检索结果-内蒙古大学图书馆

猪戊型肝炎病毒swCH189株衣壳蛋白基因CP239片段的表达、纯化及抗原性分析

中国兽医学报 2012年第2期32卷 231-237页

作者：郝宝成梁剑平兰喜刑小勇项海涛温峰琴胡永浩柳纪省中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所新兽药重点开放实验室甘肃省新兽药工程重点实验室甘肃兰州730050 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学学院甘肃兰州730070

根据已克隆的戊型肝炎病毒株swCH189株结构蛋白基因(ORF2)的抗原性及水溶性分析,在其序列上设计套式引物,采用RT-PCR技术扩增猪戊型肝炎病毒(HEV)结构蛋白基因ORF2主要抗原基因片段,长度为728bp,将其克隆于PMD18-T载体,测序结果表明插... 详细信息

根据已克隆的戊型肝炎病毒株swCH189株结构蛋白基因(ORF2)的抗原性及水溶性分析,在其序列上设计套式引物,采用RT-PCR技术扩增猪戊型肝炎病毒(HEV)结构蛋白基因ORF2主要抗原基因片段,长度为728bp,将其克隆于PMD18-T载体,测序结果表明插入的片段属于猪戊型肝炎病毒结构蛋白基因ORF2部分;将该片段插入pet32a表达载体,经酶切、测序鉴定证实获得了带有目的基因的重组表达质粒。将重组质粒转化Rosetta菌,经0.3mmol/L IPTG诱导得到融合表达,得到相对分子质量为45 000的重组蛋白,以包涵体形式存在。Western blot分析表明,该蛋白可以与猪戊型肝炎阳性血清反应,表明该蛋白具有良好的反应原性。并用SDS电泳切胶纯化和透析浓缩方法进行纯化,用纯化的蛋白免疫兔子,经每2周免疫1次,连续3次免疫后,对免疫组和对照组,分别在45,60,90d采血,每只兔子采集1份。用夹心ELISA法测定免疫血清抗体,结果表明免疫组在45d后均产生具有HEV抗原结合活性的抗体。本试验对猪swCH189株CP239基因的克隆和表达研究,为进一步研究结构蛋白基因ORF2的生物学功能奠定了基础。

关键词：猪戊型肝炎病毒 swCH189株克隆原核表达纯化抗原性分析

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甘肃地区牛源金黄色葡萄球菌分子鉴定及RAPD分型

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畜牧兽医学报 2011年第8期42卷 1134-1139页

作者：邓海平蒲万霞梁剑平倪春霞孟晓琴中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所中国农业科学院新兽药重点开放实验室甘肃省新兽药工程重点实验室兰州730050

本研究目的是分离鉴定引起甘肃地区奶牛乳房炎的金黄色葡萄球菌,掌握其基因型情况。利用16S、23SrRNA保守序列PCR扩增对乳房炎奶样中的金黄色葡萄球菌进行鉴定,并进行RAPD基因分型。结果表明,310份奶样中共分离出金黄色葡萄球菌100株,R... 详细信息

本研究目的是分离鉴定引起甘肃地区奶牛乳房炎的金黄色葡萄球菌,掌握其基因型情况。利用16S、23SrRNA保守序列PCR扩增对乳房炎奶样中的金黄色葡萄球菌进行鉴定,并进行RAPD基因分型。结果表明,310份奶样中共分离出金黄色葡萄球菌100株,RAPD结果显示这100株金黄色葡萄球菌均可得到清晰的RAPD指纹图谱,扩增产物在2～7条带之间,具有多种带型组成。通过聚类分析100株菌产生11个基因型,其中Ⅰ型4株,Ⅱ型4株,Ⅲ型10株,Ⅳ型13株,Ⅴ型7株,Ⅵ型24株,Ⅶ型16株,Ⅷ型6株,Ⅸ型4株,Ⅹ型10株,Ⅺ型2株。Ⅵ型为该地区的流行优势菌群,不同牛场各基因型菌株分布有明显差异。本研究说明牛场的环境与养殖条件对病原菌流行传播有明显的影响,这一结果对地区性奶牛乳房炎的防治提供了可靠的理论依据。

关键词：奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌 16S rRNA 23S rRNA RAPD 基因型

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奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌基因多态性分型试验

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中国兽医学报 2011年第6期31卷 891-894,898页

作者：邓海平倪春霞蒲万霞中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所中国农业科学院新兽药工程重点开放实验室甘肃省新兽药工程重点实验室甘肃兰州730050

利用随机引物AP-7,建立引物随机多态性扩增(RAPD)体系对71株引起内蒙古和贵州地区奶牛乳房炎的金黄色葡萄球菌分离株进行基因分型研究。结果表明,71株金黄色葡萄球菌均得到清晰的RAPD指纹图谱,扩增产物为2～9条带,产物大小为240～4 500b... 详细信息

