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黑龙江畜牧兽医 2024年第3期 31-37页

作者：黄麒霖仇正英王贵波景小涵李维辛蕊华中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所农业农村部兽用药物创制重点实验室兰州730050 甘肃省新兽药工程重点实验室兰州730050 甘肃省中兽药工程技术研究中心兰州730050 兰州市疾病预防控制中心兰州730030

猪传染性胸膜肺炎(porcine pleuropneumonia,PCP)是由猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)引起的一种严重呼吸道疾病,在全世界广泛流行。APP主要通过直接接触、气溶胶和污染物在猪群之间传播,猪只感染后,多种毒力... 详细信息

猪传染性胸膜肺炎(porcine pleuropneumonia,PCP)是由猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)引起的一种严重呼吸道疾病,在全世界广泛流行。APP主要通过直接接触、气溶胶和污染物在猪群之间传播,猪只感染后,多种毒力因子触发一系列细胞因子级联反应,引发“炎症风暴”造成脓毒血症,导致肺脏病变及坏死,最急性型的死亡率可达80%~100%。PCP在我国的发病率呈逐年上升趋势,已成为危害养猪业最严重的疾病之一,给我国养殖业造成严重的经济损失。临床上常用抗生素治疗PCP,但由于细菌耐药性日益严重,使得抗生素对该病的防控愈发困难。此外APP血清型较多,不同类型血清型之间交叉免疫不强,导致疫苗防控效果不理想,感染后死亡率和发病率均处于上升趋势。目前,人们对APP发病机制的研究主要集中在毒力因子方面,关于该菌的侵袭过程(如细菌的定植和营养获取、逃避宿主防御、诱导组织损伤等)对PCP的发生、发展及预后的影响尚不清楚。因此,文章主要综述了PCP的发病机制,揭示了多种因素的作用,以期了解APP的感染过程及机体的免疫机制,在抗炎和增强免疫力等环节为防治PCP提供理论依据。

关键词：胸膜肺炎放线杆菌(APP) 猪传染性胸膜肺炎(PCP) 动物传染病发病机制毒力因子

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牛血浆中乙酰氨基阿维菌素HPLC-FLD检测方法的建立

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黑龙江畜牧兽医 2022年第23期 1-6,13页

作者：张贺超杨亚军刘希望李世宏秦哲白莉霞李剑勇中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所/农业农村部兽用药物创制重点实验室/甘肃省新兽药工程重点实验室兰州730050

为了研究乙酰氨基阿维菌素(eprinomectin, EPR)缓释注射液在牛体内的药代动力学情况,试验建立了检测牛血浆中EPR浓度的高效液相色谱荧光(HPLC-FLD)法,并进行了系统的方法学验证,向空白牛血浆样品中加入内标阿维菌素(AVM),用乙腈沉淀蛋白... 详细信息

为了研究乙酰氨基阿维菌素(eprinomectin, EPR)缓释注射液在牛体内的药代动力学情况,试验建立了检测牛血浆中EPR浓度的高效液相色谱荧光(HPLC-FLD)法,并进行了系统的方法学验证,向空白牛血浆样品中加入内标阿维菌素(AVM),用乙腈沉淀蛋白质,再用固相萃取柱进行净化,洗脱液浓缩至干后以N-甲基咪唑和三氟乙酸酐对EPR及AVM进行衍生化,采用HPLC-FLD法进行检测。该检测方法所用色谱柱为Elite Hypersil ODS(4.6 mm×250 mm, 5μm);流动相为甲醇∶乙腈∶水=64∶32∶4;流速为1 mL/min;柱温为35℃;荧光检测器激发波长为365 nm,发射波长为463 nm。结果表明:建立的HPLC-FLD检测方法中EPR的保留时间为8.076 min, AVM保留时间为12.922 min。检测限为0.5 ng/mL,定量限为1 ng/mL。血浆样品中EPR浓度在1~100 ng/mL之间时,血浆药物浓度与峰面积之比呈良好的线性关系,线性方程为y=0.912x+0.924,相关系数(R2)为0.994 7。准确度为80.79%~119.20%,批内相对标准偏差为2.02%~11.87%,批间相对标准偏差为4.16%~10.83%。不同储存条件下血浆样品中EPR稳定性良好,符合生物样品分析的具体要求。说明试验建立的HPLC-FLD法操作简便,灵敏度高,干扰少,适用于牛血浆中EPR的检测。

