检索结果-内蒙古大学图书馆

生物技术通报 2009年第12期25卷 27-29,36页

作者：徐娜李宝玉柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室兰州730046

随着人类基因组计划的顺利实施,人们分离、鉴定新基因的速度越来越快,对于占人类基因组97%的非表达序列的研究,即对所谓"垃圾"DNA的研究已成为全球范围内关注的热点。现就假基因的发现、命名和分类、特性和分布、产生、作用... 详细信息

随着人类基因组计划的顺利实施,人们分离、鉴定新基因的速度越来越快,对于占人类基因组97%的非表达序列的研究,即对所谓"垃圾"DNA的研究已成为全球范围内关注的热点。现就假基因的发现、命名和分类、特性和分布、产生、作用机理、功能、进化及展望等方面进行论述。

关键词：假基因分类特性与分布产生作用机理功能与进化

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构建微生物突变体的方法综述

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生物技术通报 2010年第2期26卷 68-71页

作者：张念章逯忠新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

生物学范畴内的突变是指细胞中的遗传物质发生可遗传的改变,包括DNA碱基对的置换、增添或缺失等结构的变化。人们利用突变生物体进行科学研究和培育新产品。综述了人工构建突变体的几种常用方法及原理,着重介绍了应用基因工程技术进行... 详细信息

生物学范畴内的突变是指细胞中的遗传物质发生可遗传的改变,包括DNA碱基对的置换、增添或缺失等结构的变化。人们利用突变生物体进行科学研究和培育新产品。综述了人工构建突变体的几种常用方法及原理,着重介绍了应用基因工程技术进行微生物改造的方法,为科研工作和生产实践拓展思路。

关键词：构建突变体微生物方法原理基因工程

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青海省部分地区副猪嗜血杆菌流行病学研究

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华北农学报 2009年第B08期24卷 236-239页

作者：逯忠新高鹏程贺英储岳峰赵萍赵海燕马利青陆艳蔡其刚中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 青海大学畜牧兽医科学院青海西宁810016

为了明确青海省4个地区12个猪场副猪嗜血杆菌病的流行情况,应用间接血凝对不同猪场639份血清进行了检测;对疑似副猪嗜血杆菌病的15份病料进行了病原分离鉴定,应用琼脂扩散试验对分离菌进行了分型。结果4个地区副猪嗜血杆菌最高阳性率为5... 详细信息

为了明确青海省4个地区12个猪场副猪嗜血杆菌病的流行情况,应用间接血凝对不同猪场639份血清进行了检测;对疑似副猪嗜血杆菌病的15份病料进行了病原分离鉴定,应用琼脂扩散试验对分离菌进行了分型。结果4个地区副猪嗜血杆菌最高阳性率为58.73%,最低阳性率为0,平均阳性率为25.19%;从疑似副猪嗜血杆菌病患病猪的肺脏和腹膜中分离到2株革兰氏阴性细小杆菌,经生化试验和PCR鉴定,确定分离菌为副猪嗜血杆菌,分型结果为副猪嗜血杆菌血清5型(QH0804)和7型(QH0811)。结果表明,副猪嗜血杆菌病在4个地区一些猪场有不同程度的流行和发生。这一结果为该地区有效控制该病防制提供了依据。

关键词：副猪嗜血杆菌流行病学分离鉴定

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牛支原体生长曲线的测定和培养基筛选

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湖北农业科学 2012年第3期51卷 549-551页

作者：邵倩储岳峰何生虎逯忠新宁夏大学农学院银川750021 中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部草食动物(疫病重点开放实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

为筛选最适于牛支原体(Mycoplasma bovis)生长的培养基,利用活菌计数方法测定了牛支原体OF2株在改良Thiaucourt’s培养基、牛心汤培养基和改良KM2培养基中的生长曲线。结果发现,牛支原体在改良Thiaucourt’s培养基中生长30 h即可达到平... 详细信息

为筛选最适于牛支原体(Mycoplasma bovis)生长的培养基,利用活菌计数方法测定了牛支原体OF2株在改良Thiaucourt’s培养基、牛心汤培养基和改良KM2培养基中的生长曲线。结果发现,牛支原体在改良Thiaucourt’s培养基中生长30 h即可达到平台期,平均最高生长滴度7.0×109ccu/mL;在牛心汤培养基中生长40 h即可达到平台期,平均最高生长滴度4.0×109ccu/mL;在改良KM2培养基中生长50 h达到平台期,其平均最高生长滴度为7.0×108ccu/mL。结果表明,牛支原体在改良Thiaucourt’s培养基中生长快、滴度高,为下一步牛支原体灭活疫苗的研究提供了参考依据。

