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中国预防兽医学报 2012年第7期34卷 563-567页

作者：德艳艳姜志刚牛思博孙刚于力东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江省动物卫生监督所黑龙江哈尔滨150090

为验证重组α毒素对携带非典型cpb2基因的A型产气荚膜梭菌的免疫保护性,本研究应用PCR技术,从某牛场牛源A型产气荚膜梭菌G1分离株中扩增出1 194 bp的α毒素编码基因(cpa)和795 bp的β2毒素编码基因(cpb2)。经BLAST分析显示,G1分离株携带... 详细信息

为验证重组α毒素对携带非典型cpb2基因的A型产气荚膜梭菌的免疫保护性,本研究应用PCR技术,从某牛场牛源A型产气荚膜梭菌G1分离株中扩增出1 194 bp的α毒素编码基因(cpa)和795 bp的β2毒素编码基因(cpb2)。经BLAST分析显示,G1分离株携带的cpb2基因与14个菌株的非典型cpb2基因的氨基酸序列同源性为95.1%～98.9%,与典型cpb2基因(L77695)的氨基酸序列同源性为61.7%。这表明,G1的cpb2基因为非典型cpb2基因。同时分别将cpa和cpb2基因扩增产物克隆于原核表达载体中,构建重组表达质粒pET-a和pET-b2,重组菌经IPTG诱导表达重组蛋白,将其纯化后单独及联合免疫小鼠进行免疫保护试验。结果显示,单独免疫重组α毒素蛋白组以及联合免疫重组β2毒素蛋白组的小鼠,均可以抵抗至少6倍最小致死量(MLD)的G1外毒素(包含α毒素和非典型β2毒素)的攻击,也可以完全抵抗至少6 MLD的G2外毒素(不包含β2毒素)的攻击。表明,重组α毒素蛋白对含有及不含有非典型β2毒素的A型产气荚膜梭菌均具有良好的免疫保护作用。

关键词：非典型cpb2基因 A型产气荚膜梭菌重组α毒素重组非典型β2毒素

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副猪嗜血杆菌Plp4蛋白的原核表达及免疫原性分析

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中国预防兽医学报 2012年第5期34卷 415-417页

作者：朱晓凯赵福广李建军胡明明李艳玲张艳禾谢芳王春来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、兽医生物技术国家重点实验室/细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 吉林农业大学生命科学学院吉林长春130118

为原核表达副猪嗜血杆菌Plp4蛋白,本研究通过PCR方法扩增Plp4全长基因并克隆于pET-28a(+)载体中,将重组质粒转化BL21(DE3)感受态中,采用0.4 mM IPTG经22℃诱导表达了35 ku的重组蛋白。经western blot试验证明Plp4蛋白具有良好的反应原性... 详细信息

为原核表达副猪嗜血杆菌Plp4蛋白,本研究通过PCR方法扩增Plp4全长基因并克隆于pET-28a(+)载体中,将重组质粒转化BL21(DE3)感受态中,采用0.4 mM IPTG经22℃诱导表达了35 ku的重组蛋白。经western blot试验证明Plp4蛋白具有良好的反应原性,免疫6周龄昆明小鼠制备免疫血清,ELISA检测表明制备的抗血清效价在1∶15 000以上,表明Plp4蛋白具有良好的免疫原性。

关键词：副猪嗜血杆菌表达 Plp4基因免疫原性

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猪捷申病毒TaqMan实时定量RT-PCR方法的建立

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中国预防兽医学报 2012年第3期34卷 206-210页

作者：胡峰赵亚荣吕超超王贵华崔玉东王春仁崔尚金黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 大北农动物医学研究中心北京100097

为建立猪捷申病毒(PTV)的早期检测及定量分析方法,本研究基于PTV 11个血清型基因组5'端非编码区保守序列,设计引物和TaqMan探针,建立了检测PTV的TaqMan实时定量RT-PCR方法。应用该方法对PTV、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合症病毒、... 详细信息

为建立猪捷申病毒(PTV)的早期检测及定量分析方法,本研究基于PTV 11个血清型基因组5'端非编码区保守序列,设计引物和TaqMan探针,建立了检测PTV的TaqMan实时定量RT-PCR方法。应用该方法对PTV、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合症病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒以及猪瘟病毒进行特异性试验,结果除PTV为阳性外其它均为阴性;针对PTV最低可检测到10个拷贝;批内、批间重复试验的变异系数均小于3%。应用建立的方法与病毒分离方法分别对91份临床样品进行检测,检出率分别为79.12%和57.14%,两者的符合率是78.02%。经临床应用表明,该实时定量RT-PCR方法可为PTV的早期诊断及定量分析提供技术手段。

关键词：猪捷申病毒实时定量RT-PCR TaqMan

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兔抗猪CD163蛋白多克隆抗体制备及鉴定

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中国兽医学报 2012年第11期32卷 1624-1628页