关键词：高效液相色谱荧光法乙酰氨基阿维菌素内标法衍生化固相萃取

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奶牛乳房炎大肠埃希氏菌和肺炎克雷伯菌及奇异变形杆菌三重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

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动物医学进展 2024年第12期45卷 19-25页

作者：朱安基李世宏徐浩杨亚军白莉霞李剑勇许笑甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所/农业农村部兽用药物创制重点实验室/甘肃省新兽药工程重点实验室甘肃兰州730050 深圳海关动植物检验检疫技术中心广东深圳518045

为建立检测奶牛乳房炎主要革兰氏阴性致病菌的快速诊断方法,选择大肠埃希氏菌phoa基因,肺炎克雷伯菌rcsa基因以及奇异变形杆菌urer基因设计合成特异性引物与探针,建立了奶牛乳房炎大肠埃希氏菌和肺炎克雷伯菌及奇异变形杆菌三重Taq Man... 详细信息

为建立检测奶牛乳房炎主要革兰氏阴性致病菌的快速诊断方法,选择大肠埃希氏菌phoa基因,肺炎克雷伯菌rcsa基因以及奇异变形杆菌urer基因设计合成特异性引物与探针,建立了奶牛乳房炎大肠埃希氏菌和肺炎克雷伯菌及奇异变形杆菌三重Taq Man荧光定量PCR检测方法。该方法可在120 min内通过一管反应体系特异性鉴定出3种常见的奶牛乳房炎革兰氏阴性致病菌,最低检测限可达1×10^(1)copies/μL且特异性和重复性良好,以此方法对80份奶牛乳房炎生乳样进行检测,大肠埃希氏菌检出率为35%(28/80),肺炎克雷伯菌检出率为21.2%(17/80),奇异变形杆菌检出率为11.2%(9/80)。结果表明,所建立的奶牛乳房炎大肠埃希氏菌和肺炎克雷伯菌及奇异变形杆菌三重Taq Man荧光定量PCR检测方法具有操作简单、特异性强、灵敏度高的特点,适用于奶牛乳房炎的临床诊断,对革兰氏阴性致病菌的快速检测及合理用药具有指导意义。

关键词：奶牛乳房炎实时荧光定量PCR 大肠埃希氏菌肺炎克雷伯菌奇异变形杆菌

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产苦马豆素疯草内生真菌及苦马豆素研究进展

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动物医学进展 2022年第11期43卷 102-107页

作者：莫亚男郝宝成杨珍梁剑平段慧荣尚若锋王学红张红娟刘宇中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所/农业农村部兽用药物创制重点实验室/甘肃省新兽药工程重点实验室甘肃兰州730050

疯草(Locoweed)是黄芪属、棘豆属和苦马豆属中含苦马豆素(swainsonine,SW)有毒植物的统称,具有抗旱耐寒,分布广泛的特性。牲畜长期采食疯草会引起蓄积性中毒,严重时导致死亡,严重危害了我国草原畜牧业的可持续发展。疯草内生真菌是疯草... 详细信息

疯草(Locoweed)是黄芪属、棘豆属和苦马豆属中含苦马豆素(swainsonine,SW)有毒植物的统称,具有抗旱耐寒,分布广泛的特性。牲畜长期采食疯草会引起蓄积性中毒,严重时导致死亡,严重危害了我国草原畜牧业的可持续发展。疯草内生真菌是疯草具有毒性的根本原因,其毒性代谢产物即苦马豆素。论文对疯草在中国的种类与分布、疯草与内生真菌互作关系、疯草内生真菌种属及检测方法、疯草内生真菌传播方式与内生真菌育种;苦马豆素的来源、毒理机制及生物合成通路最新研究进展做一综述,以期为疯草植株及其内生真菌的改造利用方面提供参考。