关键词：牛支原体(Mycoplasma bovis) 培养基筛选生长曲线

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猪戊型肝炎病毒swCH196株ORF3基因的克隆与序列分析

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中国兽医科学 2010年第10期40卷 991-996页

作者：杨敏郝宝成兰喜柳纪省甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所甘肃兰州730050

为分析猪戊型肝炎病毒的基因特征,设计了1对套式引物,利用RT-PCR方法克隆出了猪戊型肝炎病毒甘肃分离株swCH196的ORF3基因cDNA片段。序列测定结果表明,swCH196株的ORF3基因长345bp,编码114个氨基酸,与GenBank中登录的其他毒株的核苷酸... 详细信息

为分析猪戊型肝炎病毒的基因特征,设计了1对套式引物,利用RT-PCR方法克隆出了猪戊型肝炎病毒甘肃分离株swCH196的ORF3基因cDNA片段。序列测定结果表明,swCH196株的ORF3基因长345bp,编码114个氨基酸,与GenBank中登录的其他毒株的核苷酸序列同源性为83.5%～97.7%,系统发育进化树分析结果表明,该分离株为基因Ⅳ型。

关键词：猪戊型肝炎病毒 ORF3基因克隆序列分析

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狂犬病病毒CVS株糖蛋白、核蛋白生物信息学分析

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生物技术通报 2010年第7期26卷 179-184页

作者：李江涛殷相平张金卫丁农柳纪省湖州市农业科学研究院湖州313000 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室兰州730046

对狂犬病毒(rabies virus,RV)CVS株糖蛋白、核蛋白基因进行了克隆与测序,推导出相应的氨基酸序列。后采用Gamier-Robson方法和Chou-Fasman方法预测了蛋白的二级结构,用Kyte-Doolittle方法对蛋白的亲水性进行了分析,用Emi-ni方法预测了... 详细信息

对狂犬病毒(rabies virus,RV)CVS株糖蛋白、核蛋白基因进行了克隆与测序,推导出相应的氨基酸序列。后采用Gamier-Robson方法和Chou-Fasman方法预测了蛋白的二级结构,用Kyte-Doolittle方法对蛋白的亲水性进行了分析,用Emi-ni方法预测了蛋白的表面可能性,以Jameson-Wolf方法预测了蛋白的抗原指数;综合分析预测蛋白的B细胞抗原表位。结果表明,糖蛋白在序列的121-126、133-137、161-165、191-193、201-204、214-216、221-225、264-267区域,核蛋白在序列的143-152、166-172、263-273、411-427区域或其附近最有可能是B细胞抗原表位的优势区域。

关键词：狂犬病毒糖蛋白核蛋白二级结构 B细胞表位

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猪戊型肝炎病毒swCH189株衣壳蛋白基因CP239片段的表达、纯化及抗原性分析

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中国兽医学报 2012年第2期32卷 231-237页

作者：郝宝成梁剑平兰喜刑小勇项海涛温峰琴胡永浩柳纪省中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所新兽药重点开放实验室甘肃省新兽药工程重点实验室甘肃兰州730050 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学学院甘肃兰州730070

根据已克隆的戊型肝炎病毒株swCH189株结构蛋白基因(ORF2)的抗原性及水溶性分析,在其序列上设计套式引物,采用RT-PCR技术扩增猪戊型肝炎病毒(HEV)结构蛋白基因ORF2主要抗原基因片段,长度为728bp,将其克隆于PMD18-T载体,测序结果表明插... 详细信息

根据已克隆的戊型肝炎病毒株swCH189株结构蛋白基因(ORF2)的抗原性及水溶性分析,在其序列上设计套式引物,采用RT-PCR技术扩增猪戊型肝炎病毒(HEV)结构蛋白基因ORF2主要抗原基因片段,长度为728bp,将其克隆于PMD18-T载体,测序结果表明插入的片段属于猪戊型肝炎病毒结构蛋白基因ORF2部分;将该片段插入pet32a表达载体,经酶切、测序鉴定证实获得了带有目的基因的重组表达质粒。将重组质粒转化Rosetta菌,经0.3mmol/L IPTG诱导得到融合表达,得到相对分子质量为45 000的重组蛋白,以包涵体形式存在。Western blot分析表明,该蛋白可以与猪戊型肝炎阳性血清反应,表明该蛋白具有良好的反应原性。并用SDS电泳切胶纯化和透析浓缩方法进行纯化,用纯化的蛋白免疫兔子,经每2周免疫1次,连续3次免疫后,对免疫组和对照组,分别在45,60,90d采血,每只兔子采集1份。用夹心ELISA法测定免疫血清抗体,结果表明免疫组在45d后均产生具有HEV抗原结合活性的抗体。本试验对猪swCH189株CP239基因的克隆和表达研究,为进一步研究结构蛋白基因ORF2的生物学功能奠定了基础。

