检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧兽医学报 2025年第4期56卷 1731-1743页

作者：赵文轩高雪余大为高晨李俊雅中国农业科学院北京畜牧兽医研究所畜禽生物育种全国重点实验室北京100193

旨在建立稳定传代并符合多能性标准的蒙山牛诱导多能干细胞。本研究首先用酶消化法建立了成年蒙山牛公牛耳缘成纤维细胞,并进行细胞存活率、生长曲线测定。同时采用了基于DOX调控的非病毒重编程外源基因表达系统,使用在3i/LIF和NBFR培... 详细信息

旨在建立稳定传代并符合多能性标准的蒙山牛诱导多能干细胞。本研究首先用酶消化法建立了成年蒙山牛公牛耳缘成纤维细胞,并进行细胞存活率、生长曲线测定。同时采用了基于DOX调控的非病毒重编程外源基因表达系统,使用在3i/LIF和NBFR培养体系诱导蒙山牛成纤维细胞重编程,并对获得的蒙山牛诱导多能干细胞进行多能性检测。结果表明,本研究获得的蒙山牛耳缘成纤维细胞增殖正常、状态良好,蒙山牛诱导多能干细胞克隆形态呈现边界圆滑的圆顶型、碱性磷酸酶表达呈阳性、标志多能性基因表达显著高于成纤维细胞(P<0.001),OCT4、SOX2、NANOG多能性蛋白的免疫荧光染色呈阳性,展现出与之前研究中报道的牛胚胎干细胞和诱导多能干细胞相似的多能性状态。这一成果为牛诱导多能干细胞的研究和应用提供了新的方向,并有助于进一步探索其在农业生物技术领域中的潜力。为体外配子生产进而复原濒危、灭绝的牛地方品种提供了材料基础。

关键词：蒙山牛多能性体细胞重编程诱导多能干细胞

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mi R-535靶向GAB2基因通过激活PI3K/AKT信号通路促进山羊颗粒细胞增殖

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中国农业科学 2023年第23期56卷 4757-4771页

作者：王鹏刘子嶷刘玉芳储明星中国农业科学院北京畜牧兽医研究所/畜禽生物育种全国重点实验室

【背景】MicroRNA(miRNA)是长度为18—25 nt的短RNA分子，在哺乳动物卵巢颗粒细胞调控卵泡发育过程中起着重要作用。团队前期对云上黑山羊高、低产羔数个体卵巢转录组测序结果显示，miR-535能够影响山羊产羔数，但具体调控机制尚不清楚... 详细信息

【背景】MicroRNA(miRNA)是长度为18—25 nt的短RNA分子，在哺乳动物卵巢颗粒细胞调控卵泡发育过程中起着重要作用。团队前期对云上黑山羊高、低产羔数个体卵巢转录组测序结果显示，miR-535能够影响山羊产羔数，但具体调控机制尚不清楚。【目的】通过研究miR-535靶向GAB2(GRB2 associated binding protein 2)及其相关信号通路PI3K/AKT对山羊颗粒细胞增殖的影响，进一步探讨其分子生物学调控机制。【方法】在本研究中，选择具有两胎以上产羔记录的高、低产云上黑山羊各3只，同期发情处理后采集卵泡期卵巢组织，收集原代颗粒细胞。使用荧光定量PCR(reverse transcription-quantitative PCR,RT-qPCR)检测miR-535和GAB2在云上黑山羊高、低产卵巢组织中的表达量。构建GAB2的过表达/干扰载体，使用RT-qPCR、Western blot、免疫荧光、CCK8、EdU和细胞凋亡检测候选基因GAB2对山羊卵巢颗粒细胞增殖的影响。使用miRDB和miRanda软件预测miR-535和GAB2的靶向关系，构建GAB2的野生型和突变型载体，利用双荧光素酶活性检验检测miR-535和GAB2的靶向关系。构建过表达/干扰miR-535载体，探究其颗粒细胞增殖及下游基因功能的影响。【结果】RT-qPCR结果显示，GAB2在高产云上黑山羊卵巢组织中的表达量显著低于低产个体，miR-535的表达则相反（P<0.05）；随后，RT-qPCR和Western blot结果表明，在颗粒细胞中过表达GAB2后，CCND2、CDK4和BCL2的表达量显著升高（P<0.05）,BAX的表达量显著降低（P<0.05），抑制其表达则与之相反；EdU和CCK8检测显示，GAB2过表达后显著促进颗粒细胞增殖（P<0.05），抑制其表达后则相反；双荧光素酶报告试验表明，miR-535抑制了GAB2基因3’UTR区域的双荧光素酶活性。RT-qPCR和Western blot结果显示，在颗粒细胞中过表达miR-535后，GAB2、CCND2、CDK4和BCL2的表达量显著降低（P<0.05）,BAX的表达量显著升高（P<0.05），抑制其表达后则与之相反；EdU和CCK8检测显示，miR-535过表达后抑制颗粒细胞增殖，抑制其表达后则相反；细胞凋亡试验表明，miR-535过表达后促进颗粒细胞增殖，抑制其表达后则相反。在颗粒细胞中抑制miR-535后，发现PI3K/AKT信号通路标志因子AKT1的表达水平显著升高（P<0.05）。【结论】miR-535通过抑制GAB2的表达，抑制了山羊颗粒细胞的增殖，为进一步探究miR-535调控山羊颗粒细胞的生物学功能提供了理论依据。

