi1-like蛋白的酶切活性研究提供了基础。

关键词：绦虫 Ddi1-like蛋白真核表达蛋白酶

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