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黑龙江畜牧兽医 2024年第3期 16-21,30页

作者：刘亚娴李剑勇李世宏杨亚军刘希望葛闻博白莉霞秦哲李存天津农学院动物科学与动物医学学院/天津市农业动物繁育与健康养殖重点实验室天津300392 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所/农业农村部兽用药物创制重点实验室甘肃省新兽药工程重点实验室兰州730050

为了探讨阿司匹林丁香酚酯(AEE)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的RAW264.7细胞中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达及一氧化氮(NO)合成的影响,试验首先采用CCK-8法检测细胞存活率,采用油红O染色法观察细胞内脂滴形成情况,采用实时荧光定... 详细信息

为了探讨阿司匹林丁香酚酯(AEE)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的RAW264.7细胞中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达及一氧化氮(NO)合成的影响,试验首先采用CCK-8法检测细胞存活率,采用油红O染色法观察细胞内脂滴形成情况,采用实时荧光定量PCR扩增、免疫荧光技术和Western-blot技术测定iNOS mRNA和蛋白的相对表达量,最后通过硝酸盐还原酶测定法测定NO含量。结果表明:AEE和ox-LDL对RAW264.7细胞没有毒性。利用80μg/mL的ox-LDL可成功诱导RAW264.7细胞泡沫化,建立泡沫细胞模型,并且AEE可明显抑制细胞内脂滴的形成。ox-LDL可极显著上调细胞中iNOS mRNA及蛋白的相对表达量(P<0.01),并且极显著增加了细胞内NO含量(P<0.01)。经AEE预处理的RAW264.7细胞中iNOS mRNA及蛋白相对表达量显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01),细胞内NO含量也极显著减少(P<0.01)。说明AEE可通过抑制iNOS的表达降低NO的合成,缓解RAW264.7细胞泡沫化,进而发挥抗动脉粥样硬化的作用。

关键词：动脉粥样硬化 RAW264.7 泡沫细胞一氧化氮诱导型一氧化氮合酶

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甘宁地区蛋鸡源肺炎克雷伯菌的抗菌药物敏感性及耐药基因分析

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中国兽医科学 2024年第8期54卷 1111-1118页

作者：严钰璋茹梦珂贺泂杰王玲王胜义胡庭俊崔东安广西大学动物科学技术学院广西南宁5530005 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所农业农村部兽用药物创制重点实验室甘肃省新兽药工程重点实验室甘肃兰州730050

肺炎克雷伯菌是一种可以通过可移动遗传元件携带并传播耐药基因的机会致病菌。本研究对甘肃和宁夏地区蛋鸡源肺炎克雷伯菌进行分离和鉴定,用纸片扩散法和PCR法检测耐药表型和耐药基因型。结果显示,245份样品中分离出肺炎克雷伯菌54株(... 详细信息

肺炎克雷伯菌是一种可以通过可移动遗传元件携带并传播耐药基因的机会致病菌。本研究对甘肃和宁夏地区蛋鸡源肺炎克雷伯菌进行分离和鉴定,用纸片扩散法和PCR法检测耐药表型和耐药基因型。结果显示,245份样品中分离出肺炎克雷伯菌54株(分离率22.04%),54株(100.00%)分离株均有生物膜形成能力。分离株对大观霉素、复方新诺明、四环素、恩诺沙星和氧氟沙星等抗菌药物耐药严重,92.59%的分离株呈多重耐药表型。qnrB(90.74%)、bla_(SHV)(85.19%)、floR(75.93%)、sul1(72.22%)、gyrA(70.37%)和tetA(64.81%)等耐药基因检出率较高,并与耐药表型具有相关性。另外,发现1株多重耐药肺炎克雷伯菌携带产ESBLs基因bla_(SHV)、bla_(TEM)、bla_(CTX-M)和脂肽类耐药基因mcr-1和mcr-8等11种耐药基因,推测是通过可移动遗传元件形成的多种耐药基因富集株。本研究表明甘宁地区蛋鸡中肺炎克雷伯菌检出率较高,多重耐药情况严重,且耐药基因丰富。

