检索结果-内蒙古大学图书馆

中国农业科学 2014年第18期47卷 3691-3699页

作者：王健王静王淼孔祥雅祝凤彬邵小雪中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所/农业部农产品质量安全重点实验室河北北方学院食品科学系北京勤邦生物技术有限公司

【目的】利用重组β2肾上腺素能受体(β2AR)检测β2激动剂类药物,是弥补传统免疫学检测方法不足、实现该类违禁物多残留的快速检测手段。获得高纯度、高亲和力的重组受体是该技术的核心和难点。本文克隆猪β2 AR并构建其重组穿梭表达质... 详细信息

【目的】利用重组β2肾上腺素能受体(β2AR)检测β2激动剂类药物,是弥补传统免疫学检测方法不足、实现该类违禁物多残留的快速检测手段。获得高纯度、高亲和力的重组受体是该技术的核心和难点。本文克隆猪β2 AR并构建其重组穿梭表达质粒,为筛选最适宜的受体表达系统和表达条件提供基础材料。【方法】克隆猪β2AR并进行序列分析,完成重组穿梭表达质粒构建。首先采集新鲜猪肝组织,提取总RNA,根据GenBank已登录的猪β2AR核苷酸序列(AF000134),设计1对引物并进行RT-PCR扩增。扩增产物切胶回收后与pMD-18T载体于4℃、T4连接酶作用下连接过夜。连接产物转化DH5α感受态细胞,经蓝白斑筛选后提取克隆质粒并对其作PCR鉴定、双酶切鉴定及测序分析。然后对所获得的基因及编码的氨基酸序列进行在线BLAST分析、系统进化树构建和疏水性分析。为了提高受体蛋白的表达量及受体配体间的亲和力,对该克隆基因作N端截短186个核苷酸改造;为使表达蛋白C端携带6×His标签,对克隆基因C端进行去除终止子改造。将改造后的克隆基因分别插入pTriEx-1.1 Hygro穿梭表达载体,连接产物转入NovaBlue感受态细胞,经Amp抗性筛选,挑取单菌落提取质粒并进行鉴定。【结果】经分光光度计检测及琼脂糖凝胶电泳分析,所提猪肝细胞总RNA的纯度、浓度及完整性可满足后续试验要求。RT-PCR产物电泳结果显示,在1 200 bp左右出现1条特异性条带,与预期结果一致。克隆质粒pMD-18T-β2AR经鉴定,证实为阳性重组质粒。测序结果显示,所得猪β2AR基因cDNA序列全长1 257 bp,编码418个氨基酸。该序列已提交至GenBank,登录号为KF023571.1。Compute pI/Mw在线软件预测该蛋白分子质量为46.73 kD。与已发表的猪β2AR(AF000134)相比,基因序列一致性为99.68%,4处发生碱基突变,编码的氨基酸序列一致性为99.28%,3处发生突变,且配体与受体结合位点处的氨基酸均得到正确克隆。在线BLAST分析表明,猪与其它物种的β2AR及氨基酸序列一致性均在80%以上,具有较高的同源性。由系统进化树分析可知,所克隆的猪β2AR与领西猯Pecan tajacu(JN 633666.1)的亲缘性较近,与大仓鼠Tscherskia triton(AY683091.1)和草原田鼠Microtus ochrogaster(XM 005356183.1)的亲缘性较远。氨基酸疏水性分析表明,该受体蛋白N端以疏水性氨基酸为主,C端以亲水性氨基酸为主。经PCR和双酶切鉴定以及测序分析证明,成功构建重组穿梭表达质粒pTriEx-1.1Hygro-β2AR1-418和pTriEx-1.1Hygro-β2AR63-418。【结论】所获克隆基因与已发表猪β2AR高度一致,且活性位点处的氨基酸均得到正确克隆。此外,pTriEx-1.1 Hygro穿梭表达载体适宜用作大肠杆菌、昆虫细胞和哺乳动物细胞表达系统的启动子,是研究目标基因在不同表达系统表达效果的良好材料。本文所构建的穿梭表达质粒pTriEx-1.1Hygro-β2AR1-418和pTriEx-1.1Hygro-β2AR63-418均可用于以上3种表达系统中β2AR蛋白的表达纯化研究。