关键词：山羊产羔数卵巢颗粒细胞增殖 GAB2基因 miR-535 P13K/AKT信号通路

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绵羊PRSS12基因多态性及其与生长性状的关联分析

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农业生物技术学报 2024年第7期32卷 1587-1595页

作者：熊金珂鲍晶晶毕亚珍胡文萍张莉中国农业科学院北京畜牧兽医研究所/畜禽生物育种全国重点实验室

绵羊(Ovis aries)生长性状相关分子标记的鉴定对于提高绵羊产业的经济效益具有重要意义。丝氨酸蛋白酶12 (serine protease 12, PRSS12)，又称为神经胰蛋白酶，在中枢神经系统特异性表达，与多种神经功能相关。为探究PRSS12基因的多态... 详细信息

绵羊(Ovis aries)生长性状相关分子标记的鉴定对于提高绵羊产业的经济效益具有重要意义。丝氨酸蛋白酶12 (serine protease 12, PRSS12)，又称为神经胰蛋白酶，在中枢神经系统特异性表达，与多种神经功能相关。为探究PRSS12基因的多态性及其与湖羊和乌珠穆沁羊生长性状之间的相关性，本研究采用基因芯片技术对1 008只湖羊和336只乌珠穆沁羊进行基因分型，并与生长性状进行关联分析，以鉴定绵羊生长发育相关分子标记。基因分型结果表明，在乌珠穆沁羊群体中检测到2个SNP位点，其中rs402399470G>A位点呈现低度多态，rs418440631G>A位点呈现中度多态；在湖羊群体中仅检测到1个SNP位点，即rs418440631G>A，表现为低度多态。使用一般线性模型将乌珠穆沁羊和湖羊的基因型和生长性状数据进行相关性分析，结果表明，rs402399470G>A位点与乌珠穆沁羊4月龄体重和6月龄胸宽显著相关(P<0.05);rs418440631G>A位点与乌珠穆沁羊4月龄胸围和管围以及6月龄胸围显著相关(P<0.05)，与湖羊初生重和5月龄胸围极显著相关(P<0.01)，与3月龄管围和5月龄体长和胸宽显著相关(P<0.05)。使用R语言corrplot包计算乌珠穆沁羊和湖羊体重与体尺的相关系数，结果表明湖羊和乌珠穆沁羊的体重与体尺呈现显著正相关(P<0.05)，体重与胸围的相关系数最高。综上所述，PRSS12基因的rs402399470G>A和rs418440631G>A位点可作为绵羊生长性状的潜在分子遗传标记。本研究为肉羊育种和选育提供了参考依据。

