检索结果-内蒙古大学图书馆

狂犬病病毒CVS株G基因和IFN-α基因的克隆及双基因真核表达载体的构建

动物医学进展 2007年第9期28卷 11-14页

作者：李江涛殷相平柳纪省李宝玉李学瑞杨彬兰喜胡永浩中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

从狂犬病病毒CVS毒株致死的小鼠脑组织中提取总RNA,通过RT-PCR获得G基因;以pMD18-T-α质粒为模板,PCR扩增得到IFN-α基因。两个基因和pIRES真核表达载体分别双酶切,连接构建p IRES-G/IFN-α,经PCR、双酶切鉴定和测序证明载体构建成功。... 详细信息

从狂犬病病毒CVS毒株致死的小鼠脑组织中提取总RNA,通过RT-PCR获得G基因;以pMD18-T-α质粒为模板,PCR扩增得到IFN-α基因。两个基因和pIRES真核表达载体分别双酶切,连接构建p IRES-G/IFN-α,经PCR、双酶切鉴定和测序证明载体构建成功。测得的G基因序列长1 575 bp,与CVS株G基因氨基酸同源性为98.5%;IFN-α序列长为570 bp,与GenBank中登录号为NM 001017411的IFN-α基因氨基酸同源性为91.6%。

关键词：狂犬病痛毒CVS毒株 G基因 α干扰素 pIRES载体

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O型口蹄疫单克隆抗体6H4株金标试纸条的制备

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甘肃农业大学学报 2007年第3期42卷 20-23页

作者：林彤常惠芸吴海波邵军军独军政丛国政李克生杜惠芬中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃省医学科学院医学生物技术中心甘肃兰州730050

以制备的O型口蹄疫单克隆抗体为基础,结合免疫金技术,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,对6H4单克隆抗体进行标记,制备了该单克隆抗体的金标试纸条.研究结果表明,6H4单克隆抗体在pH 8.64下的稳定点为12 mg/L,可制备成金标记抗体及其... 详细信息

以制备的O型口蹄疫单克隆抗体为基础,结合免疫金技术,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,对6H4单克隆抗体进行标记,制备了该单克隆抗体的金标试纸条.研究结果表明,6H4单克隆抗体在pH 8.64下的稳定点为12 mg/L,可制备成金标记抗体及其反应膜.

关键词：口蹄疫单克隆抗体金标试纸条

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猪源冠状病毒TGEV中国分离株纤突蛋白生物信息学分析

猪源冠状病毒TGEV中国分离株纤突蛋白生物信息学分析

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2007年中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会学术研讨会

作者：李建强柳纪省兰喜程杰中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州 730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州 730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州 730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州 730070

以猪源冠状病毒TGEV纤突蛋白基因序列为基础，利用生物软件对TGEV中国分离株纤突蛋白进行N-糖基化位点、跨膜螺旋、进化树、二级结构及抗原位点的预测和分析。结果显示所有TGEV毒株可分为3个基因型，4株中国分离株分别归属于以上3个基... 详细信息

以猪源冠状病毒TGEV纤突蛋白基因序列为基础，利用生物软件对TGEV中国分离株纤突蛋白进行N-糖基化位点、跨膜螺旋、进化树、二级结构及抗原位点的预测和分析。结果显示所有TGEV毒株可分为3个基因型，4株中国分离株分别归属于以上3个基因型，属于Ⅰ型的中国株TSX在跨膜螺旋的氨基酸及二级结构上与其他中国株有明显的差异，而同属于Ⅲ型中国毒株SC-Y和TH-98在跨膜螺旋的氨基酸及二级结构上非常接近，而所有中国分离株抗原表位没有明显差别，表明TGEV在中国没有显著的变异。

关键词：猪源冠状病毒猪传染性胃肠炎纤突蛋白基因序列生物信息学

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口蹄疫病毒重组蛋白表达及其亚单位疫苗研究进展

引用

生物技术通报 2007年第4期23卷 1-4页

作者：王光华独军政薛慧文常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃农业大学动物医学院兰州730070 甘肃农业大学动物医学院

口蹄疫(FMD)是偶蹄动物的一种急性、热性传染病,曾多次在世界上发生过大流行,研制和生产新型口蹄疫疫苗是防制该病爆发的有效措施之一。目前,基因工程疫苗成为该领域的研究热点。就口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白和非结构蛋白在大肠杆菌、昆... 详细信息

口蹄疫(FMD)是偶蹄动物的一种急性、热性传染病,曾多次在世界上发生过大流行,研制和生产新型口蹄疫疫苗是防制该病爆发的有效措施之一。目前,基因工程疫苗成为该领域的研究热点。就口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白和非结构蛋白在大肠杆菌、昆虫细胞、酵母菌、哺乳动物细胞和转基因植物等系统中的表达现状及其基因工程亚单位疫苗研究进展进行综述。

