检索结果-内蒙古大学图书馆

促性腺激素释放激素受体(GnRHR)基因多态性及其与山羊产羔数的相关性分析

畜牧兽医学报 2012年第1期43卷 22-28页

作者：黄杨河王凭青杨力储明星张宝云邓腊梅谭颖樊奇重庆大学生物工程学院重庆400030 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业部畜禽遗传资源与利用重点开放实验室北京100193

本研究采用候选基因法对与繁殖性能有关的遗传标记进行筛选,旨在为山羊高产仔数的标记辅助选择提供确切的遗传依据。参考牛的促性腺激素释放激素受体(Gonadotropin releasing hormone receptor,GnRHR)基因序列设计4对引物,采用聚合酶链... 详细信息

本研究采用候选基因法对与繁殖性能有关的遗传标记进行筛选,旨在为山羊高产仔数的标记辅助选择提供确切的遗传依据。参考牛的促性腺激素释放激素受体(Gonadotropin releasing hormone receptor,GnRHR)基因序列设计4对引物,采用聚合酶链式反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术检测GnRHR基因在波尔山羊以及我国西南地区9个地方山羊品种中的单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNP),同时在川东白山羊、古蔺马羊和贵州白山羊3个群体中研究该基因多态性与山羊产仔数之间的相关性。结果显示,4对引物中只有引物P1扩增片段检测出多态性。对于P1的扩增片段,在不同的山羊品种中检测到AA、GG和AG 3种基因型,测序分析表明GG与AA型相比有一处单碱基突变(154G→A)。AA基因型个体在3个群体中产羔数最小二乘均值都显著高于GG和AG基因型个体(P<0.05),GA基因型个体在古蔺马羊中的产羔数显著高于GG型个体(P<0.05),而在其它2个品种中差异不显著(P>0.05)。本研究结果初步表明山羊GnRHR基因的突变与其繁殖性能有关,可能是影响山羊繁殖率的一个因素。

关键词：山羊繁殖力 GnRHR基因 PCR—SSCP

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羊肉产品中若干动物源性成分的七重PCR检测技术应用研究

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中国畜牧兽医 2010年第9期37卷 85-90页

作者：冯海永韩建林中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业部家养动物遗传资源与种质创新重点开放实验室北京100193 中国农业科学院-国际家畜研究所畜禽牧草遗传资源联合实验室中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193

试验建立了猪、牛、绵羊、山羊、鸡、马和牦牛种属鉴别的七重PCR体系,分析了牛、牦牛、山羊源性成分七重PCR检测的灵敏度,检测了10种市售羊肉产品中的动物源性成分。结果表明,采用常规的琼脂糖凝胶电泳可以区分157～517 bp的片段及相互... 详细信息

试验建立了猪、牛、绵羊、山羊、鸡、马和牦牛种属鉴别的七重PCR体系,分析了牛、牦牛、山羊源性成分七重PCR检测的灵敏度,检测了10种市售羊肉产品中的动物源性成分。结果表明,采用常规的琼脂糖凝胶电泳可以区分157～517 bp的片段及相互差异在41 bp以上的多重PCR扩增产物,从而实现对这7个物种的快速及准确鉴别,其中对3个物种(牛、牦牛、山羊)DNA的检测灵敏度在2.5 ng左右;所检测的10种羊肉产品中有2种并不是包装上所宣称的羊肉,而是混杂有牛肉或完全用牛肉替代。

关键词：七重PCR 羊肉产品动物源性成分种属鉴别

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猪MSTN前肽定点诱变载体在C2C12细胞中的表达

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畜牧兽医学报 2009年第11期40卷 1588-1593页

作者：张晓玮崔文涛伍晓雄杨述林牟玉莲唐中林李奎中国农业科学院北京畜牧兽医研究所畜禽遗传资源与利用农业部重点开放实验室北京100193 华中农业大学动物医学院武汉430070

本研究旨在克隆通城猪含有第1个内含子的MSTN前肽基因,构建真核定点诱变载体,并通过转染C2C12细胞验证载体表达的有效性。以通城猪血液样品中提取的DNA作为模板,PCR扩增得到含第1个内含子的MSTN前肽基因,扩增产物进行克隆、测序。再将... 详细信息

