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中国毒理学会第十一次全国毒理学大会

作者：冯基陶琦范丽萍冯晨婧李剑勇杨亚军中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所农业农村部兽用药物创制重点实验室甘肃省新兽药重点实验室

阿司匹林丁香酚酯（Aspirin eugenol ester,AEE）是由阿司匹林和丁香酚酯化而成的新型药物化合物。该药具有多种药理活性,如抗炎、降血脂、抗氧化应激和预防神经性疾病等。目的本研究旨在探讨AEE对不同年龄段大鼠的影响,和对老年大鼠抑... 详细信息

阿司匹林丁香酚酯（Aspirin eugenol ester,AEE）是由阿司匹林和丁香酚酯化而成的新型药物化合物。该药具有多种药理活性,如抗炎、降血脂、抗氧化应激和预防神经性疾病等。目的本研究旨在探讨AEE对不同年龄段大鼠的影响,和对老年大鼠抑郁样行为的改善作用及其机制。材料和方法本实验选用青年大鼠和老年大鼠进行评估AEE的效果。SD大鼠随机分为4组（n=8）:（1）老年大鼠组（Old组）;（2）老年大鼠组+AEE组(AEE,18 mg·kg);（3）青年大鼠组（Young组）;（4）青年大鼠组+AEE组(AEE,18 mg·kg)。采用血清生化检测、酶联免疫吸附法（ELISA）和组织病理学分析,评价AEE对不同年龄段大鼠的影响。通过大鼠海马组织的转录组学和非靶向代谢组学分析AEE对老年大鼠海马组织的影响。结果 AEE对大鼠的体重无显著的影响（P>0.05）,可以显著降低大鼠脂肪细胞的面积（P<0.05）。AEE对老年大鼠的血脂四项没有显著影响（P>0.05）,但对青年大鼠的TC和TG有显著影响（P<0.05）;老年大鼠的炎症比青年大鼠严重,AEE可显著降低老年大鼠的炎症反应（P<0.05）;AEE可以显著延长老年大鼠游泳时间（P<0.05）,而对青年大鼠没有显著影响（P>0.05）;通过组织病理学检查发现AEE对大鼠的肝脏和肾脏无显著影响;通过血生化检测发现AEE可以显著改善老年大鼠的肝功能,可以提高老年大鼠的葡萄糖代谢;大鼠海马组织转录学的分析发现AEE可以显著影响大鼠海马组织基因的表达,包括Ccl19,il2ra,serpind1,serpine1,Cacna1f,Chrna3,Cplx3,Gmg14和F2rl1。这些差异表达基因主要富集通路是心血管,免疫,神经,脂质代谢;AEE可以显著影响大鼠海马组织代谢物的表达,包括L-Phosphoarginine,Epa,PC(22∶4（7Z,10Z,13Z,16Z）/0∶0),PE(20∶4（8Z,11Z,14Z,17Z）/P-16∶0),PC(20∶4（5Z,8Z,11Z,14Z）/0∶0),PC(15∶0/20∶3（5Z,8Z,11Z）),PC(14∶0/18∶1（11Z）),这些差异表达代谢物主要富集通路是神经系统,脂质代谢。结论因此,AEE可以改善老年大鼠的机体状态和抑郁样行为,通过调控炎症反应、调节能量代谢和糖代谢等途径。

关键词：阿司匹林丁香酚酯(AEE) 转录组学代谢组学衰老炎症

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阿司匹林丁香酚酯减轻其前体药物不良反应的研究

阿司匹林丁香酚酯减轻其前体药物不良反应的研究

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中国毒理学会第十一次全国毒理学大会

作者：陶琦申栋帅范丽萍冯晨婧李剑勇杨亚军中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所农业农村部兽用药物创制重点实验室甘肃省新兽药重点实验室

阿司匹林对胃肠道的副作用和丁香酚的刺激性及不稳定性限制了其应用。基于前药原理,通过酯化反应合成了阿司匹林丁香酚酯(aspirin eugenol ester,AEE)。研究表明,AEE具有确切的抗炎、抗氧化、降血脂和预防血栓形成等作用,效果优于前体药... 详细信息