关键词：猪 β2肾上腺素能受体基因克隆序列分析穿梭表达质粒

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我国重点城市水源及水厂出水中乙草胺的残留水平

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环境科学 2014年第5期35卷 1694-1697页

作者：于志勇金芬李红岩安伟杨敏中国科学院生态环境研究中心环境水质学国家重点实验室北京100085 中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所农产品质量与食物安全重点实验室北京100081

利用固相萃取-气质联用法调查了我国36个重点城市145个水源水和209个出厂水中乙草胺的残留水平.水源水中乙草胺的检出率为66.9%,平均浓度为33.9 ng·L-1,水厂处理对乙草胺的去除效果有限.按不同区域划分,东北地区的检出浓度最高;按... 详细信息

利用固相萃取-气质联用法调查了我国36个重点城市145个水源水和209个出厂水中乙草胺的残留水平.水源水中乙草胺的检出率为66.9%,平均浓度为33.9 ng·L-1,水厂处理对乙草胺的去除效果有限.按不同区域划分,东北地区的检出浓度最高;按水源类型划分,湖库水中浓度远高于河流水和地下水;按水系划分,辽河水系和沿海地区的检出率和检出浓度最高.

关键词：乙草胺水源水出厂水残留水平

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不同饲养方式对北京油鸡肌肉风味物质的影响

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中国畜牧兽医 2014年第9期41卷 89-94页

作者：孙月娇田河山赵桂苹郑麦青王博文杰中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所农业部农产品质量安全重点实验室北京100081 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业部畜禽遗传资源与利用重点开放实验室北京100193

试验旨在研究不同饲养方式对北京油鸡肌肉风味物质的影响。选择300只49日龄的健康母鸡,随机分为2个处理:网上笼养和半舍饲,每个处理5个重复,每个重复30只。试验至91日龄时结束。结果表明,与笼养组相比,半舍饲组肌肉脂肪酸中棕榈酸(C16... 详细信息

试验旨在研究不同饲养方式对北京油鸡肌肉风味物质的影响。选择300只49日龄的健康母鸡,随机分为2个处理:网上笼养和半舍饲,每个处理5个重复,每个重复30只。试验至91日龄时结束。结果表明,与笼养组相比,半舍饲组肌肉脂肪酸中棕榈酸(C16∶0)、棕榈烯酸(C16∶1)、油酸(C18∶1n9c)、亚油酸(C18∶2n9c)、二十二烷酸(C22∶0)、饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸含量均显著提高(P<0.05),顺-10-十五碳烯酸(C15∶1)、硬脂酸(C18∶0)、反亚油酸(C18∶2n9t)和花生四烯酸(C20∶4n6)含量也有升高趋势,但差异均不显著(P>0.05);半舍饲组肌肉肌苷酸含量显著高于笼养组(P<0.05);挥发性风味物质在2种饲养方式下呈现不同的百分比例,半舍饲组的醇类和酮类相对含量较高,而相对于笼养组,醛类相对含量有所降低,这是导致气味呈现差异的原因。因此,不同饲养方式对北京油鸡肌肉风味物质的组成和含量存在影响,半舍饲饲养方式能提高北京油鸡的肌肉品质,改善肉质风味。

关键词：饲养方式北京油鸡风味物质

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鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白提取及多抗制备

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食品工业科技 2014年第22期35卷 176-178,183页

作者：颜成英汤晓艳王敏康大成李朋颖龚艳中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所农业部农产品质量安全重点实验室北京100081 南京农业大学教育部肉品加工与质量控制重点实验室江苏南京210095

鼠伤寒沙门氏菌是沙门氏菌属常见致病菌,其鞭毛蛋白具有抗原性,可诱导免疫系统产生针对该蛋白的抗体。实验采用直接提取法获得鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白,并以该蛋白为抗原免疫小鼠,制备鞭毛蛋白多抗,使用间接ELISA方法测定多抗的效价和特... 详细信息

