检索结果-内蒙古大学图书馆

华北农学报 2007年第6期22卷 14-18页

作者：高闪电独军政常惠芸周建华谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

首次从FMDV试验感染康复猪的舌皮和肺组织中克隆到了整联蛋白β1亚基的基因并对其核苷酸序列和推导的氨基酸序列以及蛋白结构进行了分析。猪整联蛋白β1亚基基因的编码区含有2397个核苷酸，编码798个氨基酸残基，含有10个潜在的糖基化... 详细信息

首次从FMDV试验感染康复猪的舌皮和肺组织中克隆到了整联蛋白β1亚基的基因并对其核苷酸序列和推导的氨基酸序列以及蛋白结构进行了分析。猪整联蛋白β1亚基基因的编码区含有2397个核苷酸，编码798个氨基酸残基，含有10个潜在的糖基化位点（NXTX/NXSX），2个表皮生长因子相似结构域和3个半胱氨酸丰富区。其信号肽由20个氨基酸组成，胞外域由708个氨基酸组成，跨膜区由29个氨基酸组成，胞浆域由41个氨基酸组成。猪脚基因与牛、猩猩、猫、犬、人、小鼠和鸡的脚基因的核苷酸序列一致性分别为99．5％，90．0％，91．8％，90．7％，90．2％，86．5％和77．4％，推导的氨基酸序列一致性分别为99．9％，93．9％，97．5％，96．7％，94．2％，92．4％和94．9％。通过生物学软件分析发现β1亚基形成复杂的二、三级结构，其中1～20位、729～757位氨基酸区段疏水性较强，分别是该亚基的信号肽和跨膜区。为进一步深入研究FMDV嗜性、与宿主细胞的相互作用、病毒的侵入机制等问题奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒受体猪整联蛋白β1基因分子特征

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AsiaⅠ口蹄疫病毒VP1蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第11期23卷 1034-1037页

作者：林彤常惠芸杜惠芬邵军军独军政丛国正中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 甘肃省雅华生物技术有限公司甘肃兰州730050

目的:制备AsiaI口蹄疫病毒VP1蛋白单克隆抗体(mAb)并进行鉴定。方法:用纯化的AsiaI型口蹄疫病毒VP1表位重组蛋白为抗原免疫6～8周龄的雌性BALB/c小鼠,经过3次免疫后,取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合。采用有限稀释法和间接ELISA克隆和... 详细信息

目的:制备AsiaI口蹄疫病毒VP1蛋白单克隆抗体(mAb)并进行鉴定。方法:用纯化的AsiaI型口蹄疫病毒VP1表位重组蛋白为抗原免疫6～8周龄的雌性BALB/c小鼠,经过3次免疫后,取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合。采用有限稀释法和间接ELISA克隆和筛选阳性杂交瘤细胞株,用SDS-PAGE电泳、间接ELISA以及微量细胞中和试验对所获得的mAb的特异性进行鉴定。结果:成功获得3株能稳定传代并分泌抗AsiaImAb的杂交瘤细胞株,分别命名为:1B8、5E1、5E2,其分泌的mAb为IgG1(1B8)和IgG2a(5E1、5E2)亚类,他们均能特异性的识别VP1重组蛋白和AsiaI型全病毒,其腹水效价在1:105～1:106。微量细胞中和试验表明该mAb能很好地识别灭活的FMDV,中和效价达1:1024以上。交叉试验表明该mAb具有高度特异性,型间无交叉反应,证明所获得的mAb均完全针对AsiaI FMDV抗原决定簇。结论:在口蹄疫病毒mAb的研究中,VP1重组蛋白有望代替活病毒来制备mAb。AsiaI口蹄疫病毒VP1mAb的成功制备,为进一步研究和开发新型口蹄疫的检测方法和抗原表位奠定了基础。

关键词： AsiaI型口蹄疫 VP1蛋白重组抗原单克隆抗体

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胸膜肺炎放线杆菌APX ⅢA基因的克隆及原核表达

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黑龙江畜牧兽医 2007年第11期 73-75页

作者：贺英逯忠新石琴赵萍储岳峰高鹏程中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus ***，APP）是引起猪传染性胸膜肺炎（porcine infectious pleuropneumonia）的病原菌。该菌为革兰阴性菌，根据其生长是否需要V因子（NAD，尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸）可将其分为2个生物型，即生物Ⅰ型... 详细信息

胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus ***，APP）是引起猪传染性胸膜肺炎（porcine infectious pleuropneumonia）的病原菌。该菌为革兰阴性菌，根据其生长是否需要V因子（NAD，尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸）可将其分为2个生物型，即生物Ⅰ型和生物Ⅱ型。生物Ⅰ型具有致病性。根据可溶性荚膜多糖（CPS）和脂多糖（LPS）的特性，可将生物Ⅰ型分为12个血清型。