阿司匹林对胃肠道的副作用和丁香酚的刺激性及不稳定性限制了其应用。基于前药原理,通过酯化反应合成了阿司匹林丁香酚酯(aspirin eugenol ester,AEE)。研究表明,AEE具有确切的抗炎、抗氧化、降血脂和预防血栓形成等作用,效果优于前体药物Asp和/或Eug,具有很好的成药性。本研究考察并比较了AEE及其前体药物,对小鼠尾部出血时间和出血量的影响,以及对大鼠胃肠黏膜损伤的影响。对小鼠连续1周灌服给予小剂量的AEE及其前体药物后,外伤造小鼠尾部出血模型,考察AEE对出血时间和出血量的影响;对大鼠连续1周灌服给予大剂量AEE及其前体药物后,考察AEE等对大鼠胃肠黏膜损伤及肠道菌群的影响。结果显示,相比于对照组,Asp和Asp-Eug联合给药能够显著增加出血时间和出血量;而AEE和Eug则无显著影响。大剂量的Asp-Eug联合给药1周后,大鼠死亡4只(共6只),AEE和Asp(500 mg/kg)组大鼠则无死亡;Asp可导致大鼠机体产生严重的氧化应激和炎症反应,但AEE则无显著影响(P>0.05);病理学检查结果显示,Asp可造成大鼠胃、肠黏膜的严重损伤,及肺组织出血;而AEE则无显著影响(P>0.05);16S测序结果显示,相较于Asp,AEE对大鼠肠道菌群的影响较小;AEE可以显著影响粪便代谢物水平,如Lysylleucine,Palmitoleic acid,Cholic acid,Sucrose等。以上结果说明AEE可有效降低其前体药物造成的出血和胃肠黏膜损伤等不良反应;其中AEE可能通过改善菌群结构和代谢物水平,减轻前体药物对胃肠黏膜的损伤。

关键词：阿司匹林丁香酚酯(AEE) 阿司匹林(Asp) 丁香酚(Eug) 胃肠道损伤 16S

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液相色谱-串联质谱法检测猪血浆中除虫脲的方法学研究

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中国畜牧兽医 2022年第7期49卷 2746-2756页

作者：徐玉珍刘希望秦哲李世宏白莉霞范丽萍魏彦明李剑勇杨亚军甘肃农业大学动物医学院兰州730070 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所农业农村部兽用药物创制重点实验室甘肃省新兽药工程重点实验室兰州730050

【目的】考察口服灭蝇蛆药除虫脲(diflubenzuron,DFB)预混剂灌服给药后,在猪体内的药代动力学特征,建立猪血浆中除虫脲浓度的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测方法。【方法】以除虫脲-^(13)C_(6)(DFB-^(13)C_(6))为内标,血浆样品经甲醇... 详细信息

【目的】考察口服灭蝇蛆药除虫脲(diflubenzuron,DFB)预混剂灌服给药后,在猪体内的药代动力学特征,建立猪血浆中除虫脲浓度的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测方法。【方法】以除虫脲-^(13)C_(6)(DFB-^(13)C_(6))为内标,血浆样品经甲醇沉淀蛋白,离心后取上清液减压浓缩至干,甲醇-水(1∶1)复溶后进行分析。色谱柱为ZORBAX Eclipse Plus C18柱;流动相为甲醇-0.1%甲酸水(含5 mmol/L甲酸铵),进行梯度洗脱;流速为0.4 mL/min;柱温为35℃;进样量为10μL。电喷雾离子源,正离子模式,多离子反应监测模式检测,DFB及内标的定量离子对分别为m/z 311.1→158.1和m/z 317.1→158.1。对色谱和质谱条件优化后,考察该方法的专属性、定量下限、基质效应、线性范围、准确度、精密度和样品稳定性等。【结果】所建立的方法灵敏度高,检测限为0.5 ng/mL,定量限为1 ng/mL;基质效应对样品的检测影响较小;标准溶液在1~1000 ng/mL的浓度范围内,线性关系良好(R^(2)≥0.998);在定量下限1 ng/mL及低(2 ng/mL)、中(100 ng/mL)、高浓度(800 ng/mL)的添加水平下,平均准确度在97.78%~115.06%之间,批内、批间变异系数均<10%,符合方法学要求。在考察的条件下,标准溶液、空白血浆加标样品及处理后的样品,稳定性良好;但应避免样品的反复冻融。【结论】建立的LC-MS/MS检测方法简便、专属性强、灵敏度高、准确可靠,可用于猪血浆中除虫脲浓度的检测,进而应用于除虫脲预混剂在猪体内的药代动力学研究。

关键词：猪血浆除虫脲(DFB) 液相色谱-串联质谱法内标法

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AEE对高脂血症大鼠炎症的改善作用研究

AEE对高脂血症大鼠炎症的改善作用研究

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中国毒理学会第十一次全国毒理学大会

作者：范丽萍陶琦张治杰葛闻博杨亚军李剑勇中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所农业农村部兽用药物创制重点实验室甘肃省新兽药重点实验室