本研究旨在克隆通城猪含有第1个内含子的MSTN前肽基因,构建真核定点诱变载体,并通过转染C2C12细胞验证载体表达的有效性。以通城猪血液样品中提取的DNA作为模板,PCR扩增得到含第1个内含子的MSTN前肽基因,扩增产物进行克隆、测序。再将目的片段定向克隆到去除了EGFP基因的pEGFP-N1表达载体上。通过定点诱变方法将前肽编码序列第76位天冬氨酸突变为丙氨酸,获得定点诱变载体pEGFP(-)-N1-ProMstnD76A,并瞬时转染C2C12细胞。转染48 h后,通过RT-PCR和Real-time PCR方法检测目的基因的表达情况。结果表明:本研究成功克隆了通城猪含第1个内含子的MSTN前肽基因,并对该基因进行定点诱变修饰,构建了真核表达载体,转染后其前体mRNA能在C2C12细胞中进行正确剪接,目的基因mRNA表达水平较高。这为猪MSTN前肽基因在体内表达的研究奠定基础,并为制备转基因猪提供有用的分子材料。

关键词：猪 MSTN前肽基因定点诱变真核表达

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利用不同方法从深加工牦牛肉产品中提取基因组DNA效果的比较

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生物技术通报 2010年第10期26卷 162-167页

作者：何建文韩建林罗玉柱甘肃农业大学动物科学与技术学院兰州730070 中国农业科学院国际家畜研究所畜禽牧草遗传资源联合实验室中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业部畜禽遗传资源与利用重点开放实验室北京100193

为了从深加工牦牛肉产品中获得片段较大、数量较多的基因组DNA,以用于分子追溯的检测,尝试并系统地比较了异硫氰酸胍法、酚-氯仿抽提法和试剂盒提取法的提取效果。通过定量分析、凝胶电泳和PCR片段大小梯度扩增等手段,对利用3种方法提... 详细信息

为了从深加工牦牛肉产品中获得片段较大、数量较多的基因组DNA,以用于分子追溯的检测,尝试并系统地比较了异硫氰酸胍法、酚-氯仿抽提法和试剂盒提取法的提取效果。通过定量分析、凝胶电泳和PCR片段大小梯度扩增等手段,对利用3种方法提取的基因组DNA的数量和质量进行了比较。结果显示,利用酚-氯仿抽提法提取的基因组DNA质量不佳,异硫氰酸胍法和试剂盒提取法的提取效果相当,PCR可以扩增出730 bp左右的核外基因细胞色素b,而核内基因只能扩增出300bp左右的核基因DNA片段(内乳铁蛋白基因,271 bp;BoLA-DRB3基因,302 bp)。综合考虑提取时间、费用、数量和质量等各方面的因素,认为异硫氰酸胍法操作简便、快速、廉价、有效,是较好的从动物深加工肉产品中提取基因组DNA的方法。

关键词：异硫氰酸胍法酚-氯仿抽提法试剂盒方法深加工牦牛肉产品基因组DNA

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猪TIMP-2基因克隆、序列特征和表达分析

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畜牧兽医学报 2009年第12期40卷 1727-1734页

作者：黄宏刚肖邦任红艳唐中林杨述林崔文涛牟玉莲储明星李奎中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业部畜禽遗传资源与利用重点开放实验室北京100193 华中农业大学农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室武汉430070

本研究分析了五指山试验用小型猪TIMP-2基因的分子特性和可能的生物学功能。将人TIM-P2 mR-NA全长序列在猪ESTs数据库中检索获得同源性较高的ESTs,用电子克隆结合RT-PCR方法克隆获得包含完整CDS区的猪TIMP-2基因cDNA序列,应用生物信息... 详细信息

本研究分析了五指山试验用小型猪TIMP-2基因的分子特性和可能的生物学功能。将人TIM-P2 mR-NA全长序列在猪ESTs数据库中检索获得同源性较高的ESTs,用电子克隆结合RT-PCR方法克隆获得包含完整CDS区的猪TIMP-2基因cDNA序列,应用生物信息学方法分析了其核苷酸序列及其编码蛋白质分子结构特性,应用RT-PCR研究该基因在猪不同组织和发育时期的特异表达情况。结果,猪TIM-P2 cDNA序列全长790 bp,包括663 bp的完整开放阅读框,编码221个氨基酸。多序列比对和系统进化分析表明,该基因编码蛋白质与人(97%)、大鼠(97%)、小鼠(97%)等物种TIMP-2蛋白质具有较高的同源性。蛋白质序列预测分析发现,猪TIMP-2氨基酸序列理论等电点(pI)为7.65,相对分子质量(MW)为24.5 ku,它包括27AA的前导序列和194AA的成熟肽段,其前导序列比其它物种多1个亮氨酸(Leu)。结构功能预测发现其具有1个在种间高度保守的NTR_TIMP结构域和N端VIRAK保守序列,序列中存在的12个半胱氨酸(Cys)可以形成6对二硫键结构。表达谱分析表明TIMP-2基因在猪的多个组织和不同发育时期的表达量存在较大差异,在睾丸、垂体、胃、大肠、卵巢、子宫和90 d胚胎骨骼肌中高表达;而在心脏、小肠、脑、肝脏、成年猪骨骼肌中表达量极低;在肾脏、胸腺、脾、甲状腺3、3 d胚胎中中度表达。结果表明该基因在发生组织发育和重构活动相对活跃的组织器官和时期表达水平较高,亦符合其固有生物学功能。