关键词：猪戊型肝炎病毒 swCH189株克隆原核表达纯化抗原性分析

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双效表达载体的构建及其U6启动子的功能效率鉴定

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生物技术通报 2009年第4期25卷 82-85,90页

作者：项海涛杨彬温峰琴胡永浩柳纪省甘肃农业大学动物医学院兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室兰州730046

利用pBudcE4.1双表达载体构建shRNA与蛋白共表达载体,为双效疫苗的研制提供新的研究思路。以含U6启动子的载体为模板,PCR扩增得到U6启动子,用其置换载体pBudcE4.1内的CMV启动子的核心部分构建shRNA与蛋白共表达载体。用干扰绿色荧光蛋... 详细信息

利用pBudcE4.1双表达载体构建shRNA与蛋白共表达载体,为双效疫苗的研制提供新的研究思路。以含U6启动子的载体为模板,PCR扩增得到U6启动子,用其置换载体pBudcE4.1内的CMV启动子的核心部分构建shRNA与蛋白共表达载体。用干扰绿色荧光蛋白表达的方法鉴定重组载体中的U6启动子能否启动shRNA的表达。经PCR扩增、双酶切鉴定及DNA测序证明成功构建了载体pBudcE4.1-U6。用干扰载体pBudcE4.1-U6-eGFPshRNA与含eGFP的载体共转染293T细胞后,荧光显微镜观察显示eGFP的表达量下降;流式细胞仪检测细胞的转染效率降低。研究结果证明U6启动子正常发挥作用。成功构建RNAi与蛋白共表达载体,为利用该载体研制动物双效疫苗奠定了基础。

关键词： RNAi 共表达载体 U6启动子构建鉴定

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表达狂犬病毒糖蛋白和核蛋白的重组腺病毒的生物学特性及免疫研究

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甘肃农业大学学报 2009年第4期44卷 19-24页

作者：殷相平李志勇李江涛李宝玉兰喜杨彬李学瑞柳纪省甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

对狂犬病毒G+N双基因复制缺陷型腺病毒穿梭载体进行转染,以获得融合表过狂犬病毒糖蛋白和核蛋白重组腺病毒,并对其进行生物学特性和免疫学研究.结果表明:将含有狂犬病毒G+N的重组穿梭质粒pAdTrack-CMV/G+N与腺病毒骨架载体pAdEasy-1在... 详细信息

对狂犬病毒G+N双基因复制缺陷型腺病毒穿梭载体进行转染,以获得融合表过狂犬病毒糖蛋白和核蛋白重组腺病毒,并对其进行生物学特性和免疫学研究.结果表明:将含有狂犬病毒G+N的重组穿梭质粒pAdTrack-CMV/G+N与腺病毒骨架载体pAdEasy-1在大肠杆菌细胞内同源重组,可获得带有目的基因的重组腺病毒载体pAd/G+N,经PacI酶切后转染HEK-293细胞,可获得带有目的基因的重组腺病毒.重组腺病毒在HEK-293细胞中连续传代15代次后,在细胞内的病变时间缩短为20 h以内.经测定,重组腺病毒对HEK-293细胞的TCID50为***-1,用RT-PCR法可检测到狂犬病毒糖蛋白和核蛋白基因片段;重组腺病毒经口服免疫小白鼠,对狂犬病毒CVS毒株的免疫保护率可达80%.

关键词：狂犬病毒重组腺病毒生物学特性免疫

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保护剂及其在口蹄疫疫苗中的研究进展

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生物技术通报 2009年第3期25卷 6-10页

作者：李正丰王永录中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室兰州730046 甘肃农业大学动物医学院兰州730070

保护剂在动物疫苗中具有重要的作用,直接影响疫苗的质量。以保护剂为核心介绍了在疫苗保存前病毒抗原和保护剂的准备,保护剂的选用原则,分类、作用机理,着重讨论了保护剂在口蹄疫疫苗中的研究进展以及当前存在的问题,并对其应用前景提... 详细信息

保护剂在动物疫苗中具有重要的作用,直接影响疫苗的质量。以保护剂为核心介绍了在疫苗保存前病毒抗原和保护剂的准备,保护剂的选用原则,分类、作用机理,着重讨论了保护剂在口蹄疫疫苗中的研究进展以及当前存在的问题,并对其应用前景提出展望。

关键词：保护剂口蹄疫疫苗研究进展

来源：评论

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