关键词：疯草内生真菌苦马豆素毒理机制生物合成

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大型奶牛养殖环境源大肠埃希菌毒力基因与系统进化分群

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中国兽医学报 2022年第8期42卷 1612-1619页

作者：唐敏嘉张雪婧何卓琳蒲万霞中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所农业农村部兽用药物创制重点实验室/甘肃省新兽药工程重点实验室甘肃兰州730050

对甘肃2个大型奶牛养殖环境的大肠埃希菌(Escherichia coli,***)分离株进行系统进化分群和毒力基因分布情况研究,分析系统群与***主要毒力基因之间的潜在关联,以期为***的研究和防治提供参考。利用PCR方法对281株***分离株进行系统进化... 详细信息

对甘肃2个大型奶牛养殖环境的大肠埃希菌(Escherichia coli,***)分离株进行系统进化分群和毒力基因分布情况研究,分析系统群与***主要毒力基因之间的潜在关联,以期为***的研究和防治提供参考。利用PCR方法对281株***分离株进行系统进化分群鉴定和毒力基因检测。281株***分离株被分为8个系统进化群,B1、A、E、F、D、C、B2群和隐支Ⅰ或Ⅱ的占比分别为51.96%,28.47%,11.39%,2.85%,1.78%,1.07%,0.71%,0.36%,有4株为未知系统群。毒力基因检测结果显示,ompA、ibeB、ompT、iroN、traT、iucD、fyuA和irp2的阳性率分别为100%,98.58%,76.16%,71.53%,68.33%,64.06%,30.96%,30.25%。不同年份和养殖环境的部分毒力基因的分布存在明显差异,携带8个所鉴定的毒力基因的菌株在B1、B2群和粪土源中的分布较多;traT在2017年的分布明显低于2018和2019年;traT和iroN在粪土源分离株中的分布高于污水源。系统群与毒力基因的关联性分析结果显示,A群与ompT和traT存在负相关性;B1群与ompT、irp2、fyuA和iucD存在正相关性;E群与irp2、fyuA和iucD存在负相关性,与iroN存在正相关性。系统进化分群以B1群为主,不同年份和养殖环境的部分毒力基因的分布有明显的差异;部分毒力基因的分布与系统群存在联系。

关键词：大肠埃希菌奶牛养殖环境毒力基因系统进化分群

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茶树精油对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌生物被膜的影响

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食品工业科技 2021年第14期42卷 107-112页

作者：程峰刘宇杨珍莫亚男尚若锋郝宝成王学红梁剑平中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所农业农村部兽用药物创制重点实验室甘肃省新兽药工程重点实验室甘肃兰州730050

本文研究了茶树精油对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)生物被膜的影响及其作用机制。首先测定了茶树精油对1株MRSA标准菌株及12株金黄色葡萄球菌分离菌株的MIC值为0.08%~0.32%。结晶紫半... 详细信息

本文研究了茶树精油对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)生物被膜的影响及其作用机制。首先测定了茶树精油对1株MRSA标准菌株及12株金黄色葡萄球菌分离菌株的MIC值为0.08%~0.32%。结晶紫半定量染色实验发现0.16%的茶树精油对MRSA生物被膜形成有抑制作用,结晶紫半定量染色实验和激光共聚焦显微镜发现0.32%的茶树精油可完全清除MRSA成熟的生物被膜,0.16%可明显破坏其生物被膜。抗生物被膜机制的初步探究发现茶树精油可以抑制MRSA生物被膜形成过程中多糖黏附素(polysaccharide intercellular adhesion,PIA)和胞外DNA(extracellular DNA,eDNA)的分泌以及物被膜形成相关基因agr、ica、cid、sar的表达。因此,茶树精油具有强大的抗生物被膜作用,可能机制是抑制其PIA的合成,eDNA的分泌以及生物被膜形成相关基因的表达。