鼠伤寒沙门氏菌是沙门氏菌属常见致病菌,其鞭毛蛋白具有抗原性,可诱导免疫系统产生针对该蛋白的抗体。实验采用直接提取法获得鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白,并以该蛋白为抗原免疫小鼠,制备鞭毛蛋白多抗,使用间接ELISA方法测定多抗的效价和特异性。SDS-PAGE实验结果表明,蛋白条带单一,分子量大小为57ku,说明提取的鞭毛蛋白是目标蛋白且纯度较高;间接ELISA检测结果表明,制备多抗的效价为1∶102400,除与猪霍乱沙门氏菌发生交叉反应外,与其他6种沙门氏菌和6种常见非沙门氏菌属的致病菌均不发生反应,说明该抗体的效价较高,特异性较好,可以用于与磁珠的偶联,为免疫磁珠的制备打下基础。

关键词：鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白多抗

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肠炎沙门氏菌EMA-PCR检测方法的建立

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食品科学 2014年第6期35卷 90-93页

作者：颜成英汤晓艳王敏康大成李朋颖郑锌南京农业大学教育部肉品加工与质量控制重点实验室江苏南京210095 中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所农业部农产品质量安全重点实验室北京100081

将荧光染料叠氮溴化乙锭(ethidium monoazide,EMA)与聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测技术相结合,用于肠炎沙门氏菌活菌的检测。实验参数优化结果表明,当EMA终质量浓度50μg/mL、曝光时间10 min时,可以抑制约107 CFU... 详细信息

将荧光染料叠氮溴化乙锭(ethidium monoazide,EMA)与聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测技术相结合,用于肠炎沙门氏菌活菌的检测。实验参数优化结果表明,当EMA终质量浓度50μg/mL、曝光时间10 min时,可以抑制约107 CFU/mL肠炎沙门氏菌死菌DNA的扩增;活菌灵敏度检测结果显示,EMA-PCR方法检测限与单一PCR方法一样均为27.5 CFU/mL,说明EMA处理既不会影响活菌DNA的扩增也不会影响PCR方法的灵敏度。利用EMA-PCR方法检测死活混合菌液时发现,添加EMA的实验组DNA条带亮度会随着活菌比例的降低而变暗,且当样品中全是死菌时,没有目标条带出现;而不添加EMA的对照组DNA条带亮度没有变化,当样品中全是死菌时,目标条带依然清晰可见。说明添加EMA可以达到区分死活菌的目的,EMA-PCR方法只检测样品中的活菌,避免了死菌DNA造成假阳性的可能性。

关键词：叠氮溴乙锭聚合酶链式反应肠炎沙门氏菌

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GC/MS测定蒸煮包装袋中DEHP对玉米的迁移量

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包装工程 2014年第11期35卷 1-5页

作者：司腾飞于江许彦阳谢利钱永忠西安理工大学印刷包装工程学院西安710048 中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所农业部农产品质量安全重点实验室北京100081

目的建立超声波辅助提取-气相色谱／质谱法，测定塑料食品包装材料中邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯（DEHP）对玉米的迁移量。方法通过改变样品前处理条件，分析正己烷、甲醇和二氯甲烷等提取溶剂，以及超声提取时间、提取温度和净化方... 详细信息

目的建立超声波辅助提取-气相色谱／质谱法，测定塑料食品包装材料中邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯（DEHP）对玉米的迁移量。方法通过改变样品前处理条件，分析正己烷、甲醇和二氯甲烷等提取溶剂，以及超声提取时间、提取温度和净化方法等因素对提取DEHP的影响，并对实验结果进行优化。结果选用正己烷作为提取溶剂，当提取温度为38℃，提取时间为30min时，可以较好地提取玉米中的DEHP，加标回收率为88．53％-103．28％，检出限为2．54×10mg／kg。结论该方法缩短了前处理时间，精密度较高，为检测玉米中DEHP的含量提供了重要技术手段。

关键词：邻苯二甲酸-2-(2-乙基己基)酯气相色谱质谱法超声波辅助提取蒸煮包装袋迁移

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农产品质量安全网络舆情风险隐患研究

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农产品质量与安全 2014年第4期 56-61页

作者：李祥洲廉亚丽戚亚梅李艳郭林宇中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所农业部农产品质量安全重点实验室北京100081

本文以2012-2013年的实时舆情监测数据为基础,以媒体报道(曝光)的农产品质量安全问题事件发生情况为确定指标,用舆情Excel表初步分析研究了我国农产品质量安全网络舆情风险隐患发生发展的基本情况,获得了农产品质量安全网络舆情风险的... 详细信息

