检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2012年第9期42卷 987-990页

作者：魏衍全孙世琪孙德惠郭慧琛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

综述了原始串联亲和纯化方法的原理及其存在的缺陷和各种最新构建的串联亲和纯化标签组合及其从哺乳动物细胞中纯化蛋白复合物时的蛋白得率。与单步纯化方法相比,串联亲和纯化方法显著地减少了非特异性背景,可分离到高纯度的蛋白复合物... 详细信息

综述了原始串联亲和纯化方法的原理及其存在的缺陷和各种最新构建的串联亲和纯化标签组合及其从哺乳动物细胞中纯化蛋白复合物时的蛋白得率。与单步纯化方法相比,串联亲和纯化方法显著地减少了非特异性背景,可分离到高纯度的蛋白复合物。这一优势极大地简化了蛋白质鉴定及其相互作用关系的验证工作。

关键词：串联亲和纯化亲和标签蛋白复合体高蛋白得率

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羊口疮病毒B2L蛋白二级结构及其细胞表位的预测

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中国兽医科学 2012年第11期42卷 1133-1138页

作者：王光祥尚佑军吕占禄田宏张克山刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

采用网络平台的SOPMA服务器和DNAStar软件预测羊口疮病毒(ORFV)B2L蛋白的二级结构;综合利用DNAStar软件、二级结构预测及ABCpred方案预测羊口疮病毒B2L蛋白的B细胞表位;分别采用人工神经网络法(ANNA)和在线程序预测羊口疮病毒B2L蛋白的... 详细信息

采用网络平台的SOPMA服务器和DNAStar软件预测羊口疮病毒(ORFV)B2L蛋白的二级结构;综合利用DNAStar软件、二级结构预测及ABCpred方案预测羊口疮病毒B2L蛋白的B细胞表位;分别采用人工神经网络法(ANNA)和在线程序预测羊口疮病毒B2L蛋白的细胞毒性T细胞和辅助T细胞的抗原表位。结果显示,羊口疮病毒B2L蛋白的整个结构中α-螺旋区域和无规则卷曲区域出现得较多,其中α-螺旋占30.42%,β-片层占24.34%,β-转角占5.56%,无规则卷曲占39.68%;有6个优势B细胞表位,3个细胞毒性T细胞表位和2个辅助T细胞表位。本研究为ORFV诊断方法的建立、单克隆抗体的制备及表位疫苗的研制提供了理论依据。

关键词：羊口疮病毒 B2L基因二级结构 B细胞表位 T细胞表位预测

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细菌的CRISPR/cas免疫及免疫识别

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中国兽医科学 2012年第6期42卷 657-660页

作者：马延滨常惠芸中国农业科学院、兰州兽医研究所、家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室、农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

综述了40%真细菌以及几乎所有古细菌基因组内存在的CRISPR位点以及细菌的CRISPR/cas免疫机制。主要从CRISPR/cas免疫的抗感染机制、特异性间隔序列的获取、crRNA的成熟以及免疫识别等方面展开论述,阐述了成簇存在的、被短的重复回文序... 详细信息

综述了40%真细菌以及几乎所有古细菌基因组内存在的CRISPR位点以及细菌的CRISPR/cas免疫机制。主要从CRISPR/cas免疫的抗感染机制、特异性间隔序列的获取、crRNA的成熟以及免疫识别等方面展开论述,阐述了成簇存在的、被短的重复回文序列所分割的非自身基因(CRISPR位点)以及通过类RNA干扰(RNAi)机制特异性地抵抗噬菌体及侵袭性质粒的二次感染。提出此技术在临床上用来抑制抗生素抗性质粒以及毒力因子在病原菌中传播的应用前景。

关键词： CRISPR/cas 免疫机制免疫识别

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AsiaⅠ型口蹄疫病毒VP1基因结构预测及亚细胞定位

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中国兽医学报 2012年第11期32卷 1669-1673页

作者：张克山尚佑军郭建宏郑海学田宏靳野刘永杰刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

利用PCR方法扩增到VP1基因,序列测定后利用Mega4.0、swiss-model、GOR4和RasMol软件预测了VP1基因的二、三级结构。将VP1基因融合EGFP基因后定向克隆入PcDNA3.1(+)真核表达载体,构建正确的重组质粒命名为PVP1E,在脂质体介导下将PVP1E质... 详细信息