关键词：胸膜肺炎放线杆菌原核表达 APX 猪传染性胸膜肺炎克隆基因革兰阴性菌生物型

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我国禽衣原体病流行情况及防制措施

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中国家禽 2007年第10期29卷 26-27页

作者：周继章邱昌庆中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

禽衣原体病（avian chlamydiosis，AC）是由鹦鹉热嗜性衣原体（Chlamydophila psittaci）感染禽类引起的一种接触性传染病。同义名有鹦鹉热、鸟疫，前者指鹦鹉感染的AC；后者主要指鹦鹉以外的鸟类感染的AC。实际上，从鹦鹉及非鹦鹉鸟类... 详细信息

禽衣原体病（avian chlamydiosis，AC）是由鹦鹉热嗜性衣原体（Chlamydophila psittaci）感染禽类引起的一种接触性传染病。同义名有鹦鹉热、鸟疫，前者指鹦鹉感染的AC；后者主要指鹦鹉以外的鸟类感染的AC。实际上，从鹦鹉及非鹦鹉鸟类分离出的致病性衣原体株可以交叉感染，引起同样的疾病。AC是一种全球性疫病，几乎所有的禽种均可自然感染衣原体。

关键词：衣原体病禽类防制措施流行情况交叉感染接触性传染病鹦鹉热自然感染

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猪胸膜肺炎放线杆菌结构蛋白基因ApxIVA特异性片段的表达和纯化

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江西农业大学学报 2007年第2期29卷 246-249,256页

作者：石琴逯忠新贺英赵萍储岳峰高鹏程中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

以猪胸膜肺炎放线杆菌的血清8型分离株Hpn-405株基因组DNA为模板,PCR方法扩增ApxIVA特异性片段,PCR产物经纯化后与载体pMD18-T进行连接、转化,经酶切及序列分析鉴定后,亚克隆到原核表达载体pET-28a中,构建成重组表达质粒pET-ApxIVA3,转... 详细信息

以猪胸膜肺炎放线杆菌的血清8型分离株Hpn-405株基因组DNA为模板,PCR方法扩增ApxIVA特异性片段,PCR产物经纯化后与载体pMD18-T进行连接、转化,经酶切及序列分析鉴定后,亚克隆到原核表达载体pET-28a中,构建成重组表达质粒pET-ApxIVA3,转入到大肠埃希氏菌BL21(DE3)中,以IPTG进行诱导重组蛋白的表达,SDS-PAGE检测结果显示,表达的融合蛋白分子质量约为18 ku,与预期片段大小相符;将经过超声破碎的菌液离心取沉淀经尿素洗涤溶解后用镍金属螯合层析柱进行纯化。Western-blot分析证实,该融合蛋白具有免疫学活性。

关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌 ApxIVA,表达蛋白纯化

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丝状支原体山羊亚种抗体间接血凝检测方法的建立及应用

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畜牧与兽医 2007年第10期39卷 64-66页

作者：储岳峰逯忠新赵萍高鹏程贺英石琴中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

将丝状支原体山羊亚种PG3株经超声波破碎处理后的产物致敏经戊二醛和鞣酸处理过的绵羊红细胞,建立了检测丝状支原体山羊亚种抗体的间接血凝试验方法。抗原致敏红细胞的最佳浓度是100～125μg/mL,超免血清抗体效价达1:512～1:1024。免疫... 详细信息

将丝状支原体山羊亚种PG3株经超声波破碎处理后的产物致敏经戊二醛和鞣酸处理过的绵羊红细胞,建立了检测丝状支原体山羊亚种抗体的间接血凝试验方法。抗原致敏红细胞的最佳浓度是100～125μg/mL,超免血清抗体效价达1:512～1:1024。免疫山羊2周后血清抗体检出率为83.3%,对羊布氏杆菌、绵羊肺炎支原体阳性血清检测均为阴性,敏感性明显高于琼脂扩散试验。对628份田间血清进行检测,阳性率为44.9%。结果表明,该法敏感性较高、特异性强和重复性好,可用于山羊传染性胸膜肺炎免疫抗体水平的监测和流行病学调查。

关键词：丝状支原体山羊亚种间接血凝试验抗体检测

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H9N2亚型禽流感病毒HA基因的原核表达及其免疫反应性分析

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中国人兽共患病学报 2007年第12期23卷 1249-1251,1254页

作者：易华山侯顺利独军政常惠芸丛国正胡永浩中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046 甘肃农业大学动物医学院兰州730070