本文以2012-2013年的实时舆情监测数据为基础,以媒体报道(曝光)的农产品质量安全问题事件发生情况为确定指标,用舆情Excel表初步分析研究了我国农产品质量安全网络舆情风险隐患发生发展的基本情况,获得了农产品质量安全网络舆情风险的时节特征、品种差异、重点环节、主要成因、热点地区及传媒类型的一些规律性认知。

关键词：农产品质量安全网络舆情舆情监测舆情风险

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2013年农产品质量安全网络舆情发展趋势监测与分析

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农产品质量与安全 2014年第1期 56-61页

作者：李祥洲钱永忠廉亚丽魏静戚亚梅李艳郭林宇毛雪飞中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所农业部农产品质量安全重点实验室北京100081

本文概述了2013年农产品质量安全网络舆情的热点,分析研究了我国农产品质量安全网络舆情的发展趋势。结果表明,2013年,在食用农产品生产加工过程中,制假售假及违法违规加工方面的舆情占据了质量安全问题事件类舆情数量的首位,其次是使... 详细信息

本文概述了2013年农产品质量安全网络舆情的热点,分析研究了我国农产品质量安全网络舆情的发展趋势。结果表明,2013年,在食用农产品生产加工过程中,制假售假及违法违规加工方面的舆情占据了质量安全问题事件类舆情数量的首位,其次是使用违禁农兽渔药及其残留问题,耕地重金属污染及产地环境安全、动植物疫病及病死畜禽无害化处置也是网民关注的热点;2013年农产品质量安全舆情发生的地区差异仍十分明显,中东部涉及农产品质量安全的问题事件舆情有减少的趋势,问题舆情逐步向西部扩散;新兴网络媒体是农产品质量安全舆情信息的主要来源,报纸等传统媒体的传播作用仍不容忽视。

关键词：农产品质量安全网络舆情舆情监测发展趋势

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化学发光免疫分析方法在食品安全检测中的研究进展

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食品安全质量检测学报 2014年第3期5卷 840-845页

作者：金茂俊王静杨丽华杜鹏飞邵华金芬王珊珊佘永新中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所农业部农产品质量安全重点实验室北京100081

化学发光免疫分析方法作为一项具有高特异性和高灵敏度的免疫分析方法,经过近几十年的发展,目前已在食品安全检测领域得到了良好的应用。本文根据不同化学发光免疫分析方法所选择标记物的不同,将化学发光免疫分析方法分为化学发光免疫... 详细信息

化学发光免疫分析方法作为一项具有高特异性和高灵敏度的免疫分析方法,经过近几十年的发展,目前已在食品安全检测领域得到了良好的应用。本文根据不同化学发光免疫分析方法所选择标记物的不同,将化学发光免疫分析方法分为化学发光免疫分析、化学发光酶免疫分析和电化学发光免疫分析三个类别,并对各方法常用的化学发光标记物及分析方法原理进行介绍。同时,综述了化学发光免疫分析方法在农兽药残留、生物毒素、违禁添加物及微生物检测方面的应用进展情况。随着化学发光免疫分析方法在新型化学发光标记物及化学发光增敏体系方面取得进一步的研究进展,其在食品安全检测领域必将得到更为广泛的应用。

关键词：化学发光免疫分析食品安全研究进展

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β-受体激动剂及其检测技术研究

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农产品质量与安全 2014年第1期 44-52页

作者：王培龙中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所农业部农产品质量安全重点实验室北京100081

β-受体激动剂是一类具有肾上腺素功能的苯乙醇胺类人工合成化合物,因其能对养殖动物体内营养再分配起到促进作用,改善养殖动物日增重和饲料转化率,因此常被非法用于动物养殖过程。本文介绍了β-受体激动剂的性质、代谢、毒理作用、危... 详细信息

β-受体激动剂是一类具有肾上腺素功能的苯乙醇胺类人工合成化合物,因其能对养殖动物体内营养再分配起到促进作用,改善养殖动物日增重和饲料转化率,因此常被非法用于动物养殖过程。本文介绍了β-受体激动剂的性质、代谢、毒理作用、危害及相关法规,以及不同样品基质中β-受体激动剂的检测新技术、新方法及样品前处理技术的最新进展。

关键词： β-受体激动剂瘦肉精检测技术进展

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