关键词：丝氨酸蛋白酶12基因(PRSS12) 湖羊乌珠穆沁羊生长发育性状关联分析

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CRISPR-Cas基因编辑技术在羊生产应用中研究进展

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遗传 2024年第9期46卷 690-700页

作者：潘东霞王辉熊本海唐湘方中国农业科学院北京畜牧兽医研究所畜禽营养与饲养全国重点实验室北京100193

基因编辑是一种能够进行基因组修饰的基因工程技术。近年来,随着分子生物学技术的飞速发展,成簇规则间隔短回文重复序列相关蛋白系统(clustered regularly interspaced short palindromic repeats associated protein,CRISPR-Cas)作为... 详细信息

基因编辑是一种能够进行基因组修饰的基因工程技术。近年来,随着分子生物学技术的飞速发展,成簇规则间隔短回文重复序列相关蛋白系统(clustered regularly interspaced short palindromic repeats associated protein,CRISPR-Cas)作为新发展起来的一种强大的基因编辑工具,因具有高效性、精确性和灵活性而被广泛应用。CRISPR-Cas系统通过在特定基因组位点引入插入、缺失或单碱基替换等方式实现位点的特异性修饰,在畜牧生产的诸多领域做出了重大贡献。在羊生产应用方面,通过建立改善生产经济性状和抗病性的绵山羊动物模型,可以对关键基因的功能进行研究,从而加速性状的改良。本文主要综述了CRISPR-Cas系统的机制与功能及其在羊繁殖性状、肉用性状、产毛性状、泌乳性状和抗病性状生产应用与创建羊动物模型方面的研究进展。

关键词： CRISPR-Cas系统基因编辑技术绵羊山羊生产研究

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基于DNAzyme的荧光生物传感器快速检测金黄色葡萄球菌研究

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华南农业大学学报 2024年第5期45卷 764-771页

作者：木卡地斯·米吉提王辉潘东霞申瑶杨亮中国农业科学院北京畜牧兽医研究所/畜禽营养与饲养全国重点实验室北京100193

【目的】为解决传统方法检测金黄色葡萄球菌耗时长、操作复杂等问题,研发一种基于脱氧核酶(DNAzyme)的荧光生物传感器,实现金黄色葡萄球菌的快速检测。【方法】将特异性DNAzyme和互补链Subatrate相结合制成荧光生物传感器,并对荧光生物... 详细信息

【目的】为解决传统方法检测金黄色葡萄球菌耗时长、操作复杂等问题,研发一种基于脱氧核酶(DNAzyme)的荧光生物传感器,实现金黄色葡萄球菌的快速检测。【方法】将特异性DNAzyme和互补链Subatrate相结合制成荧光生物传感器,并对荧光生物传感器进行生物材料浓度和溶液pH优化,并对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、芽孢杆菌、无乳链球菌、变形杆菌等进行特异性检测;最后对牛奶样品进行基于DNAzyme的荧光生物传感器的试验验证。【结果】基于DNAzyme的荧光生物传感器在pH为6.8时,3 min内可以实现对金黄色葡萄球菌的检测,线性范围为1~1×10^(7) cfu·mL^(−1),最低检测限为1 cfu·mL^(−1)。【结论】基于DNAzyme的荧光生物传感器解决了传统检测方法耗时长、操作复杂等问题,实现了对金黄色葡萄球菌的快速检测,具有重要的应用价值。

关键词：金黄色葡萄球菌 DNAzyme 分子信标荧光生物传感器

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畜禽杂种优势形成机制与预测方法研究进展

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中国农业科学 2025年第5期58卷 1017-1031页

作者：孙研研倪爱心杨涵涵袁经纬陈继兰中国农业科学院北京畜牧兽医研究所/畜禽生物育种全国重点实验室瓦赫宁根大学及研究中心

杂种优势是遗传结构不同群体的杂交后代在生活力、繁殖力以及适应力等方面优于亲本群体的平均值或者超过亲本群体的现象，是一种重要的遗传资源。杂种优势在现代农业中发挥着重要作用，有助于提高畜禽和农作物的产量和品质、快速改良性... 详细信息

