检索结果-内蒙古大学图书馆

中国农业科学 2014年第18期47卷 3684-3690页

作者：金芬王静魏闪闪杜欣蔚邵华金茂俊王珊珊佘永新中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所/农业部农产品质量安全重点实验室

【目的】研究阿维菌素通过土壤穴施施药方式在黄瓜和土壤中的残留消解动态,制定阿维菌素缓释粒剂防止黄瓜根结线虫的安全间隔期。【方法】阿维菌素消解动态试验采用推荐高剂量的1.5倍(5.62 g·m-2)为施药剂量,在黄瓜移栽时通过土壤... 详细信息

【目的】研究阿维菌素通过土壤穴施施药方式在黄瓜和土壤中的残留消解动态,制定阿维菌素缓释粒剂防止黄瓜根结线虫的安全间隔期。【方法】阿维菌素消解动态试验采用推荐高剂量的1.5倍(5.62 g·m-2)为施药剂量,在黄瓜移栽时通过土壤穴施方式施药1次。分别测定施药后2 h、1 d、3 d、5 d、7 d、10 d、14 d、21 d、28 d和45 d的阿维菌素残留量的变化。阿维菌素的最终残留试验设置高低两个不同施药剂量:低剂量按推荐剂量3.75 g·m-2,高剂量按推荐剂量的1.5倍(5.62 g·m-2),分别于黄瓜移栽时土壤穴施1次,于黄瓜成熟期采样测定阿维菌素的最终残留量。样品中阿维菌素残留量的测定采用分散固相萃取-液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)法,在10 g粉碎均质的黄瓜、植株或土壤样品加入4 g无水硫酸钠和1 g氯化钠,用10 mL乙腈提取2 min后,离心并移取上清液2 mL,通过50 mg N-丙基乙二胺吸附剂(PSA)和50 mg十八烷基键合硅胶吸附剂(C18)进行分散固相萃取(DSPE)净化,离心上清液过0.22μm滤膜后上机测定。【结果】本文所建立的阿维菌素残留量的分散固相萃取-液相色谱-串联质谱测定法简单快速,阿维菌素在10、50和100μg·kg-1 3个添加水平下回收率为78%—101%,相对标准偏差1.9%—9.4%;方法定量限为10.0μg·kg-1,该方法能够满足现有限量标准的要求。北京和哈尔滨两个试验点消解动态试验中,采用土壤穴施施药方式,阿维菌素在黄瓜中未检出,这表明阿维菌素是非内吸性农药;而在土壤中检出了阿维菌素,其降解动态符合一级动力学指数模型,在土壤中的半衰期为7.9—18.7 d。在黄瓜最终残留试验中,成熟期的所有黄瓜样品中均未检出阿维菌素。在土壤最终残留试验中,2012年北京试验点的3个样品检出阿维菌素,检出浓度分别为10、30和170μg·kg-1;哈尔滨试验点的2个土壤样品检出阿维菌素,检出浓度均为10μg·kg-1。与喷雾施药方式相比,土壤穴施方式下阿维菌素在土壤中的残留期更长。【结论】在黄瓜种植中,1%阿维菌素缓释粒剂以推荐剂量3.75 g·m-2采用土壤穴施方式使用是安全的。

关键词：阿维菌素液相色谱-串联质谱分散固相萃取降解残留土壤穴施

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新型反相分配及强阳离子交换固相萃取材料对三聚氰胺的吸附性能研究

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分析测试学报 2014年第12期33卷 1349-1355页

作者：李永飞邵华金芬金茂俊佘永新王珊珊王静中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所农业部农产品质量安全重点实验室北京100081

采用高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)技术研究了新型反相分配和强阳离子交换固相萃取柱的性能,确定了该新型固相萃取柱的最佳p H值、最佳流速、最大吸附容量及饱和吸附容量。研究了新型固相萃取柱对三聚氰胺在不同起始浓度下的吸附... 详细信息