关键词：猪 TIMP-2 电子克隆序列特征表达谱

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睡美人转座子真核表达载体的构建及在猪胎儿成纤维细胞系中的表达验证

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农业生物技术学报 2013年第6期21卷 684-689页

作者：周家庆王升智宋成义高波李奎钱丽丽崔文涛牟玉莲李碧春扬州大学动物科学与技术学院/国家动物遗传育种与繁殖重点(培育)学科中国农业科学院北京畜牧兽医研究所/农业部畜禽遗传资源与利用重点开放实验室

睡美人(sleeping beauty,SB)是Tc1/mariner转座子超家族的一员,为探索睡美人转座子与不同的转座酶搭配使用及与同种转座酶不同比例搭配使用时的转座效率,本实验构建了SB真核表达重组载体PT2-SV40-EGFP,通过荧光显微镜和实时荧光定量PCR(... 详细信息

睡美人(sleeping beauty,SB)是Tc1/mariner转座子超家族的一员,为探索睡美人转座子与不同的转座酶搭配使用及与同种转座酶不同比例搭配使用时的转座效率,本实验构建了SB真核表达重组载体PT2-SV40-EGFP,通过荧光显微镜和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测进行了猪胎儿成纤维细胞系(PEFs)转染条件优化研究。研究结果表明,不同转座酶与转座子按10∶1混合后细胞转染效率相似,但报告基因表达水平有较大差异,其中SB100X转座酶与转座子混合后细胞的表达水平最高;转座子PT2-SV40-EGFP质粒和SB100X转座酶质粒按不同比例混合转染细胞研究表明,细胞转染效率相似,但表达水平存在显著差异,其中1∶1组最高,约是5∶1组和10∶1组的50倍。本实验优化了睡美人转座子的转座条件为制备转基因动物深入研究提供参考。

关键词：睡美人(sleeping beauty,SB) 真核表达载体转基因动物

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支持细胞调控精原干细胞增殖、分化和凋亡的研究进展

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畜牧兽医学报 2016年第2期47卷 225-231页

作者：梁洺源朱化彬陈晓丽郝海生赵学明秦彤王栋吉林农业大学动物科学技术学院长春130118 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业部畜禽遗传资源与利用重点开放实验室北京100193

精原干细胞(Spermatogonial stem cells,SSCs)在支持细胞(Sertoli cells,SCs)调控下有序增殖、分化、凋亡,维持雄性动物正常的精子发生。本文主要对SCs与SSCs的生理结构关系及SCs通过GDNF、FGF2、RA、BMP4、SCF、FasL和SR-BI对SSCs增殖、分化与凋亡的调控进行综述。为精子发生机理的深入研究提供重要参考,将对提高雄性动物繁殖效率具有重要意义,还为探索男性不育疾病的临床治疗方法提供有价值的参考。

关键词：精原干细胞支持细胞增殖分化凋亡

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猪MSTN基因的多态性和生长性状关联分析

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畜牧兽医学报 2013年第7期44卷 1063-1069页

作者：刘晓琴马喜山唐中林周荣杨述林敖红牟玉莲李奎中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业部畜禽遗传资源与利用重点开放实验室北京100193 湖南农业大学动物科学技术学院长沙410128

基于肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)基因结构及功能研究报道,将其作为猪生长发育性状的候选基因进行多态性检测与关联分析,旨在为猪分子遗传标记提供依据。本研究以长白猪、大白猪、杜长大、通城猪、莱芜猪、五指山猪6个不同猪种基因组... 详细信息