利用PCR方法扩增到VP1基因,序列测定后利用Mega4.0、swiss-model、GOR4和RasMol软件预测了VP1基因的二、三级结构。将VP1基因融合EGFP基因后定向克隆入PcDNA3.1(+)真核表达载体,构建正确的重组质粒命名为PVP1E,在脂质体介导下将PVP1E质粒转染BHK-21细胞,Western Blotting试验证实VP1基因成功表达,经DAPI细胞核染色后在共聚焦显微镜下观察VP1亚细胞定位。结果表明本研究预测了VP1基因的二、三级结构,其在BHK-21细胞中呈现以细胞核为主的弥散性分布,VP1基因亚细胞定位及结构预测为进一步深入探究AsiaⅠ型FMDV VP1结构和功能提供丰富的资料。

关键词： AsiaⅠ型FMDV VP1基因结构预测亚细胞定位

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口蹄疫疫苗库的发展

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中国预防兽医学报 2012年第11期34卷 929-932页

作者：郎一飞高闪电常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所、国家口蹄疫参考实验室、家畜疫病病原生物学国家重点实验室、农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

口蹄疫（Foot and mouth disease，FMD）是由FMD病毒（FMDV）引起的偶蹄动物的烈性传染病，患病动物的口、舌、唇、蹄、乳房等部位发生水泡，水泡破溃后形成烂斑。由于该病传染性强，造成的经济损失严重，世界动物卫生组织（OIE）将该... 详细信息

口蹄疫（Foot and mouth disease，FMD）是由FMD病毒（FMDV）引起的偶蹄动物的烈性传染病，患病动物的口、舌、唇、蹄、乳房等部位发生水泡，水泡破溃后形成烂斑。由于该病传染性强，造成的经济损失严重，世界动物卫生组织（OIE）将该病列为实时通报的传染病之一。

关键词：口蹄疫世界动物卫生组织烈性传染病苗库偶蹄动物 FMD病毒经济损失传染性

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牛α-IFN及FMDV P12A3C双表达载体的构建及其在BHK-21细胞中的表达

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生物技术通报 2012年第2期28卷 80-84页

作者：杨彬兰喜李宝玉殷相平李学瑞柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所、家畜疫病病原生物学国家重点实验室、农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

从口蹄疫病毒Asia I/Jiangsu毒株的细胞毒中提取总RNA,通过RT-PCR方法分别获得FMDV的P12A及3C基因;同时以pMD18-T-α-IFN质粒为模板,PCR扩增得到α-IFN基因。将α-IFN基因及FMDV P12A及3C基因连接至双启动子表达载体pBudCE4.1上,构建成... 详细信息

从口蹄疫病毒Asia I/Jiangsu毒株的细胞毒中提取总RNA,通过RT-PCR方法分别获得FMDV的P12A及3C基因;同时以pMD18-T-α-IFN质粒为模板,PCR扩增得到α-IFN基因。将α-IFN基因及FMDV P12A及3C基因连接至双启动子表达载体pBudCE4.1上,构建成双效表达质粒pBudCE4.1-α-IFN-P12A3C,经电泳、PCR、双酶切和DNA测序鉴定表明双效质粒载体构建成功。用此重组质粒转染BHK-21细胞后并对其表达情况进行检测,表明该双表达质粒在BHK-21细胞中能够成功表达。以此重组质粒免疫乳鼠后12 h,按100 TCID50/0.1 mL的量进行攻毒,结果发现该质粒能够抑制病毒的增殖,对乳鼠有一定的保护作用。结果表明成功构建了牛α-IFN及FMDV P12A3C组合基因双表达载体,为进一步研究口蹄疫基因疫苗提供前期基础。

关键词：口蹄疫病毒 P12A基因 3C基因 α-干扰素 pBudCE4.1载体

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猪戊型肝炎病毒swCH189株衣壳蛋白基因CP239片段的表达、纯化及抗原性分析

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中国兽医学报 2012年第2期32卷 231-237页

作者：郝宝成梁剑平兰喜刑小勇项海涛温峰琴胡永浩柳纪省中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所新兽药重点开放实验室甘肃省新兽药工程重点实验室甘肃兰州730050 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学学院甘肃兰州730070

根据已克隆的戊型肝炎病毒株swCH189株结构蛋白基因(ORF2)的抗原性及水溶性分析,在其序列上设计套式引物,采用RT-PCR技术扩增猪戊型肝炎病毒(HEV)结构蛋白基因ORF2主要抗原基因片段,长度为728bp,将其克隆于PMD18-T载体,测序结果表明插... 详细信息