杂种优势是遗传结构不同群体的杂交后代在生活力、繁殖力以及适应力等方面优于亲本群体的平均值或者超过亲本群体的现象，是一种重要的遗传资源。杂种优势在现代农业中发挥着重要作用，有助于提高畜禽和农作物的产量和品质、快速改良性状、加速培育新品种和增加遗传多样性等，进而高效提升畜牧业和种植业的生产效率，降低成本。虽然杂种优势的发现已逾百年，但其遗传基础的解析远远落后于其在农业生产中的应用。杂种优势复杂形成机制的研究是遗传育种领域的一个经典话题和活跃前沿，但得到明确的结论却十分有限。针对杂种优势的表现特点，科学家先后提出显性学说、超显性学说和上位学说等多种杂种优势形成的假说，揭示杂种优势的遗传基础是非加性遗传效应，但是这些假说均是基于单基因效应而言，过于理想化和简单化；DNA、RNA和蛋白质等不同水平上的探索陆续发现多效应并存的现象。尤其在水稻和玉米等杂交育种作物上陆续开展的相关研究挖掘了杂种优势效应位点，丰富了对作物杂种优势形成机制的认知，推动了精准分子设计育种等作物育种技术的变革。杂种优势在猪、鸡等畜禽的育种中也广泛应用，畜牧业发达国家80%以上的商品猪肉、鸡肉和鸡蛋均通过杂交品种获得。高效应用杂种优势服务于生产，提前评估杂种优势是必要的。群间和群内表型方差比预测法、杂种遗传力预测法、分子标记预测法，这些新方法有助于解决通过传统的杂交试验的方法来预测杂种优势的周期长、易受环境影响和人力财力消耗大等问题，但是预测的准确性具有局限性。杂种优势涉及多个层面的相互作用，而且畜禽遗传背景复杂，育种周期长，使得畜禽杂种优势形成的机制研究和准确的预测方法依然面临挑战。近年来，测序技术的逐步应用，为理解畜禽杂种优势的分子调控网络提供了新的视角。QTL定位和全基因组关联分析从基因组水平上揭示杂种优势的分子机制，筛选相关的分子标记应用于畜禽品种的选择和选配。结合多组学研究，如转录组和代谢组，影响杂种优势的关键功能基因、变异及其代谢物能被更精确地定位，有助于杂交改良。本综述系统阐述了畜禽领域杂种优势形成机制和预测方法方面的研究进展，展望未来的研究会将通过结合多组学测序数据和生信分析来逐步阐明杂种优势的复杂机理，鉴定与杂种优势相关的基因、分子标记，并创新杂种优势的预测方法，为杂种优势利用提供更准确的方向。

关键词：杂种优势畜禽育种分子机制预测方法

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单细胞转录组测序技术在家养动物中的应用

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畜牧兽医学报 2024年第8期55卷 3276-3287页

作者：张肖旭李昊冯平捷杨豪李新月吕冉潘章源储明星中国农业科学院北京畜牧兽医研究所畜禽生物育种全国重点实验室北京100193

单细胞转录组测序技术(single cell RNA sequencing, scRNA-seq)能够以高精度分辨率鉴定单个细胞类型和细胞状态,打破普通转录组测序(bulk RNA sequencing, RNA-seq)无法探究目标细胞具体表达特征的困境,在各个领域的探索中起到重要作用... 详细信息

单细胞转录组测序技术(single cell RNA sequencing, scRNA-seq)能够以高精度分辨率鉴定单个细胞类型和细胞状态,打破普通转录组测序(bulk RNA sequencing, RNA-seq)无法探究目标细胞具体表达特征的困境,在各个领域的探索中起到重要作用,目前广泛应用于人类及小鼠发育生物学、肿瘤学、免疫学、复杂疾病、肠道微生物组及临床应用等诸多领域。近年来,scRNA-seq在畜牧业领域也开展了一些开创性的研究并获得了一系列的成果,主要集中在动物繁殖性能、胚胎发育、关键性状解析等方面,但相较于在人类上的应用还较为薄弱,在其他领域的应用也仍有待深入。本文主要综述了scRNA-seq的工作流程及其在家养动物中应用的研究进展,以期为提高scRNA-seq分析效率以及在家养动物中的创新应用提供参考。