目的高脂饮食可诱导非酒精性脂肪肝的发生,并伴随炎症反应,炎症进一步的加重会诱发不可逆转的非酒精性脂肪肝炎。血清IL-1β、TNF-α升高是炎症反应的重要标志,降低炎症水平可缓解非酒精性脂肪肝的发生和发展。本研究旨在探讨AEE对高脂... 详细信息

目的高脂饮食可诱导非酒精性脂肪肝的发生,并伴随炎症反应,炎症进一步的加重会诱发不可逆转的非酒精性脂肪肝炎。血清IL-1β、TNF-α升高是炎症反应的重要标志,降低炎症水平可缓解非酒精性脂肪肝的发生和发展。本研究旨在探讨AEE对高脂血症大鼠炎症水平的改善作用。方法健康雄性SD大鼠,随机分为5组,分别给予普通日粮(Control)、高脂日粮(HFD)、高脂日粮并灌胃AEE 27 mg/kg/d(HFD+AEE-L)、高脂日粮并灌胃AEE 54 mg/kg/d(HFD+AEE-M)、高脂日粮并灌胃AEE 108 mg/kg/d(HFD+AEE-H),连续处理8周。采集血清、肝脏,检测血脂指标甘油三酯(TG)、总胆固醇(TCH)、低密度脂蛋白(LDL),炎症指标IL-1β、TNF-α、IL-10,肝脏HE染色观察病理变化。结果与Control组大鼠比较,HFD组血清TCH、LDL显著升高,表明高脂日粮诱导了大鼠高脂血症;与HFD组比较,HFD+AEE-L、HFD+AEE-M、HFD+AEE-H组大鼠血清TCH、LDL明显下降,表明AEE能够降低高脂血症大鼠血脂水平。与Control组比较,HFD组大鼠血清IL-1β、TNF-α显著升高,IL-10显著下降,表明高脂日粮诱导大鼠炎症发生;与HFD组比较,HFD+AEE-L、HFD+AEE-M、HFD+AEE-H组大鼠血清IL-1β、TNF-α显著下降,IL-10显著上升,表明AEE可显著改善高脂血症大鼠炎症水平。与Control组比较,HFD组肝脏组织中大量肝细胞发生脂肪变性,可见肝细胞胞质内含不着色、边缘光滑的圆形脂滴,以小脂滴为主;部分肝细胞肿胀明显,肿胀肝细胞散在分布,可见肝细胞变大变圆。与HFD组比较,AEE给药组肝细胞脂肪变性明显改善,表明AEE可以缓解高脂日粮诱导的大鼠肝脏脂肪性病变。结论 AEE显著降低高脂血症大鼠血清TCH、LDL;显著降低IL-1β、TNF-α,升高IL-10;并且缓解肝脏脂肪性病变。

关键词： AEE 大鼠高脂血症炎症

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桧烯抗弓形虫活性的体外评价

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畜牧兽医学报 2021年第10期52卷 2915-2923页

作者：邱燕华翟斌涛尚小飞周绪正李冰张继瑜中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所农业部兽用药物创制重点实验室甘肃省新兽药工程重点实验室兰州730050

本研究旨在筛选具有抗弓形虫活性的萜类化合物,并进行体外活性评价。对26个萜类化合物进行体外抗弓形虫增殖作用的筛选,采用CCK-8法确定活性化合物对Vero细胞的毒性和安全浓度,Giemsa染色进一步确定对弓形虫的活性,通过细胞免疫荧光、Gi... 详细信息

本研究旨在筛选具有抗弓形虫活性的萜类化合物,并进行体外活性评价。对26个萜类化合物进行体外抗弓形虫增殖作用的筛选,采用CCK-8法确定活性化合物对Vero细胞的毒性和安全浓度,Giemsa染色进一步确定对弓形虫的活性,通过细胞免疫荧光、Giemsa染色和生物化学发光法评价活性化合物对弓形虫的体外活性。结果表明,26个萜类化合物中,桧烯对弓形虫有显著的活性,桧烯对RH-2F的IC50为90.76μg·mL^(-1),Giemsa染色和细胞免疫荧光的结果表明,桧烯对细胞内的两种弓形虫虫株都有显著的抗增殖作用,并且对弓形虫的入侵有极显著的抑制作用(P<0.001)。综上表明,桧烯对弓形虫的入侵和细胞内增殖具有显著的抑制作用,可作为潜在的抗弓形虫先导化合物。