基于肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)基因结构及功能研究报道,将其作为猪生长发育性状的候选基因进行多态性检测与关联分析,旨在为猪分子遗传标记提供依据。本研究以长白猪、大白猪、杜长大、通城猪、莱芜猪、五指山猪6个不同猪种基因组DNA为模板,通过克隆测序鉴定MSTN基因启动子区、第1内含子区、第2内含子区、第1外显子区、第2外显子区及3′UTR区SNPs位点;以长白猪和杜长大2个试验猪群为材料,利用基质辅助激光解吸飞行时间质谱法对MSTN基因进行SNP分型。建立最小二乘法分析模型,利用SAS软件分析数据。结果表明:在6个猪种76个个体中,共筛选出16个SNPs,其中有4个位于启动子区,5个位于第1内含子,7个位于第2内含子,在外显子1、外显子2和3′UTR区域并未检测到SNP位点。对MSTN基因的4个SNPs位点(P1、P3、P4、P5;其中P1、P3、P4位于启动子区,P5位于内含子1区)的生长性状关联分析显示,P4和P5 2个位点的多态性与猪生长性状显著相关(P<0.05)。P4和P5 2个位点具有作为分子标记辅助猪育种的潜在应用价值。

关键词：猪 MSTN 多态性生长性状关联分析

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小鼠TLE4基因启动子克隆及分析

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畜牧兽医学报 2010年第3期41卷 274-278页

作者：赵黎黎牟玉莲崔文涛杨述林唐中林李勇赵为民刘娣李奎东北农业大学动物科学技术学院哈尔滨150030 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所畜禽遗传资源与利用农业部重点开放实验室北京100193

本研究旨在初步对小鼠TLE4基因的转录调控机制进行探讨。利用PCR方法扩增TLE4基因5′上游启动区2 849 bp(-2 521 bp^+327 bp)的片段,然后通过步移缺失获得了7段长度不等的启动子片段并分别克隆到荧光素酶(LUC)报告基因表达质粒中。通过... 详细信息

本研究旨在初步对小鼠TLE4基因的转录调控机制进行探讨。利用PCR方法扩增TLE4基因5′上游启动区2 849 bp(-2 521 bp^+327 bp)的片段,然后通过步移缺失获得了7段长度不等的启动子片段并分别克隆到荧光素酶(LUC)报告基因表达质粒中。通过双荧光素酶报告活性分析检测TLE4基因启动子区不同长度片段在小鼠畸胎瘤细胞(F9)及小鼠胚胎干细胞(ES)中瞬时转染后的活性。2种细胞的检测结果显示,在TLE4基因启动子区(-2 521 bp^-2 137 bp)存在负性调控元件,而在启动区(-2 137 bp^-1 794 bp)活性最强。对TLE4基因启动区(-2 137 bp^-1 794 bp)进一步缺失分析发现在该基因启动区(-2 027 bp^-1 927 bp)活性较强,分析预测该序列含有一个功能性的(HSF)的结合位点。结果推测HSF对TLE4基因的表达调控及功能行使具有重要作用。

关键词： TLE4基因启动子 HSF 调控序列

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利用微卫星DNA标记分析巴布亚新几内亚三个地方鸡群体的遗传多样性及亲缘关系

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畜牧兽医学报 2010年第7期41卷 797-803页

作者：曾盛诚 Gariba Danbaro William Nano Sammy Doka Tau Gerega Olivier Hanotte 韩建林中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业部畜禽遗传资源与利用重点开放实验室北京100193 中国农业科学院国际家畜研究所畜禽牧草遗传资源联合实验室北京100193 巴布亚新几内亚理工大学农学院国际家畜研究所肯尼亚内罗毕00100

为了解巴布亚新几内亚地方鸡群体的遗传多样性和亲缘关系,本研究利用20个微卫星DNA遗传标记,对3个群体、96个个体的基因型进行了测定,估算了群体内的杂合度和近交系数(FIS)以及群体间的遗传分化系数(FST)等多样性参数;根据Nei氏标准遗... 详细信息

为了解巴布亚新几内亚地方鸡群体的遗传多样性和亲缘关系,本研究利用20个微卫星DNA遗传标记,对3个群体、96个个体的基因型进行了测定,估算了群体内的杂合度和近交系数(FIS)以及群体间的遗传分化系数(FST)等多样性参数;根据Nei氏标准遗传距离,构建群体水平的NJ树和个体水平上的无根UPGMA树。结果表明,3个群体内的平均期望(基因)杂合度介于0.665 9至0.680 6,平均FIS介于0.020至0.286,总群体水平上的遗传变异仅占5.5%;3个群体相互之间的遗传分化均达到显著水平,在个体水平的无根UPGMA树上,来源同一群体的个体会优先聚为一类。这说明巴布亚新几内亚的3个地方鸡群体的遗传多样性比较丰富,群体间的遗传分化显著,应该分别加以保护和利用。

关键词：巴布亚新几内亚地方鸡微卫星遗传多样性

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