关键词：肺炎克雷伯菌抗菌药物耐药性耐药基因蛋鸡

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利福昔明在人工胃/肠液和大鼠肠道菌群及组织样品中的稳定性初步分析

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中国农业大学学报 2022年第5期27卷 240-248页

作者：陶琦刘希望秦哲白莉霞李世宏李剑勇杨亚军中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所/农业农村部兽用药物创制重点实验室/甘肃省新兽药工程重点实验室兰州730050

为初步分析利福昔明(Rifaximin)在人工胃/肠液和肠道菌群及动物组织样品中的稳定性,将利福昔明分别与空白人工胃液(pH=1.3,不含酶)、空白人工肠液(pH=6.8,不含酶)、人工胃液(pH=1.3,含胃蛋白酶)、人工肠液(pH=6.8,含胰蛋白酶)、SD大鼠(... 详细信息

为初步分析利福昔明(Rifaximin)在人工胃/肠液和肠道菌群及动物组织样品中的稳定性,将利福昔明分别与空白人工胃液(pH=1.3,不含酶)、空白人工肠液(pH=6.8,不含酶)、人工胃液(pH=1.3,含胃蛋白酶)、人工肠液(pH=6.8,含胰蛋白酶)、SD大鼠(雄性)肠道菌群及不同组织样品的匀浆液等共孵育不同时间后,采用高效液相色谱法(HPLC)检测剩余利福昔明百分比的变化。结果表明:1)在空白人工胃液中,随孵育时间的增加,剩余利福昔明百分比虽有下降,但仍在90%以上;在人工胃液中孵育6h,其剩余百分比为84.03%;而在空白人工肠液和人工肠液中孵育6h后,其剩余百分比则分别降至81.14%和78.12%。2)利福昔明在SD大鼠肠道菌群中孵育12h后,虽发生部分降解,但剩余百分比仍在90%以上,总体呈稳定的趋势。3)利福昔明在空白SD大鼠的胃、肝、小肠和大肠及内容物的匀浆液中分别孵育6h后,其剩余百分比分别为92.09%、75.95%、78.24%和83.90%。综上,利福昔明在酸性条件下较稳定,而在碱性条件下,胰蛋白酶、胃蛋白酶和肠壁、肝脏代谢酶等对其稳定性的影响亦较为有限。本研究将为兽用利福昔明口服制剂的开发提供数据支持。

关键词：利福昔明人工胃液人工肠液肠道菌群组织样品稳定性

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海南省奶源和养殖环境主要肠杆菌科细菌的分布及基因分型

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畜牧兽医学报 2023年第12期54卷 5184-5197页

作者：郝若晨唐敏嘉刘光亮张艳 Muhammad Shoaib 尚若锋曹宗喜蒲万霞海南省农业科学院畜牧兽医研究所、海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室海口571100 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所/农业农村部兽用药物创制重点实验室/甘肃省新兽药工程重点实验室兰州730050 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州730046

本研究从2021年海南省两个奶牛场采集的52份样本中分离肠杆菌科细菌,并对分离菌株进行了毒力基因、质粒型和生物被膜形成能力检测及肠杆菌科细菌基因间重复序列分子分型(ERIC-PCR)研究,以期明确牛奶及奶牛场环境中肠杆菌科细菌分布流行... 详细信息