利用随机引物AP-7,建立引物随机多态性扩增(RAPD)体系对71株引起内蒙古和贵州地区奶牛乳房炎的金黄色葡萄球菌分离株进行基因分型研究。结果表明,71株金黄色葡萄球菌均得到清晰的RAPD指纹图谱,扩增产物为2～9条带,产物大小为240～4 500bp。菌株共分为6个基因型,其中Ⅰ型17株(占23.9%)、Ⅱ型3株(占4.2%)、Ⅲ型33株(占46.5%)、Ⅳ型15株(占21.1%)、Ⅴ型2株(占2.8%)、Ⅵ型2株(占2.8%)。Ⅰ型为内蒙古地区的流行优势菌群,Ⅲ型为贵州地区的流行优势菌群。两地区各基因型菌株比例有明显差异,这可能与奶牛养殖业水平和环境差异有关。

关键词：奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌 RAPD 基因型

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牛源金黄色葡萄球菌16S rRNA分子鉴定与随机多态性扩增分型

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中国兽医杂志 2011年第4期47卷 9-12页

作者：邓海平蒲万霞梁剑平倪春霞孟晓琴中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所中国农业科学院新兽药工程重点开放实验室甘肃省新兽药工程重点实验室甘肃兰州730050

利用16S rRNA保守序列对引起内蒙古地区奶牛乳房炎的金黄色葡萄球菌进行分离鉴定,并且建立引物随机多态性扩增(RAPD)体系对金黄色葡萄球菌分离株进行基因分型研究。结果表明,共分离出金黄色葡萄球菌35株,RAPD结果显示这35株菌均可得到... 详细信息

利用16S rRNA保守序列对引起内蒙古地区奶牛乳房炎的金黄色葡萄球菌进行分离鉴定,并且建立引物随机多态性扩增(RAPD)体系对金黄色葡萄球菌分离株进行基因分型研究。结果表明,共分离出金黄色葡萄球菌35株,RAPD结果显示这35株菌均可得到清晰的RAPD指纹图谱,扩增产物在1～8条带之间,产物大小在350～4 500 bp之间。菌株分为6个基因型,Ⅳ型为该地区的流行优势菌群。不同牛场各基因型菌株分布有明显差异,这与牛场的环境和病原菌在牛场间流行传播情况有关。研究结果为地区性奶牛乳房炎的防治及新疫苗的研制提供了可靠的理论依据。

关键词：奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌 16S rRNA RAPD 基因型

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贵州地区牛源金黄色葡萄球菌分离株16S rRNA分子鉴定及RAPD分型研究

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中国畜牧兽医 2011年第1期38卷 112-115页

作者：邓海平蒲万霞梁剑平倪春霞孟晓琴中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所中国农业科学院新兽药重点开放实验室甘肃省新兽药重点实验室甘肃兰州730050

利用16S rRNA保守序列对引起贵州地区奶牛乳房炎的金黄色葡萄球菌进行分离鉴定,建立随机多态性扩增体系对金黄色葡萄球菌分离株进行基因分型研究。结果表明,69份奶样中共分离出金黄色葡萄球菌37株,DNA随机多态性扩增（random amplified ... 详细信息

利用16S rRNA保守序列对引起贵州地区奶牛乳房炎的金黄色葡萄球菌进行分离鉴定,建立随机多态性扩增体系对金黄色葡萄球菌分离株进行基因分型研究。结果表明,69份奶样中共分离出金黄色葡萄球菌37株,DNA随机多态性扩增（random amplified polymorphic DNA,RAPD）结果显示这37株金黄色葡萄球菌扩增产物在1~7条带之间,产物大小为400~4500 bp。菌株可分为7个基因型,其中Ⅰ型7株（18.9%）、Ⅱ型2株（5.4%）、Ⅲ型2株（5.4%）、Ⅳ型1株（2.7%）、Ⅴ型19株（51.4%）、Ⅵ型1株（2.7%）、Ⅶ型5株（13.5%）,Ⅴ型为该地区的流行优势菌群。地理和气候环境对病原菌流行传播的影响是病原菌基因型分布差异的重要原因。

关键词：奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌 16S rRNA RAPD 基因型

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奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌凝固酶基因型研究

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中国农业科学 2011年第2期44卷 417-422页

作者：倪春霞蒲万霞胡永浩邓海平中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所/新兽药重点开放实验室/甘肃省新兽药工程重点实验室甘肃农业大学动物医学院

【目的】了解上海和贵州地区引起奶牛乳房炎的金黄色葡萄球菌凝固酶基因型情况,为奶牛乳房炎的防治提供理论依据。【方法】利用16S rRNA保守序列设计引物,PCR扩增鉴定金黄色葡萄球菌,并利用凝固酶基因及其酶切产物多态性对分离鉴定出的... 详细信息