目的对禽流感病毒HA基因进行原核表达并对其产物进行免疫反应性分析。方法采用PCR方法扩增禽流感病毒A/Ck/GS/2/99(H9N2)的HA基因(1723bp);并将该片段克隆至pET-28a(+)质粒,构建重组质粒pET-HA,用该重组质粒转化***21(DE3)感受态细胞,... 详细信息

目的对禽流感病毒HA基因进行原核表达并对其产物进行免疫反应性分析。方法采用PCR方法扩增禽流感病毒A/Ck/GS/2/99(H9N2)的HA基因(1723bp);并将该片段克隆至pET-28a(+)质粒,构建重组质粒pET-HA,用该重组质粒转化***21(DE3)感受态细胞,以终浓度0.7mmol/L的IPTG诱导表达7h。结果成功构建了表达载体pET-HA,该载体能高效表达HA蛋白,相对分子质量约62kDa,在约62kDa处出现一条明显的特异性蛋白条带。结论成功表达了禽流感病毒HA蛋白,该蛋白纯化产物能与H9亚型的AIV鸡血清发生特异性反应。

关键词：禽流感血凝素 H9N2 原核表达免疫反应性

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猪链球菌2型mrp基因ORF1序列的克隆及原核表达

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中国兽医科学 2007年第8期37卷 675-678页

作者：孙瑜隆柳纪省魏虎来李学瑞兰州大学医学试验中心甘肃兰州730000 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

根据猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白基因(mrp)的序列,设计并合成了1对特异性引物,以青海株的基因组DNA为模板扩增了mrp基因ORF1序列。将PCR产物进行了T/A克隆,转化大肠杆菌,鉴定成功获得目的片段后,将其定向亚克隆到pET-28a(+)中,构建了原... 详细信息

根据猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白基因(mrp)的序列,设计并合成了1对特异性引物,以青海株的基因组DNA为模板扩增了mrp基因ORF1序列。将PCR产物进行了T/A克隆,转化大肠杆菌,鉴定成功获得目的片段后,将其定向亚克隆到pET-28a(+)中,构建了原核表达质粒pET-28a-mrp,并将其转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中,经1 mmol/L IPTG诱导和SDS-PAGE分析,出现了与预期目的蛋白一致的外源蛋白带(27.0 ku)。Western-blot分析表明,该融合蛋白具有MRP的抗原表位。研究结果为今后开展该病的免疫学研究奠定了一定基础。

关键词：猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白融合表达

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H9N2亚型禽流感病毒聚合酶基因的克隆及序列分析

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中国兽医科学 2007年第3期37卷 195-199页

作者：侯顺利易华山独军政胡永浩常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

采用RT-PCR方法对1株H9N2亚型禽流感病毒Ck/GS/2/99株RNA聚合酶基因PB2、PB1和PA分别进行了扩增,将其克隆到pGEM-T easy载体后进行序列测定与分析。结果表明,该株病毒的PB2、PB1和PA基因开放阅读框(ORF)分别由2280、2274和2 151个碱基组... 详细信息

采用RT-PCR方法对1株H9N2亚型禽流感病毒Ck/GS/2/99株RNA聚合酶基因PB2、PB1和PA分别进行了扩增,将其克隆到pGEM-T easy载体后进行序列测定与分析。结果表明,该株病毒的PB2、PB1和PA基因开放阅读框(ORF)分别由2280、2274和2 151个碱基组成,分别编码759、757和716个氨基酸。经同源性与系统发生树分析,该毒株RNA聚合酶基因PB2、PB1和PA与Ck/NX/4/99株的核苷酸和氨基酸同源性均在98%以上,另外这3个基因与Dk/HK/Y280/97、Sw/HK/9/98和Qu/HK/NT/28/99株的关系密切。

关键词：禽流感病毒 H9N2亚型A/Chicken/Gansu/2/99株聚合酶基因序列分析

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转亚洲Ⅱ型口蹄疫病毒VP1基因烟草研究

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2007年第1期35卷 33-36页

作者：王文秀顾节清陈德坤邓文潘丽王宝琴王永录张永光西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

将亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒结构蛋白VP 1基因克隆到植物表达质粒pB in438中,构建了植物表达载体pB in-VP 1,通过根癌农杆菌叶盘转化法,将亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒结构蛋白VP 1基因导入NC 89烟草基因组中,对经卡那霉素筛选获得的20株抗性植株,进行... 详细信息

将亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒结构蛋白VP 1基因克隆到植物表达质粒pB in438中,构建了植物表达载体pB in-VP 1,通过根癌农杆菌叶盘转化法,将亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒结构蛋白VP 1基因导入NC 89烟草基因组中,对经卡那霉素筛选获得的20株抗性植株,进行PCR和RT-PCR检测。结果表明,抗性烟草植株中已整合了VP 1基因。

关键词：亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒 VP1基因植物表达载体

来源：评论

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