本研究从2021年海南省两个奶牛场采集的52份样本中分离肠杆菌科细菌,并对分离菌株进行了毒力基因、质粒型和生物被膜形成能力检测及肠杆菌科细菌基因间重复序列分子分型(ERIC-PCR)研究,以期明确牛奶及奶牛场环境中肠杆菌科细菌分布流行状况及其生物学特性。首先,采用16S rDNA PCR和ERIC-PCR对分离的肠杆菌科细菌进行鉴定和去重,结果显示52份样本中分离到肠杆菌科细菌49株,其中大肠埃希菌(Escherichia coli)32株,肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)13株,阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)3株,产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)1株;其次,采用PCR方法进行了分离菌株的毒力基因检测,结果显示,ompA的检出率最高;之后,采用CARATTOLI创建的基于PCR的质粒复制子分型,结果显示K质粒的检出率最高;采用刚果红琼脂法对分离菌株进行了生物被膜形成能力定性检测,发现49株肠杆菌科细菌中有37株指示有生物被膜形成能力;最后,通过ERIC-PCR分型进行了肠杆菌科细菌的亲缘关系和遗传多样性分析,发现49株肠杆菌科菌株可划分为17型(Ⅰ~ⅩⅦ),Ⅵ型为优势型(均为Escherichia coli),共20株。整体研究表明肠杆菌科细菌在奶源环境中广泛存在、生物特性多样,推测具有一定的致病力和耐药性,引起人类和动物疾病风险较高,提示养殖、运输中的卫生和规范操作至关重要。

关键词：肠杆菌科细菌分子分型质粒型生物被膜

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菊苣酸对磷酰胺氮芥诱导巨噬细胞免疫抑制的调节作用

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中国兽医学报 2024年第2期44卷 319-326页

作者：冯晨婧白莉霞杨亚军刘希望李世宏秦哲葛闻博许笑李剑勇李存天津农学院动物科学与动物医学学院天津市农业动物繁育与健康养殖重点实验室天津300392 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所农业农村部兽用药物创制重点实验室/甘肃省新兽药工程重点实验室甘肃兰州730050

用3μmol/L磷酰胺氮芥(phosphoramide mustard,PM)诱导RAW264.7细胞24 h,建立体外细胞免疫抑制模型;给予不同剂量(25、50、100μmol/L)的菊苣酸(chicoric acid,CA)干预细胞24 h,考察CA对免疫抑制的调节作用。利用CCK-8法检测细胞活力,... 详细信息

用3μmol/L磷酰胺氮芥(phosphoramide mustard,PM)诱导RAW264.7细胞24 h,建立体外细胞免疫抑制模型;给予不同剂量(25、50、100μmol/L)的菊苣酸(chicoric acid,CA)干预细胞24 h,考察CA对免疫抑制的调节作用。利用CCK-8法检测细胞活力,中性红吞噬法检测细胞吞噬能力,ELISA试剂盒测定细胞IL-1β和IL-6表达,NO含量测定试剂盒测定细胞NO水平,实时荧光定量PCR测定IL-1β、IL-6和iNOS mRNA的相对表达量。结果显示,3μmol/L PM诱导RAW264.7细胞24 h后,巨噬细胞活力与吞噬能力显著降低(P<0.05),NO、IL-1β与IL-6的表达以及相应的mRNA相对表达量均显著下降(P<0.05),巨噬细胞免疫抑制模型成功建立;给予不同剂量(25、50、100μmol/L)的CA干预24 h后,巨噬细胞活力与吞噬能力显著增强(P<0.05),巨噬细胞NO、IL-1β与IL-6分泌水平以及相应的mRNA相对表达量明显升高(P<0.05)。结果表明,PM可以有效建立体外巨噬细胞免疫抑制模型,CA可能通过增强巨噬细胞活力与吞噬能力,促进炎症因子表达发挥免疫增强作用,从而提高机体免疫功能。本研究建立体外巨噬细胞免疫抑制模型,探究CA对PM诱导RAW264.7细胞免疫抑制的调节作用,为将CA开发为新型兽用免疫增强剂提供了理论基础。

关键词：菊苣酸磷酰胺氮芥巨噬细胞免疫抑制免疫增强

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普拉沙星的研究进展

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黑龙江畜牧兽医 2022年第15期 23-28,36页

作者：史梦艳张欣欣白玉彬王玮玮张继瑜中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所/农村农业部兽用药物创制重点实验室/甘肃省新兽药工程重点实验室兰州730050

普拉沙星是一种兽用氟喹诺酮类药物,具有优良的抗菌活性,在兽医临床上用于治疗宠物的细菌性疾病,对犬猫的脓皮病、急性尿路感染和上呼吸道感染有良好的治疗效果。在抗菌药物耐药性问题日益严重的背景下,普拉沙星有望开发成为宠物细菌病... 详细信息