关键词：单细胞转录组测序家养动物

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不同FecB基因型和不同直径绵羊卵泡中BMP/SMAD通路活性及蛋白表达差异

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畜牧兽医学报 2024年第9期55卷 3957-3967页

作者：龚一鸣贾一轩李佳骏王翔宇贺小云储明星狄冉中国农业科学院北京畜牧兽医研究所畜禽生物育种全国重点实验室北京100193

旨在探究不同FecB基因型对绵羊卵泡中BMP/SMAD通路活性和蛋白表达的影响;揭示成熟大卵泡和小卵泡之间BMP/SMAD通路活性和蛋白表达的差异。本研究采用TaqMan分型方法筛选出不同FecB基因型的母羊,同期发情后取卵泡期成熟卵泡和黄体期卵巢... 详细信息

旨在探究不同FecB基因型对绵羊卵泡中BMP/SMAD通路活性和蛋白表达的影响;揭示成熟大卵泡和小卵泡之间BMP/SMAD通路活性和蛋白表达的差异。本研究采用TaqMan分型方法筛选出不同FecB基因型的母羊,同期发情后取卵泡期成熟卵泡和黄体期卵巢表面小卵泡,利用免疫印迹法(Western blot)测定BMP/SMAD通路相关蛋白表达水平和通路活性。结果表明,对于小卵泡组,FecB突变型卵泡中骨形态发生蛋白1B型受体(bone morphogenetic protein receptor type 1B,BMPR1B)表达量显著高于野生型卵泡(P<0.05),但SMAD家族成员4(SMAD family member 4,SMAD4)表达量和SMAD1/5/9的磷酸化水平显著低于野生型卵泡(P<0.05);对于成熟大卵泡组,FecB突变型卵泡中FKBP脯氨酰异构酶1A(FKBP prolyl isomerase 1A,FKBP1A)和SMAD4表达量显著低于野生型卵泡(P<0.05),Ⅰ型受体(BMPR1B)和Ⅱ型受体(BMPR2)的蛋白表达量及SMAD1/5/9的磷酸化水平在两种基因型之间未显示出显著差异。另一方面,对比FecB突变型小卵泡和成熟大卵泡发现:成熟大卵泡中BMPR1B和SMAD4蛋白表达量和SMAD1/5/9磷酸化程度显著高于小卵泡(P<0.05)。上述结果表明,由于SMAD4表达量的下降,FecB突变型大、小卵泡中结合到基因组靶区域的SMAD4-SMAD1/5/9蛋白复合物均相对较少,将导致通路活性降低,而且由于小卵泡中较低的SMAD1/5/9磷酸化水平,其通路活性更低。另外,绵羊突变型卵泡生长发育成熟后BMP/SMAD通路活性显著增强。

关键词：绵羊 FecB突变卵泡 BMP/SMAD通路 SMAD4

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赖氨酸乙酰化修饰在鸡精液冷冻中的保护作用及机制研究进展

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畜牧兽医学报 2025年

作者：宗云鹤杨宇泽孙研研陈继兰李云雷中国农业科学院北京畜牧兽医研究所畜禽生物育种全国重点实验室北京市畜牧总站

我国地方鸡种140个，遗传变异丰富，开展鸡遗传资源的保护、开发与利用，对于促进我国鸡种业自主发展具有重要意义。精液的超低温冷冻保存是实现畜禽遗传资源长期保存与高效利用的最实用的技术手段之一。家畜尤其牛的精液冷冻技术较为... 详细信息