根据已克隆的戊型肝炎病毒株swCH189株结构蛋白基因(ORF2)的抗原性及水溶性分析,在其序列上设计套式引物,采用RT-PCR技术扩增猪戊型肝炎病毒(HEV)结构蛋白基因ORF2主要抗原基因片段,长度为728bp,将其克隆于PMD18-T载体,测序结果表明插入的片段属于猪戊型肝炎病毒结构蛋白基因ORF2部分;将该片段插入pet32a表达载体,经酶切、测序鉴定证实获得了带有目的基因的重组表达质粒。将重组质粒转化Rosetta菌,经0.3mmol/L IPTG诱导得到融合表达,得到相对分子质量为45 000的重组蛋白,以包涵体形式存在。Western blot分析表明,该蛋白可以与猪戊型肝炎阳性血清反应,表明该蛋白具有良好的反应原性。并用SDS电泳切胶纯化和透析浓缩方法进行纯化,用纯化的蛋白免疫兔子,经每2周免疫1次,连续3次免疫后,对免疫组和对照组,分别在45,60,90d采血,每只兔子采集1份。用夹心ELISA法测定免疫血清抗体,结果表明免疫组在45d后均产生具有HEV抗原结合活性的抗体。本试验对猪swCH189株CP239基因的克隆和表达研究,为进一步研究结构蛋白基因ORF2的生物学功能奠定了基础。

关键词：猪戊型肝炎病毒 swCH189株克隆原核表达纯化抗原性分析

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重组腺相关病毒载体的研究进展

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生物技术通报 2012年第11期28卷 49-53页

作者：邱燕杨彬柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原微生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

重组腺相关病毒(rAAV)载体作为基因治疗的工具,具有无致病性、长期表达、低免疫原性和感染多种细胞等特点。因此,rAAV载体越来越受到重视。就rAAV载体在生物学特性、构建、安全性和应用方面作一介绍。

关键词：重组腺相关病毒载体生物学特性构建安全性应用

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湖北省羊口疮病毒的分离鉴定

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动物医学进展 2012年第11期33卷 37-40页

作者：王光祥尚佑军陈江涛吕占禄张克山刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

利用MDBK传代细胞系对湖北通山县某羊场疑似羊口疮(Orf)的黑山羊病料进行分离,通过病毒理化特性试验、动物回归试验和PCR等方法对分离的毒株进行鉴定。结果表明,病料悬液接种MDBK细胞后出现细胞病变,接种病料的羊只出现典型的Orf症状,... 详细信息

利用MDBK传代细胞系对湖北通山县某羊场疑似羊口疮(Orf)的黑山羊病料进行分离,通过病毒理化特性试验、动物回归试验和PCR等方法对分离的毒株进行鉴定。结果表明,病料悬液接种MDBK细胞后出现细胞病变,接种病料的羊只出现典型的Orf症状,扩增出羊口疮病毒(Orf virus)B2L基因,该毒株与台湾山羊株(EU935106.1、DQ904351.1)相似性最高(均为99%),亲缘关系最近。本研究成功分离鉴定到一株ORFV,命名为ORFV/HB/09。

关键词：羊传口疮病毒分离鉴定动物回归试验聚合酶链反应

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口蹄疫新型疫苗研究进展

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畜牧与兽医 2012年第10期44卷 90-93页

作者：陈建文邵军军常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/国家口蹄疫参考实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

口蹄疫在流行区域的持续感染,影响了以家畜为生计的人们的正常生活,这经常发生在资源缺乏的发展中国家。由于口蹄疫所带来的危害,世界动物卫生组织以及粮农组织呼吁对于口蹄疫病毒在全球范围内进行控制以及消除。然而,由于目前所使用的... 详细信息

口蹄疫在流行区域的持续感染,影响了以家畜为生计的人们的正常生活,这经常发生在资源缺乏的发展中国家。由于口蹄疫所带来的危害,世界动物卫生组织以及粮农组织呼吁对于口蹄疫病毒在全球范围内进行控制以及消除。然而,由于目前所使用的灭活疫苗并不能满足此要求,因此需要研制新型疫苗满足口蹄疫的全球性防护及消除。本文主要介绍了DNA疫苗、病毒样衣壳疫苗、病毒载体疫苗、cDNA源性灭活疫苗以及修饰的活疫苗等新型疫苗的研究现状以及在临床中的应用前景。

关键词：口蹄疫防控新型疫苗

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