普拉沙星是一种兽用氟喹诺酮类药物,具有优良的抗菌活性,在兽医临床上用于治疗宠物的细菌性疾病,对犬猫的脓皮病、急性尿路感染和上呼吸道感染有良好的治疗效果。在抗菌药物耐药性问题日益严重的背景下,普拉沙星有望开发成为宠物细菌病治疗的高效药物。文章对普拉沙星的抗菌活性、药代动力学、耐药性、临床应用等进行综述,以期为未来国内兽医临床上研究和开发该药提供参考。

关键词：普拉沙星抗菌活性药代动力学耐药性临床应用

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人工胃/肠液和大鼠肠道菌群对氟苯尼考磺胺噻唑稳定性的影响

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动物医学进展 2023年第12期44卷 76-81页

作者：朱兆晗刘希望杨亚军白莉霞秦哲李世宏李准李剑勇葛闻博甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所/农业农村部兽用药物创制重点实验室/甘肃省新兽药工程重点实验室甘肃兰州730050

为新型偶联化合物-氟苯尼考磺胺噻唑(FST)研制和开发口服制剂提供数据支持,采用高效液相色谱法,对FST在5种溶液介质(无蛋白酶人工肠液、人工肠液、无蛋白酶人工胃液、人工胃液及大鼠肠道菌群培养液)中不同时刻的含量进行了研究,判断其... 详细信息

为新型偶联化合物-氟苯尼考磺胺噻唑(FST)研制和开发口服制剂提供数据支持,采用高效液相色谱法,对FST在5种溶液介质(无蛋白酶人工肠液、人工肠液、无蛋白酶人工胃液、人工胃液及大鼠肠道菌群培养液)中不同时刻的含量进行了研究,判断其稳定性差异。结果表明,FST在人工胃液和无蛋白酶人工胃液0~6 h含量保持基本稳定;在人工肠液和无蛋白酶人工肠液中孵育30 min已完全降解,且新出现的色谱峰在相同色谱条件下与氟苯尼考和磺胺噻唑对照品出峰时间相同。由此可知,FST的代谢产物为氟苯尼考和磺胺噻唑;FST在肠道菌群中发生了降解,0~8 h,FST含量迅速下降,而8~12 h趋于平稳,降至50%。说明FST在人工肠液中有明显的降解,在人工胃液中趋于稳定,肠道菌群对其稳定性也有一定的影响。

关键词：氟苯尼考磺胺噻唑人工肠液人工胃液肠道菌群稳定性

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阿苯达唑及其有关物质的高效液相色谱分析

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中国兽医科学 2022年第4期52卷 516-523页

作者：张东辉陈玲玲董朕白玉彬李冰张继瑜周绪正中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所农村农业部兽用药物创制重点实验室甘肃省新兽药工程重点实验室甘肃兰州730050

为了建立原料药及混悬液中阿苯达唑及其有关物质的高效液相色谱(HPLC)定量分析方法,采用AgilentPoroshell EC-C18(4.6 mm×150 mm,2.7μm)色谱柱,检测波长为292 nm,流动相为甲醇-0.1%甲酸10 mmol/L甲酸铵溶液,梯度洗脱,柱温35℃,流... 详细信息

为了建立原料药及混悬液中阿苯达唑及其有关物质的高效液相色谱(HPLC)定量分析方法,采用AgilentPoroshell EC-C18(4.6 mm×150 mm,2.7μm)色谱柱,检测波长为292 nm,流动相为甲醇-0.1%甲酸10 mmol/L甲酸铵溶液,梯度洗脱,柱温35℃,流速为0.80 m L/min,进样量5μL。结果显示,对阿苯达唑与各有关物质进行HPLC检测时均能到达基线分离,且空白辅料无干扰,各有关物质在质量浓度为0.03~20μg/m L范围内与峰面积呈良好的线性关系,R2≥0.999,回收率在90%~104%之间(RSD≤3%,n=9)。结果表明,所建立的高效液相色谱方法可以用于定性和定量分析阿苯达唑。