【目的】了解上海和贵州地区引起奶牛乳房炎的金黄色葡萄球菌凝固酶基因型情况,为奶牛乳房炎的防治提供理论依据。【方法】利用16S rRNA保守序列设计引物,PCR扩增鉴定金黄色葡萄球菌,并利用凝固酶基因及其酶切产物多态性对分离鉴定出的金黄色葡萄球菌进行了凝固酶基因分型。【结果】共鉴定出78株金黄色葡萄球菌,有74株金黄色葡萄球菌扩增凝固酶基因片段,分为5个基因型和两个亚型。PCR 1型为贵州地区优势基因型,PCR 3型为上海地区优势基因型。【结论】两地区各基因型菌株分布比例有显著的地域性差异,这与两地区地理环境和养殖水平差异对病原流行传播的影响有关。

关键词：奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌分子鉴定凝固酶基因分型

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山羊痘的流行及防治措施

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中国畜牧兽医 2011年第5期38卷 152-154页

作者：郝宝成梁剑平王学红郭志廷郭文柱胡永浩中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所中国农业科学院新兽药工程重点开放实验室甘肃省新兽药工程重点实验室甘肃兰州730050 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

山羊痘是由山羊痘病毒属的痘病毒引起的羊的一种急性、热性、接触性传染病。文章从山羊痘流行病学、症状、诊断和防治措施等方面对山羊痘进行综述。

关键词：山羊痘病毒流行病学诊断防治措施

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猪戊型肝炎病毒双重RT-PCR检测诊断方法的建立及其应用

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中国兽医杂志 2011年第5期47卷 35-36页

作者：郝宝成兰喜胡永浩柳纪省梁剑平中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所中国农业科学院新兽药工程重点开放实验室甘肃省新兽药工程重点实验室甘肃兰州730050 中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

猪戊型肝炎（HE）是近年来颇受人们关注的一种人畜共患传染病。人普遍易感。急性戊型肝炎病情较重,病死率为2.5%,明显高于甲型（0.1%）和乙型（0.9%）肝炎,孕期妇女死亡率可高达15%~20%[1],尤其是怀孕最后3个月的孕妇病死率更高。

关键词：戊型肝炎病毒 RT-PCR检测诊断方法人畜共患传染病应用猪南部地区病死率

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猪戊型肝炎病毒swCH189株衣壳蛋白基因CP239片段原核表达条件的优化

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湖北农业科学 2011年第15期50卷 3116-3119页

作者：郝宝成梁剑平兰喜刑小勇项海涛温峰琴胡永浩柳纪省中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所/新兽药重点开放实验室/甘肃省新兽药工程重点实验室兰州730050 中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室/农业部草食动物疫病重点开放实验室兰州730046 甘肃农业大学动物医学院兰州730070

为了提高猪戊型肝炎病毒swCH189株衣壳蛋白基因CP239片段在大肠杆菌中的表达量,研究了载体、温度、转速、诱导时间以及诱导剂IPTG浓度等不同条件对衣壳蛋白基因CP239片段融合蛋白表达量的影响。结果表明,用LB培养基于37℃培养3.5 h后,... 详细信息

为了提高猪戊型肝炎病毒swCH189株衣壳蛋白基因CP239片段在大肠杆菌中的表达量,研究了载体、温度、转速、诱导时间以及诱导剂IPTG浓度等不同条件对衣壳蛋白基因CP239片段融合蛋白表达量的影响。结果表明,用LB培养基于37℃培养3.5 h后,采用终浓度为0.3 mmol/L的IPTG在37℃、200r/min诱导培养4 h,pET32a-CP239融合蛋白表达量最大;SDS-PAGE检测结果表明pET32a-CP239融合蛋白的分子质量与预期大小一致,约为45.3 ku;Western blotting结果表明,pET32a-CP239融合蛋白可以与抗-HEV阳性血清发生特异性反应,并具有良好的反应原性,说明衣壳蛋白基因CP239片段蛋白得到正确表达。

关键词：猪戊型肝炎病毒衣壳蛋白 CP239片段原核表达

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六茜素稳定性影响因素研究

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中兽医医药杂志 2011年第3期13卷 51-53页

作者：王学红郭文柱刘宇郝宝成郑红星梁剑平中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所甘肃省新兽药工程重点实验室中国农业科学院新兽药工程重点开放实验室甘肃兰州730050

目的:探讨六茜素的固有稳定性、了解影响其稳定性的因素及可能的降解途径与分解产物,为制剂生产工艺、包装、贮存条件提供科学依据。方法:分别通过高温试验、高湿度试验、强光照射试验等,考察六茜素制剂的稳定性。结果:六茜素在强光照... 详细信息

目的:探讨六茜素的固有稳定性、了解影响其稳定性的因素及可能的降解途径与分解产物,为制剂生产工艺、包装、贮存条件提供科学依据。方法:分别通过高温试验、高湿度试验、强光照射试验等,考察六茜素制剂的稳定性。结果:六茜素在强光照射和高温条件下稳定,湿度和水分对六茜素的稳定性影响较大。结论:六茜素应密封贮存,使用时宜现配现用。

关键词：六茜素影响因素试验稳定性

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