关键词：口蹄疫结构蛋白表达亚单位疫苗

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H9N2亚型禽流感病毒非结构蛋白基因的克隆及原核表达

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实用诊断与治疗杂志 2007年第12期21卷 885-887,I0011页

作者：易华山侯顺利独军政胡永浩常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州市730046 甘肃农业大学动物医学院兰州军区疾病预防控制中心

目的:为防控禽流感在家禽和水禽中的流行,从而控制对人的感染,探讨一种能区别自然感染鸡和疫苗免疫鸡的鉴别诊断方法。方法:采用RT-PCR方法扩增禽流感病毒H9N2的NS1基因(660bp);并将该片段克隆至pET-28(a)质粒中,构建重组表达载体pET-N... 详细信息

目的:为防控禽流感在家禽和水禽中的流行,从而控制对人的感染,探讨一种能区别自然感染鸡和疫苗免疫鸡的鉴别诊断方法。方法:采用RT-PCR方法扩增禽流感病毒H9N2的NS1基因(660bp);并将该片段克隆至pET-28(a)质粒中,构建重组表达载体pET-NS1,转化*** BL21(DE3)感受态细胞,以终浓度0.7mmol/L的IPTG诱导表达6h,并应用Western-blot方法分析表达产物的反应原性。结果:pET-NS1载体能高效表达NS1蛋白,相对分子质量约25000,纯化产物能与该亚型的AIV活病毒感染鸡血清发生特异性反应而与灭活病毒免疫鸡血清不发生反应。结论:NS1基因在大肠埃希氏菌中的表达产物可用来鉴别禽流感免疫鸡群和感染鸡群。

关键词：禽流感非结构蛋白表达 H9N2

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A型口蹄疫病毒P1基因与GFP基因的重组逆转录病毒载体构建

A型口蹄疫病毒P1基因与GFP基因的重组逆转录病毒载体构建

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2007年中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会学术研讨会

作者：刘艳红安芳兰刘俊林李炯刘相涛尚佑军中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重开放实验室(甘肃兰州 730046) 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重开放实验室 (甘肃兰州 730046) 甘肃农业大学动物科学技术学院(甘肃兰州 730070) 甘肃农业大学动物科学技术学院 (甘肃兰州 730070)

根据逆转录病毒表达载体pBABA-puro的特点及多克隆酶切位点要求设计引物，以A型FMDV XJ-99的Pl2X基因和GFP基因的阳性克隆质粒为模板，用PCR方法扩增各基因片段。酶切后分步定向亚克隆至逆转录病毒表达载体pBABE-puro上。经PCR、酶切及... 详细信息

根据逆转录病毒表达载体pBABA-puro的特点及多克隆酶切位点要求设计引物，以A型FMDV XJ-99的Pl2X基因和GFP基因的阳性克隆质粒为模板，用PCR方法扩增各基因片段。酶切后分步定向亚克隆至逆转录病毒表达载体pBABE-puro上。经PCR、酶切及测序鉴定表明，获得了含CFP的A型FMDV衣壳蛋基因的重组逆转录病毒表达载体，对今后用逆转录病毒载体包装系统进行FMDV的目的基因转移和表达研究，更快速筛选单克隆阳性靶细胞奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒衣壳蛋白基因重组逆转录病毒表达载体

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H9N2亚型禽流感病毒PA基因的克隆与序列分析

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甘肃农业大学学报 2007年第3期42卷 12-16页

作者：易华山侯顺利胡永浩独军政刘萍王光华高闪电常惠芸甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 兰州军区疾病预防控制中心甘肃兰州730020 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

对甘肃H9N2亚型的A/Chicken/GanSu/2/99(A/CK/GS/2/99)株PA基因进行了克隆、测序及分子进化分析.结果表明:该病毒PA基因开放阅读框由2 151个碱基组成,编码716个氨基酸;其与A/Quail/HongKong/NT28/99(H9N2)株和A/Duck/HongKong/Y280/97(H9N2)株的核苷酸同源性分别为98.4%和98.5%,氨基酸同源性分别为98.7%和98.7%;与A/HongKong/156/97(H5N1)和A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)的核苷酸同源性分别为89.0%和87.8%,氨基酸同源性分别为为93.9%和94.3%.