关键词：茶树精油生物被膜结晶紫半定量法激光共聚焦显微镜多糖黏附素胞外DNA

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肺炎克雷伯菌耐药机制和毒力因子研究进展

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中兽医医药杂志 2024年第1期43卷 29-38页

作者：耿响刘希望李剑勇中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所农业农村部兽用药物创制重点实验室甘肃省新兽药工程重点实验室甘肃兰州730050

肺炎克雷伯菌是寄生于人和动物的皮肤、呼吸道、肠道等处的机会致病菌,具有较高的致病性,常引起呼吸系统、泌尿系统等感染,甚至出现败血症、脑炎等。肺炎克雷伯菌可分为经典肺炎克雷伯菌(cKP)与高毒力肺炎克雷伯菌(hvKP),hvKP能导致更... 详细信息

肺炎克雷伯菌是寄生于人和动物的皮肤、呼吸道、肠道等处的机会致病菌,具有较高的致病性,常引起呼吸系统、泌尿系统等感染,甚至出现败血症、脑炎等。肺炎克雷伯菌可分为经典肺炎克雷伯菌(cKP)与高毒力肺炎克雷伯菌(hvKP),hvKP能导致更严重、散播性更强的感染。目前,肺炎克雷伯菌的耐药性增强,耐药菌株的流行呈全球性和多样化的趋势,已引发关注。除了外排泵,肺炎克雷伯菌对抗菌药产生耐药性的机制有很多种,并且可以随着可移动遗传元件快速传播。本文详细阐述了肺炎克雷伯菌对β-内酰胺类、喹诺酮类、氨基糖苷类、替加环素、多黏菌素等抗菌药物的耐药机制。肺炎克雷伯菌的毒力因子多样,包括荚膜、脂多糖、黏附素、PEG-344、铁载体(肠杆菌素、沙门菌素、耶尔森菌素、气杆菌素)、外膜蛋白等。目前,对肺炎克雷伯菌的致病性和耐药性的研究越来越深入,在治疗方面也不断推进,主要的策略包括老药新用、纳米化抗菌药、新型抗菌药研发、噬菌体疗法、抗体疗法等。对肺炎克雷伯菌耐药机制、毒力因子进行详细、全面的综述,可为肺炎克雷伯菌的防控和临床用药提供参考。肺炎克雷伯菌的生物学特性、精准诊断、与宿主不同组织细胞的互作机制、宿主免疫应答机制等方面仍需深入研究。

关键词：肺炎克雷伯菌耐药机制毒力因子荚膜铁载体生物被膜

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菊苣酸介导外泌体对巨噬细胞免疫抑制的影响

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中国畜牧兽医 2023年第10期50卷 4223-4230页

作者：白莉霞刘希望杨亚军秦哲李世宏葛闻博许笑冯晨婧李剑勇中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所农业农村部兽用药物创制重点实验室甘肃省新兽药工程重点实验室兰州730050 天津农学院动物科学与动物医学学院天津市农业动物繁育与健康养殖重点实验室天津300384

【目的】建立巨噬细胞免疫抑制模型,探究菊苣酸(cichoric acid,CA)对磷酰胺氮芥(phosphoramide mustard,PM)诱导巨噬细胞免疫抑制的作用及调控机制,为将CA开发为临床防治免疫抑制性疾病的新型药物提供理论依据。【方法】以巨噬细胞源性... 详细信息