采用高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)技术研究了新型反相分配和强阳离子交换固相萃取柱的性能,确定了该新型固相萃取柱的最佳p H值、最佳流速、最大吸附容量及饱和吸附容量。研究了新型固相萃取柱对三聚氰胺在不同起始浓度下的吸附动力学和不同温度下的吸附热力学性能,并对吸附等温线数据进行了拟合。结果显示:该新型固相萃取柱的最佳吸附p H值为5.0,最佳流速为1.0 m L/min,最佳洗脱体积为1.0 m L,最大吸附量为900μg。30℃下该萃取柱的饱和吸附容量为81.45μg/mg。该吸附过程符合准二级动力学吸附模型,吸附等温线符合Langmuir吸附模型,且该过程为自发进行的吸热反应。

关键词：新型反相分配和强阳离子固相萃取材料吸附性能三聚氰胺高效液相色谱-串联质谱

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农产品中三唑磷农药残留化学发光酶免疫分析方法研究

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分析测试学报 2014年第7期33卷 758-765页

作者：杨丽华金茂俊杜鹏飞金芬邵华佘永新王珊珊王静中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所农业部农产品质量安全重点实验室北京100081

运用棋盘法确定直接竞争CLEIA法抗体和酶标半抗原的最适工作浓度，以4-（咪唑-1-基）苯酚（4-IMP）作为增强剂，运用L2，（5^6）正交设计实验优化增敏液配方，建立了农产品中三唑磷农药残留的化学发光酶免疫分析方法。优化的最适工作条... 详细信息

运用棋盘法确定直接竞争CLEIA法抗体和酶标半抗原的最适工作浓度，以4-（咪唑-1-基）苯酚（4-IMP）作为增强剂，运用L2，（5^6）正交设计实验优化增敏液配方，建立了农产品中三唑磷农药残留的化学发光酶免疫分析方法。优化的最适工作条件：抗体包被浓度为2．0μg／mL，酶标半抗原浓度为0．006μg／mL；增敏液最佳配方为：6．4％DMF，0．01mmol／LpH9．0的Tris—HCl缓冲液，0．6mmol／L鲁米诺，2mmol／LH202，1mmol／L4-IMP。优化后方法灵敏度为0．489ng／mL，线性范围为0．16—20．00ng／mL，相关系数为0．9964。该方法能实现对苹果、节瓜、大米、柑橘、荔枝及甘蓝等样品中三唑磷残留的快速、灵敏检测，加标回收率为82．8％-118．4％，与GC—MS法的相关性（r2）为0．957。结果表明，该方法可用于农产品中三唑磷农药的快速筛查。

关键词：化学发光酶免疫分析增敏液三唑磷农产品

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猪背最长肌PFK-2/FBPase-2荧光定量RT-PCR方法的建立

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食品科学 2014年第14期35卷 113-117页

作者：李朋颖汤晓艳王敏康大成颜成英中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所农业部农产品质量安全重点实验室北京100081

为研究糖酵解关键酶果糖-6-磷酸-2激酶/果糖-2,6-二磷酸酯酶(6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2,6-bisphosphatase,PFK-2/FBPase-2)基因转录水平与宰后肉品质间的关系,根据猪PFK-2/FBPase-2 mRNA序列(GenBank登录号:NM_001143721.1)设计一对特异性引物并选择β-actin作为内参基因,构建含有各自序列的重组质粒标准品,通过对反应条件的优化,建立了荧光定量实时-聚合酶链式反应技术检测猪PFK-2/FBPase-2基因转录水平的方法。结果表明,所建立的方法线性关系好,目的基因与内参基因R2均大于0.999;灵敏度高,两基因检出下限均为10拷贝/μL;特异性好,扩增产物均有特异性单一峰。同时根据标准曲线计算可知目的基因与内参基因的扩增效率分别为104.5%和104.0%,扩增效率接近一致,可对PFK-2/FBPase-2转录水平进行相对定量。本研究选取PSE肉产生程度不同的三元杂交猪、杜洛克猪和太湖猪,利用建立的方法对不同品种猪宰后45 min背最长肌中PFK-2/FBPase-2 mRNA转录水平进行测定,结果表明,太湖猪转录水平最高、杜洛克次之、三元杂交猪最低,且3个品种间有显著性差异(P<0.05)。

关键词：猪 PFK-2/FBPase-2 mRNA SYBR Green I 荧光定量实时-聚合酶链式反应

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分散固相萃取/液相色谱-串联质谱法测定花生及土壤中的噻虫啉

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分析测试学报 2014年第4期33卷 479-482页

作者：李敏洁金芬杨莉莉邵华金茂俊王静中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所农业部农产品质量安全重点实验室北京100081