关键词：弓形虫萜类化合物莪术烯环黄芪醇桧烯

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小鼠口服普拉沙星的急性毒性试验研究

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中兽医医药杂志 2023年第1期42卷 57-59,F0002页

作者：史梦艳张欣欣陈玲玲周凯仁程富胜张继瑜中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所农村农业部兽用药物创制重点实验室甘肃省新兽药工程重点实验室甘肃兰州730050

为初步评价普拉沙星的安全性,进行了小鼠急性毒性试验。采用递加法进行预试验,测得最小致死剂量(LD100)和最大耐受剂量(LD0),确定正式试验给药剂量范围、组数和组间剂量比。正式试验采用寇氏法,观察小鼠口服普拉沙星后的体征变化,记录... 详细信息

为初步评价普拉沙星的安全性,进行了小鼠急性毒性试验。采用递加法进行预试验,测得最小致死剂量(LD100)和最大耐受剂量(LD0),确定正式试验给药剂量范围、组数和组间剂量比。正式试验采用寇氏法,观察小鼠口服普拉沙星后的体征变化,记录死亡时间和每组死亡率,对死亡小鼠进行剖检和组织病理学观察,确定普拉沙星对主要脏器的毒性作用。结果显示,小鼠口服普拉沙星的半数致死剂量(LD50)为1606.9 mg/kg,95%可信限为1342.8~1923.1 mg/kg。在给药剂量大于1562 mg/kg时,普拉沙星对小鼠的肺脏、肝脏、脾脏和肾脏均可造成明显损伤。根据化学物质的急性毒性剂量分级,可将普拉沙星判定为低毒化学物。

关键词：普拉沙星急性毒性小鼠 LD50

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茶树精油抗微生物作用机理研究进展

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食品工业科技 2021年第3期42卷 331-337页

作者：程峰尚若锋杨珍梁剑平郝宝成王学红郭文柱刘宇中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所/农业农村部兽用药物创制重点实验室/甘肃省新兽药工程重点实验室甘肃兰州730050

茶树精油(Tea tree oil,TTO)是从互叶白千层的新鲜枝叶中取出来的一种无色至淡黄色的植物精油。茶树精油具有广谱的抗微生物活性,对许多细菌和真菌具有较好的杀灭或抑制作用,已被研发成多种类型的产品如防腐剂、抗菌剂和芳香剂,主要应... 详细信息

茶树精油(Tea tree oil,TTO)是从互叶白千层的新鲜枝叶中取出来的一种无色至淡黄色的植物精油。茶树精油具有广谱的抗微生物活性,对许多细菌和真菌具有较好的杀灭或抑制作用,已被研发成多种类型的产品如防腐剂、抗菌剂和芳香剂,主要应用于化妆品、药品、食品香料及美容行业等诸多领域。本文综述了近年关于茶树精油对细菌、真菌的抑菌活性及机理、抗病毒活性以及抗寄生虫活性的研究,并对茶树精油抗微生物作用的主要活性物质的研究进展进行了总结,旨在为茶树精油在减抗替抗中的应用提供参考。

关键词：茶树精油抗微生物活性作用机理活性成分

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获得性16S rRNA甲基化酶的研究进展

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畜牧兽医学报 2021年第9期52卷 2369-2383页

作者：唐敏嘉何卓琳蒲万霞中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所/农业农村部兽用药物创制重点实验室/甘肃省新兽药工程重点实验室兰州730050

外源获得性16S rRNA甲基化酶基因广泛分布于革兰阴性细菌中,介导对多种氨基糖苷类药物的高水平耐药。该酶能将S-腺苷-L-甲硫氨酸的甲基添加到16S rRNA氨酰tRNA识别位点的特异性核苷酸上,从而干扰氨基糖苷类药物与靶位点的结合。16S rRN... 详细信息

外源获得性16S rRNA甲基化酶基因广泛分布于革兰阴性细菌中,介导对多种氨基糖苷类药物的高水平耐药。该酶能将S-腺苷-L-甲硫氨酸的甲基添加到16S rRNA氨酰tRNA识别位点的特异性核苷酸上,从而干扰氨基糖苷类药物与靶位点的结合。16S rRNA甲基化酶基因通常由转座子等活动性遗传元件介导并嵌入到可转移的质粒或染色体中,从而导致耐药基因广泛而迅速地传播。更令人担忧的是,16S rRNA甲基化酶基因经常与blaNDM-1、blaCTX-M和qnrB1等其他耐药基因偶联,介导对β-内酰胺类药物和氟喹诺酮类药物的多重耐药。对于多重耐药16S rRNA甲基化酶阳性菌引发的感染,治疗方法非常有限。迄今为止,至少已有30个国家和地区对16S rRNA甲基化酶进行了相关报道,由此可见,16S rRNA甲基化酶基因的全球传播正成为一个全球重大公共卫生问题。