关键词：禽流感病毒(H9N2株) PA基因克隆序列分析

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口蹄疫病毒VP1基因在番茄中的表达及转基因番茄对豚鼠诱导免疫保护

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微生物学报 2006年第5期46卷 796-801页

作者：潘丽张永光王永录王宝琴谢庆阁方玉珍王文秀蒋守田王炜孙元吕建亮刘力宽中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

构建克隆有O型口蹄疫病毒China99株VP1基因的植物双元表达载体pBin438/VP1。通过农杆菌介导法转化番茄子叶,经卡那霉素抗性筛选,获得60株抗性植株。对抗性植株分别做PCR、RT-PCR检测目的基因的整合与转录,ELISA筛选约40%的卡那抗性植株... 详细信息

构建克隆有O型口蹄疫病毒China99株VP1基因的植物双元表达载体pBin438/VP1。通过农杆菌介导法转化番茄子叶,经卡那霉素抗性筛选,获得60株抗性植株。对抗性植株分别做PCR、RT-PCR检测目的基因的整合与转录,ELISA筛选约40%的卡那抗性植株阳性,分别提取两株ELISA和Western blot检测阳性的转基因番茄叶片蛋白与弗氏佐剂乳化,于0、15、30d经肌肉途径免疫豚鼠,第三次免疫后28d用100ID50的同源强毒攻击,根据豚鼠抗体水平的消长动态和免疫豚鼠抗强毒攻击的保护率进行转基因植物疫苗免疫原性的评估。结果表明,双元表达载体pBin438/VP1构建正确,PCR、RT-PCR结果证实口蹄疫病毒VP1基因已整合到番茄基因组并在转录水平表达,ELISA和Western blot检测重组蛋白能够与FMDV阳性血清反应。转基因番茄第三次免疫豚鼠后21d血清效价最高可达1∶64,攻毒后两组免疫豚鼠保护率分别达80%和40%,证明转基因番茄表达的VP1蛋白具有良好的免疫原性。

关键词：口蹄疫病毒 VP1基因转基因番茄豚鼠免疫原性

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口蹄疫病毒OH株结构蛋白基因VP1的克隆与表达

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中国兽医科学 2006年第7期36卷 515-518页

作者：龚真莉刘湘涛尚佑军田宏吴锦艳尹双辉陈国栋中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室

采用RT-PCR方法扩增获得了O型口蹄疫病毒的主要免疫原VP1基因,将其插入pMD18-T载体进行序列分析,结果表明,所获得的基因片段含有完整的FMDV结构蛋白VP1编码区。根据表达载体pQE-Trisystem的克隆位点序列和该VPl基因片段的末端序列设计了... 详细信息

采用RT-PCR方法扩增获得了O型口蹄疫病毒的主要免疫原VP1基因,将其插入pMD18-T载体进行序列分析,结果表明,所获得的基因片段含有完整的FMDV结构蛋白VP1编码区。根据表达载体pQE-Trisystem的克隆位点序列和该VPl基因片段的末端序列设计了1对表达引物,以重组pMD-T-VP1阳性质粒为模板,扩增获得了VP1基因,通过酶切将其克隆至表达载体pQE-Trisystem上。经测序证实,重组表达质粒所含的外源基因VP1编码框正确无误。将重组表达质粒pQE-VP1转化至大肠埃希氏菌M15,通过IPTG诱导促使VP1基因高效表达,SDS- PAGE和Western-blot分析表明,表达产物大小与预期的结果(26 ku)一致,且具有良好的反应原性。以2 mmol／L IPTG诱导表达5 h时表达量最高,其中70％-80％的目的蛋白存在于菌体裂解后的上清中,表明外源基因VP1主要以可溶性方式表达。

关键词：口蹄疫病毒 VP1基因基因克隆表达

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口蹄疫病毒VP1基因在转基因拟南芥种子中的表达及活性检测

引用

畜牧兽医学报 2006年第5期37卷 469-473页

作者：潘丽张永光王永录方玉珍蒋守田王宝琴王文秀王炜孙元吕建亮谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

构建了FMDV VP1基因的种子特异性表达载体p7SBin438/VP1,在根癌农杆菌GV3101的介导下,通过浸花法转化拟南芥花序,转基因拟南芥通过卡那霉素抗性筛选后,进行了目的基因PCR扩增和ELISA检测,对ELISA筛选的阳性植株进行Western blot检测,并... 详细信息

构建了FMDV VP1基因的种子特异性表达载体p7SBin438/VP1,在根癌农杆菌GV3101的介导下,通过浸花法转化拟南芥花序,转基因拟南芥通过卡那霉素抗性筛选后,进行了目的基因PCR扩增和ELISA检测,对ELISA筛选的阳性植株进行Western blot检测,并对转基因拟南芥后代进行了目的基因PCR分析。结果表明,种子特异性表达载体p7SBin438/VP1构建正确,FMDV结构蛋白VP1编码基因已整合进拟南芥基因组并获得表达,表达蛋白具有免疫反应活性,转基因拟南芥后代分析表明VP1基因已经遗传给后代。本试验为将FMDV免疫基因向豆科植物种子中的转化提供了依据。

关键词：口蹄疫病毒 VP1基因种子特异性表达载体转基因拟南芥

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