建立了一种检测土壤、花生植株、花生果实及花生壳中噻虫啉的分散固相萃取（DSPE）/液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）快速检测方法.对提取溶剂、不同分散固相吸附剂及其用量进行了考察和优化. 样品经0.1％乙酸乙腈溶液提取后,以50 mg N... 详细信息

建立了一种检测土壤、花生植株、花生果实及花生壳中噻虫啉的分散固相萃取（DSPE）/液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）快速检测方法.对提取溶剂、不同分散固相吸附剂及其用量进行了考察和优化. 样品经0.1％乙酸乙腈溶液提取后,以50 mg N-丙基乙二胺吸附剂（PSA）、50 mg十八烷基键合硅胶（C18）和10 mg石墨化碳黑（GCB）固相萃取填料净化,采用水-甲醇作为流动相进行梯度洗脱,电喷雾正离子（ESI＋）模式电离,质谱采用多离子监测模式（MRM）进行定性分析,基质标准曲线外标法进行定量分析.在0.1～ 50 μg/kg范围内,不同基质中噻虫啉的线性相关系数均大于0.996.在土壤、花生植株、花生果实及花生壳中添加3个不同浓度水平的噻虫啉标准品,得到噻虫啉的回收率为70.6％～ 119％,相对标准偏差不大于16.6％,方法的定量下限为1.0～5.0 μg/kg,能够满足现有国际限量的要求.

关键词：液相色谱-串联质谱噻虫啉土壤花生分散固相萃取

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分散固相萃取-高效液相色谱串联质谱同步检测蔬果中醚菌酯和唑菌酯农药残留

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农药 2014年第9期53卷 670-673页

作者：佘永新江泽军秦迪邵华于海龙王珊珊李腾飞王淼王静金芬金茂俊中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所农业部农产品质量安全重点实验室农业部农产品质量标准研究中心北京100081

[目的]以C18和PSA为吸附剂、酸化乙腈为萃取溶剂,建立同时检测黄瓜、西红柿、苹果等蔬果中唑菌酯等甲氧基丙烯酸酯类农药的高效液相色谱串联质谱分析方法。[方法]选择3种代表性蔬菜和水果为研究对象,样品经乙酸-乙腈(体积比1:99)提取后,... 详细信息

[目的]以C18和PSA为吸附剂、酸化乙腈为萃取溶剂,建立同时检测黄瓜、西红柿、苹果等蔬果中唑菌酯等甲氧基丙烯酸酯类农药的高效液相色谱串联质谱分析方法。[方法]选择3种代表性蔬菜和水果为研究对象,样品经乙酸-乙腈(体积比1:99)提取后,C18和PSA共萃取净化。采用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱,以水-乙腈为流动相等度洗脱分离后,在LC-MS/MS多反应监测模式下正离子扫描进行定性分析,基质标准曲线外标法进行定量分析。[结果]以黄瓜为基质,该方法醚菌酯和唑菌酯的检出限分别为0.001、0.005 mg/kg。在黄瓜等不同基质中添加质量分数为0.005、0.01、0.02 mg/kg水平下,醚菌酯和唑菌酯的平均回收率在70.6%~108.4%之间,相对标准偏差为5.8%~11.5%。在实际样品的应用中,黄瓜中检测到一定含量的醚菌酯。[结论]方法简单、快速、经济并具有较高灵敏度,可用于蔬菜和水果的实际监测。

关键词：醚菌酯唑菌酯高效液相色谱串联质谱法分散固相萃取

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羧基化Fe_3O_4磁性纳米微球的制备及表征

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材料导报 2014年第4期28卷 42-45,53页

作者：杜鹏飞许晓曦金茂俊王静金芬邵华王淼杨丽华东北农业大学食品学院哈尔滨150030 中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所农业部农产品质量安全重点实验室北京100081

采用化学共沉淀法制备纳米Fe3O4,油酸包覆,高锰酸钾氧化,修饰得到羧基功能化的亲水性磁性纳米复合粒子。通过XRD、TEM、傅里叶红外光谱仪等方法对纳米复合粒子的形态、结构及磁性能进行了研究。结果显示:修饰前后的纳米粒子粒径基本无变... 详细信息