关键词：阿苯达唑高效液相色谱法有关物质

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复方阿苯达唑混悬液溶出条件的测定

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中国兽医科学 2022年第5期52卷 640-647页

作者：张东辉陈玲玲申涵露董朕白玉彬李冰张继瑜周绪正中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所农村农业部兽用药物创制重点实验室甘肃省新兽药工程重点实验室甘肃兰州730050

为了建立具有区分复方阿苯达唑混悬液中阿苯达唑和羟氯扎胺溶出度的方法,采用Agilent Eclipse XDB-C18(150 mm×4.6 mm,3.5μm)色谱柱,以含0.1%磷酸的10 mmol/mL磷酸二氢铵与甲醇的液相体积比为20∶80为流动相,检测波长300 nm,流速1... 详细信息

为了建立具有区分复方阿苯达唑混悬液中阿苯达唑和羟氯扎胺溶出度的方法,采用Agilent Eclipse XDB-C18(150 mm×4.6 mm,3.5μm)色谱柱,以含0.1%磷酸的10 mmol/mL磷酸二氢铵与甲醇的液相体积比为20∶80为流动相,检测波长300 nm,流速1.0 mL/min,柱温35℃。通过筛选不同pH值的缓冲液及含不同浓度表面活性剂的溶出介质,绘制本品中阿苯达唑和羟氯扎胺的体外溶出曲线,溶出方法为桨法,转速为50 r/min。结果显示,阿苯达唑和羟氯扎胺的质量浓度在10~100μg/mL范围内与检测峰面积呈良好的线性关系,其平均回收率(n=9)分别为99.1%和98.4%。本试验结果证明,分别以pH=1.5的盐酸溶液和含0.01%十二烷基硫酸钠的pH=7.4的磷酸盐缓冲液为双溶出介质时,阿苯达唑和羟氯扎胺能获得具有适当区分度的溶出曲线。

关键词：阿苯达唑羟氯扎胺 HPLC 溶出度双溶出介质

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兰州市犬和猫艰难梭菌感染的流行调查研究

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动物医学进展 2023年第4期44卷 119-124页

作者：温贵林秦哲杨亚军李剑勇叶得河刘希望甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所/农业农村部兽用药物创制重点实验室/甘肃省新兽药工程重点实验室甘肃兰州730050

调查兰州市宠物犬、猫中艰难梭菌(Clostridium difficile)感染的流行情况,为艰难梭菌感染防控提供基础数据。通过细菌分离纯化、16S rRNA测序分析、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI^(-)TOF MS)和多重PCR技术对采集到的菌株进行... 详细信息

调查兰州市宠物犬、猫中艰难梭菌(Clostridium difficile)感染的流行情况,为艰难梭菌感染防控提供基础数据。通过细菌分离纯化、16S rRNA测序分析、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI^(-)TOF MS)和多重PCR技术对采集到的菌株进行了分离、鉴定和毒素基因检测。结果表明,分离到的艰难梭菌粗糙、扁平,呈“油煎蛋”样典型菌落,革兰氏染色呈阳性;16S rRNA测序结果显示分离菌株与文献报道艰难梭菌的基因序列同源性>99%;MALDI^(-)TOF MS检测结果显示分离菌株有典型的艰难梭菌特征离子峰,与16S rRNA测序结果一致;毒素基因检测结果显示24株分离株中,1株为毒素A阳性/毒素B阳性/二元毒素阳性(A^(+)B^(+)CDT^(+)),15株为A^(+)B^(+)CDT^(-),8株为A^(-)B^(-)CDT^(-)。兰州市居民豢养的犬、猫中艰难梭菌的分离率分别为10.3%(19/185)和8.1%(5/62),呈现较高的感染率,需加强宠物艰难梭菌感染的防控。

关键词：宠物艰难梭菌分离鉴定毒素基因

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