【目的】建立巨噬细胞免疫抑制模型,探究菊苣酸(cichoric acid,CA)对磷酰胺氮芥(phosphoramide mustard,PM)诱导巨噬细胞免疫抑制的作用及调控机制,为将CA开发为临床防治免疫抑制性疾病的新型药物提供理论依据。【方法】以巨噬细胞源性外泌体为研究对象,采用ExoQuick免疫沉淀试剂盒提取外泌体,用透射电镜(transmission electron microscopy,TEM)、纳米颗粒跟踪分析技术(nanoparticle tracking analysis,NTA)、Western blotting鉴定外泌体形态、粒径大小与浓度,以及表面标志蛋白CD63、HSP90的表达。同时,采用浓度为3μmol/L的PM诱导巨噬细胞24 h,建立免疫抑制模型后,给予低、中、高剂量CA(25、50、100μmol/L)进行干预,通过CCK-8测定细胞活力、中性红检测细胞吞噬能力及NTA测定外泌体粒径大小与浓度,研究CA介导外泌体增强免疫的作用机制。【结果】提取的巨噬细胞源性外泌体杯状形态完整,粒径在30~200 nm之间,标志蛋白表达清晰,具有良好的生物活性。由CCK-8、中性红及NTA测定结果可见,CA在3.12~400μmol/L浓度范围内对巨噬细胞无毒性作用;与PM模型组相比,低、中、高剂量CA可极显著提高免疫抑制巨噬细胞活力及其吞噬能力(P<0.01),极显著促进外泌体的分泌(P<0.01)。【结论】本研究结果表明,CA可能通过调控巨噬细胞源性外泌体分泌,增强其细胞活力与吞噬能力激活巨噬细胞,揭示了CA增强免疫的潜在作用机理。

关键词：菊苣酸巨噬细胞外泌体磷酰胺氮芥免疫抑制

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羟氯扎胺阿苯达唑复方混悬液中抑菌剂的添加剂量筛选及抑菌效力评价

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中国兽医杂志 2022年第9期58卷 88-92页

作者：张东辉路宁宁白玉彬董朕陈晨李冰张继瑜周绪正中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所农村农业部兽用药物创制重点实验室甘肃省新兽药工程重点实验室甘肃兰州730050

为了筛选羟氯扎胺阿苯达唑复方混悬液中抑菌剂的最适添加浓度,并对其进行抑菌效力评价,本试验依据2020版《中华人民共和国兽药典(二部)》抑菌效力检查法,通过对含不同浓度抑菌剂的羟氯扎胺阿苯达唑复方混悬液的抑菌效果进行考察,筛选出... 详细信息

为了筛选羟氯扎胺阿苯达唑复方混悬液中抑菌剂的最适添加浓度,并对其进行抑菌效力评价,本试验依据2020版《中华人民共和国兽药典(二部)》抑菌效力检查法,通过对含不同浓度抑菌剂的羟氯扎胺阿苯达唑复方混悬液的抑菌效果进行考察,筛选出最合适的抑菌剂添加浓度,并根据抑菌效力评价标准,评价混悬液是否满足抑菌要求,进而验证最佳抑菌剂添加剂量。结果显示,与不添加抑菌剂的羟氯扎胺阿苯达唑复方混悬液相比,在混悬液中添加0.020%的苯甲酸钠可以对5种微生物的生长产生良好的抑制作用,且为最低有效添加剂量,能达到“内服制剂、直肠给药制剂的抑菌效力判断标准”。结果表明,羟氯扎胺阿苯达唑复方混悬液中抑菌剂苯甲酸钠的最佳添加剂量为0.020%。

关键词：羟氯扎胺阿苯达唑复方混悬液剂量筛选苯甲酸钠抑菌效力

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菊苣酸调节免疫系统作用机制的研究进展

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黑龙江畜牧兽医 2023年第9期 28-32页

作者：冯晨婧白莉霞李剑勇中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所/农业农村部兽用药物创制重点实验室/甘肃省新兽药工程重点实验室兰州730050 天津农学院动物科学与动物医学学院天津300384

菊苣酸又称二咖啡酒石酸,是一种咖啡酸衍生物,对免疫系统具有重要的调节作用,可以增强机体免疫、促进固有免疫和适应性免疫、提高免疫细胞功能、调控细胞因子与抗体、调节免疫器官生长发育。文章主要综述了菊苣酸调节免疫系统的作用机制... 详细信息

菊苣酸又称二咖啡酒石酸,是一种咖啡酸衍生物,对免疫系统具有重要的调节作用,可以增强机体免疫、促进固有免疫和适应性免疫、提高免疫细胞功能、调控细胞因子与抗体、调节免疫器官生长发育。文章主要综述了菊苣酸调节免疫系统的作用机制,以期为菊苣酸在兽医临床免疫方面的开发与应用提供参考。

关键词：菊苣酸免疫系统作用机制细胞因子抗体

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