采用化学共沉淀法制备纳米Fe3O4,油酸包覆,高锰酸钾氧化,修饰得到羧基功能化的亲水性磁性纳米复合粒子。通过XRD、TEM、傅里叶红外光谱仪等方法对纳米复合粒子的形态、结构及磁性能进行了研究。结果显示:修饰前后的纳米粒子粒径基本无变化,粒径20nm左右。纳米复合粒子的磁性能表现出超顺磁性,矫顽力减小为0,羧基化磁性纳米粒子可在pH=7.4的磷酸缓冲液中形成稳定分散的磁流体。

关键词：化学共沉淀法磁性Fe3O4微球制备表征

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猪β2肾上腺素能受体基因克隆及穿梭表达质粒的构建

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中国农业科学 2014年第18期47卷 3691-3699页

作者：王健王静王淼孔祥雅祝凤彬邵小雪中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所/农业部农产品质量安全重点实验室河北北方学院食品科学系北京勤邦生物技术有限公司

【目的】利用重组β2肾上腺素能受体(β2AR)检测β2激动剂类药物,是弥补传统免疫学检测方法不足、实现该类违禁物多残留的快速检测手段。获得高纯度、高亲和力的重组受体是该技术的核心和难点。本文克隆猪β2 AR并构建其重组穿梭表达质... 详细信息

【目的】利用重组β2肾上腺素能受体(β2AR)检测β2激动剂类药物,是弥补传统免疫学检测方法不足、实现该类违禁物多残留的快速检测手段。获得高纯度、高亲和力的重组受体是该技术的核心和难点。本文克隆猪β2 AR并构建其重组穿梭表达质粒,为筛选最适宜的受体表达系统和表达条件提供基础材料。【方法】克隆猪β2AR并进行序列分析,完成重组穿梭表达质粒构建。首先采集新鲜猪肝组织,提取总RNA,根据GenBank已登录的猪β2AR核苷酸序列(AF000134),设计1对引物并进行RT-PCR扩增。扩增产物切胶回收后与pMD-18T载体于4℃、T4连接酶作用下连接过夜。连接产物转化DH5α感受态细胞,经蓝白斑筛选后提取克隆质粒并对其作PCR鉴定、双酶切鉴定及测序分析。然后对所获得的基因及编码的氨基酸序列进行在线BLAST分析、系统进化树构建和疏水性分析。为了提高受体蛋白的表达量及受体配体间的亲和力,对该克隆基因作N端截短186个核苷酸改造;为使表达蛋白C端携带6×His标签,对克隆基因C端进行去除终止子改造。将改造后的克隆基因分别插入pTriEx-1.1 Hygro穿梭表达载体,连接产物转入NovaBlue感受态细胞,经Amp抗性筛选,挑取单菌落提取质粒并进行鉴定。【结果】经分光光度计检测及琼脂糖凝胶电泳分析,所提猪肝细胞总RNA的纯度、浓度及完整性可满足后续试验要求。RT-PCR产物电泳结果显示,在1 200 bp左右出现1条特异性条带,与预期结果一致。克隆质粒pMD-18T-β2AR经鉴定,证实为阳性重组质粒。测序结果显示,所得猪β2AR基因cDNA序列全长1 257 bp,编码418个氨基酸。该序列已提交至GenBank,登录号为KF023571.1。Compute pI/Mw在线软件预测该蛋白分子质量为46.73 kD。与已发表的猪β2AR(AF000134)相比,基因序列一致性为99.68%,4处发生碱基突变,编码的氨基酸序列一致性为99.28%,3处发生突变,且配体与受体结合位点处的氨基酸均得到正确克隆。在线BLAST分析表明,猪与其它物种的β2AR及氨基酸序列一致性均在80%以上,具有较高的同源性。由系统进化树分析可知,所克隆的猪β2AR与领西猯Pecan tajacu(JN 633666.1)的亲缘性较近,与大仓鼠Tscherskia triton(AY683091.1)和草原田鼠Microtus ochrogaster(XM 005356183.1)的亲缘性较远。氨基酸疏水性分析表明,该受体蛋白N端以疏水性氨基酸为主,C端以亲水性氨基酸为主。经PCR和双酶切鉴定以及测序分析证明,成功构建重组穿梭表达质粒pTriEx-1.1Hygro-β2AR1-418和pTriEx-1.1Hygro-β2AR63-418。【结论】所获克隆基因与已发表猪β2AR高度一致,且活性位点处的氨基酸均得到正确克隆。此外,pTriEx-1.1 Hygro穿梭表达载体适宜用作大肠杆菌、昆虫细胞和哺乳动物细胞表达系统的启动子,是研究目标基因在不同表达系统表达效果的良好材料。本文所构建的穿梭表达质粒pTriEx-1.1Hygro-β2AR1-418和pTriEx-1.1Hygro-β2AR63-418均可用于以上3种表达系统中β2AR蛋白的表达纯化研究。