关键词：氨基糖苷类药物 16S rRNA甲基化酶多重耐药

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除虫脲在人工胃/肠液和肠道菌群及生物样品中的稳定性研究

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西北农业学报 2021年第9期30卷 1271-1278页

作者：陶琦徐玉珍秦哲白莉霞刘希望李世宏杨亚军李剑勇中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所农业农村部兽用药物创制重点实验室甘肃省新兽药工程重点实验室兰州730050

为了考察除虫脲(DFB)在人工胃/肠液和肠道菌群及生物样品中的稳定性,为合理开发DFB口服制剂提供试验依据。采用高效液相色谱法(HPLC),分别将DFB与空白人工胃液(pH为1.3,不含酶)、空白人工肠液(pH为6.8,不含酶)、人工胃液(pH为1.3,含胃... 详细信息

为了考察除虫脲(DFB)在人工胃/肠液和肠道菌群及生物样品中的稳定性,为合理开发DFB口服制剂提供试验依据。采用高效液相色谱法(HPLC),分别将DFB与空白人工胃液(pH为1.3,不含酶)、空白人工肠液(pH为6.8,不含酶)、人工胃液(pH为1.3,含胃蛋白酶)、人工肠液(pH为6.8,含胰蛋白酶)、SD大鼠(雄性)肠道菌群或生物样品分别共孵育不同时间后,检测DFB的含量变化。结果表明,DFB在空白人工胃液和人工胃液中孵育0~2 h剩余百分比基本没有发生变化,之后随着时间的增加,剩余百分比略有下降,但剩余百分比都在90%以上,总体呈现稳定趋势。在空白人工肠液中孵育,剩余百分比随着时间增加显著下降,孵育6 h后剩余百分比为82.97%;在人工肠液中孵育6 h,DFB的剩余百分比为77.41%。DFB在SD大鼠肠道菌群中孵育12 h发生部分降解,但DFB的剩余百分比在90%以上,总体呈稳定趋势。DFB在肝、胃、大肠等生物样品中孵育6 h后,DFB的剩余百分比均在90%以上;而在小肠生物样品中孵育6 h后DFB的剩余百分比为84.06%。

关键词：除虫脲人工胃液人工肠液肠道菌群生物样品稳定性

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奶牛养殖场环境大肠杆菌的ERIC-PCR分型和系统进化分群

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畜牧兽医学报 2021年第7期52卷 2059-2064页

作者：何卓琳唐敏嘉张雪婧侯晓蒲万霞中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所农业农村部兽用药物创制重点实验室甘肃省新兽药工程重点实验室兰州730050

旨在了解奶牛养殖场环境中大肠杆菌流行情况及遗传多样性,探究不同样品分离菌株的遗传关系及系统进化分群情况,收集2017—2019年新疆某大型奶牛场养殖环境中的209份样品进行大肠杆菌分离和16S rRNA鉴定,对非重复菌株进行ERIC-PCR分型和... 详细信息

旨在了解奶牛养殖场环境中大肠杆菌流行情况及遗传多样性,探究不同样品分离菌株的遗传关系及系统进化分群情况,收集2017—2019年新疆某大型奶牛场养殖环境中的209份样品进行大肠杆菌分离和16S rRNA鉴定,对非重复菌株进行ERIC-PCR分型和系统进化分群试验。结果显示,共分离到338株大肠杆菌,分离率为67.46%。ERIC-PCR将其分为Ⅰ~ⅩⅣ共14型。Ⅳ(196株)型为优势型;其次为Ⅰ型(59株)、Ⅴ(31株)、Ⅹ(11株);剩余41株分布于其他10种型。除2株未分群外,其他被分为6个群,B1群(75.45%)分布最多,其次是A群(18.34%)、C群(2.96%)、D或E群(1.18%)、F群(0.30%)。综上表明,奶牛养殖场环境中大肠杆菌存在广泛的DNA多样性,且不同时间及来源菌株间存在较近的亲缘关系;系统进化分群以B1群为主。

关键词：大肠杆菌奶牛养殖场环境 ERIC-PCR 系统进化分群

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