我国地方鸡种140个，遗传变异丰富，开展鸡遗传资源的保护、开发与利用，对于促进我国鸡种业自主发展具有重要意义。精液的超低温冷冻保存是实现畜禽遗传资源长期保存与高效利用的最实用的技术手段之一。家畜尤其牛的精液冷冻技术较为成熟，但鸡精子头小尾长、抗冻性差，冷冻-复融精子受精率低、受精持续能力差，制约着精液冷冻技术在鸡保种和育种中的应用。蛋白质翻译后修饰是细胞响应内外界环境刺激的重要调控途径。在成熟精子中，由于转录和翻译活动基本停滞，蛋白质赖氨酸乙酰化修饰可能在鸡精液冷冻保护过程中发挥作用，这些修饰可参与维持精子结构完整性、线粒体功能稳定性以及DNA结构完整性，然而其具体机制尚不清楚。本综述以期为开展赖氨酸乙酰化修饰在鸡精液冷冻保存中的作用相关研究提供参考，以建立鸡精液冷冻保存新方法，为鸡遗传资源的高效保存提供理论与技术支撑。

关键词：鸡冷冻精液精子赖氨酸乙酰化修饰种质资源

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代谢性疾病易感猪皮下脂肪功能障碍分子病理机制解析

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畜牧兽医学报 2024年第11期55卷 4938-4949页

作者：徐塽杜娟张凯艺苗佳坤杨宇王彦芳杨述林中国农业科学院北京畜牧兽医研究所畜禽生物育种全国重点实验室北京100193

旨在了解代谢性疾病易感猪皮下脂肪功能障碍的分子病理机制,探究皮下脂肪组织能量代谢紊乱与表观调控的相关性。本研究选用体重相近、健康状况良好的6月龄野生型雄性巴马猪个体及转基因制备的代谢性疾病易感猪,经高脂高糖饮食(high-fat ... 详细信息

旨在了解代谢性疾病易感猪皮下脂肪功能障碍的分子病理机制,探究皮下脂肪组织能量代谢紊乱与表观调控的相关性。本研究选用体重相近、健康状况良好的6月龄野生型雄性巴马猪个体及转基因制备的代谢性疾病易感猪,经高脂高糖饮食(high-fat high-sugar diet,HFHSD)诱导3个月或12个月后,将其分为4组,分别为饮食诱导3个月的野生型组(WT-3,n=5)、饮食诱导12个月的野生型组(WT-12,n=5)、饮食诱导3个月的转基因组(TG-3,n=8)和饮食诱导12个月的转基因组(TG-12,n=4)。首先对试验动物进行血清学评价,检测甘油三酯、游离脂肪酸、瘦素和脂联素浓度;然后对试验动物进行组织学病理评价,并且通过转录组测序获得代谢紊乱的分子特征及富集的信号通路;随后通过qPCR、蛋白免疫印迹(Western blot,WB)、酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)对关键基因、代谢物及表观修饰进行检测。血清生化测定结果及病理组织学评价表明,转基因及饮食诱导均能引起脂肪组织功能障碍,转基因联合饮食诱导组的病理损伤更严重;转录组测序结果表明,脂肪组织功能障碍典型的特征是线粒体氧化磷酸化功能受损,脂肪组织糖脂代谢和蛋白质合成等功能下降;qPCR结果显示,TG-12组中线粒体编码的基因表达显著下调;WB结果显示,TG-12组中调节糖脂代谢的关键基因ACLY、ACSS2和FASN显著下调;ELISA结果显示,关键的中间代谢物乙酰辅酶A含量降低;且经WB验证,在基因表达中具有广泛调控作用的组蛋白乙酰化水平降低,可能是脂肪功能障碍的主要原因。利用代谢性疾病易感猪揭示了皮下脂肪线粒体功能降低通过下调乙酰辅酶A含量及组蛋白乙酰化水平,经表观修饰发挥广泛的基因表达抑制作用,为人类肥胖相关皮下功能障碍疾病治疗提供了模型和参考数据。

关键词：转基因猪皮下脂肪组织转录组线粒体组蛋白乙酰化

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