关键词：猪 β2肾上腺素能受体基因克隆序列分析穿梭表达质粒

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不同饲养方式对北京油鸡肌肉风味物质的影响

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中国畜牧兽医 2014年第9期41卷 89-94页

作者：孙月娇田河山赵桂苹郑麦青王博文杰中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所农业部农产品质量安全重点实验室北京100081 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业部畜禽遗传资源与利用重点开放实验室北京100193

试验旨在研究不同饲养方式对北京油鸡肌肉风味物质的影响。选择300只49日龄的健康母鸡,随机分为2个处理:网上笼养和半舍饲,每个处理5个重复,每个重复30只。试验至91日龄时结束。结果表明,与笼养组相比,半舍饲组肌肉脂肪酸中棕榈酸(C16... 详细信息

试验旨在研究不同饲养方式对北京油鸡肌肉风味物质的影响。选择300只49日龄的健康母鸡,随机分为2个处理:网上笼养和半舍饲,每个处理5个重复,每个重复30只。试验至91日龄时结束。结果表明,与笼养组相比,半舍饲组肌肉脂肪酸中棕榈酸(C16∶0)、棕榈烯酸(C16∶1)、油酸(C18∶1n9c)、亚油酸(C18∶2n9c)、二十二烷酸(C22∶0)、饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸含量均显著提高(P<0.05),顺-10-十五碳烯酸(C15∶1)、硬脂酸(C18∶0)、反亚油酸(C18∶2n9t)和花生四烯酸(C20∶4n6)含量也有升高趋势,但差异均不显著(P>0.05);半舍饲组肌肉肌苷酸含量显著高于笼养组(P<0.05);挥发性风味物质在2种饲养方式下呈现不同的百分比例,半舍饲组的醇类和酮类相对含量较高,而相对于笼养组,醛类相对含量有所降低,这是导致气味呈现差异的原因。因此,不同饲养方式对北京油鸡肌肉风味物质的组成和含量存在影响,半舍饲饲养方式能提高北京油鸡的肌肉品质,改善肉质风味。

关键词：饲养方式北京油鸡风味物质

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鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白提取及多抗制备

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食品工业科技 2014年第22期35卷 176-178,183页

作者：颜成英汤晓艳王敏康大成李朋颖龚艳中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所农业部农产品质量安全重点实验室北京100081 南京农业大学教育部肉品加工与质量控制重点实验室江苏南京210095

鼠伤寒沙门氏菌是沙门氏菌属常见致病菌,其鞭毛蛋白具有抗原性,可诱导免疫系统产生针对该蛋白的抗体。实验采用直接提取法获得鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白,并以该蛋白为抗原免疫小鼠,制备鞭毛蛋白多抗,使用间接ELISA方法测定多抗的效价和特... 详细信息

鼠伤寒沙门氏菌是沙门氏菌属常见致病菌,其鞭毛蛋白具有抗原性,可诱导免疫系统产生针对该蛋白的抗体。实验采用直接提取法获得鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白,并以该蛋白为抗原免疫小鼠,制备鞭毛蛋白多抗,使用间接ELISA方法测定多抗的效价和特异性。SDS-PAGE实验结果表明,蛋白条带单一,分子量大小为57ku,说明提取的鞭毛蛋白是目标蛋白且纯度较高;间接ELISA检测结果表明,制备多抗的效价为1∶102400,除与猪霍乱沙门氏菌发生交叉反应外,与其他6种沙门氏菌和6种常见非沙门氏菌属的致病菌均不发生反应,说明该抗体的效价较高,特异性较好,可以用于与磁珠的偶联,为免疫磁珠的制备打下基础。

关键词：鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白多抗

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