作者：郭娟娟彭金美安同庆冷超良吴江宫大庆陈家锃杨永倩田志军张德礼西北农林科技大学、动物医学院病毒免疫与生物信息研究室、生物信息研究中心、分子病毒免疫与肿瘤系统生物学研究组陕西杨凌712100 中国农业科学院、哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室、猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为制备兔抗猪CD163多克隆抗体,采用RT-PCR方法从猪PAM RNA中扩增CD163胞质外区部分基因SRCR4-5,克隆至pGEX-6p-1原核表达载体,在IPTG诱导下获得约50 000以包涵体形式表达的重组蛋白。WesternBlotting分析表明,表达产物能够被GST单抗所... 详细信息

为制备兔抗猪CD163多克隆抗体,采用RT-PCR方法从猪PAM RNA中扩增CD163胞质外区部分基因SRCR4-5,克隆至pGEX-6p-1原核表达载体,在IPTG诱导下获得约50 000以包涵体形式表达的重组蛋白。WesternBlotting分析表明,表达产物能够被GST单抗所识别。用该重组蛋白免疫兔制备多抗血清,经间接ELISA检测,多抗血清效价可达105,流式检测发现可与Marc-145和PAM上的天然CD163分子相互作用。抗体阻断试验证明制备的多抗血清可以部分阻断PRRSV感染。本试验为进一步研究PRRSV与受体-CD163相互作用机制打下了基础。

关键词： CD163 抗体鉴定

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抗马动脉炎病毒N蛋白单克隆抗体的制备

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中国预防兽医学报 2012年第10期34卷 827-829页

作者：赵世华戚亭郭巍李红梅王贵宾刘翠云仇铮田志革王征卢刚潘佳亮相文华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物研究室黑龙江哈尔滨150001 东北林业大学资源与环境学院黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学黑龙江大庆163000

为制备抗马动脉炎病毒(EAV)衣壳蛋白(N)的单克隆抗体(MAb),本研究通过原核表达重组N蛋白,纯化后免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,细胞融合后经间接ELISA筛选获得两株能够稳定分泌抗EAV N蛋白的杂交瘤细胞株,MAbs亚型鉴定为IgG1,轻链为κ链。Wes... 详细信息

为制备抗马动脉炎病毒(EAV)衣壳蛋白(N)的单克隆抗体(MAb),本研究通过原核表达重组N蛋白,纯化后免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,细胞融合后经间接ELISA筛选获得两株能够稳定分泌抗EAV N蛋白的杂交瘤细胞株,MAbs亚型鉴定为IgG1,轻链为κ链。Western blot结果显示,这两株杂交瘤细胞分泌的MAb均能够识别EAV。EAV N蛋白MAb的制备,为EAV血清学检测方法的建立奠定了基础。

关键词：马动脉炎病毒核衣壳蛋白单克隆抗体

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多重耐药基因cfr在动物源细菌中的流行病学及传播机制研究

多重耐药基因cfr在动物源细菌中的流行病学及传播机制研究

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：张万江王秀梅张荣民刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／细菌病研究室，黑龙江哈尔滨 150001

cfr首次在2000年由德国联邦农业研究中心，动物育种研究所分子微生物和诊断室的Stefan Schwarz教授从患有呼吸道疾病的小牛鼻腔中分离到的松鼠葡萄球菌中发现。本文介绍了cfr基因的作用机制、流行情况、传播机制。

关键词：动物源细菌多重耐药基因流行病学传播机制

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重排的PhiX174噬菌体裂解基因E能增强溶菌效率

重排的PhiX174噬菌体裂解基因E能增强溶菌效率

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：于申业彭玮司微尹录刘思国王春来常月红中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室，黑龙江哈尔滨 150001

菌蜕是通过调控PhiXl74噬菌体裂解基因E的表达而形成的，其为灭活疫苗的研究提供了新的途径。本文利用基因重排技术，构建了PhiXl74噬菌体裂解基因E的基因重排文库。通过与原核非融合表达载体DBV220进行重组，筛选到两个溶菌质粒。其中... 详细信息

菌蜕是通过调控PhiXl74噬菌体裂解基因E的表达而形成的，其为灭活疫苗的研究提供了新的途径。本文利用基因重排技术，构建了PhiXl74噬菌体裂解基因E的基因重排文库。通过与原核非融合表达载体DBV220进行重组，筛选到两个溶菌质粒。其中一个含有新奇的E基因突变体(命名为mE)，由5`端74-bp非编码序列和201bp的△E基因组成，能明显提高对大肠杆菌和沙门氏菌的溶菌效率。而且，溶菌细菌的OD600值最高可达到1.0(109cfu)，解决了菌蜕研究和生产中菌液浓度低和菌蜕数量少等技术瓶颈问题。本结果对于加快菌蜕疫苗的研制具有重要的意义。

关键词：革兰氏阴性菌菌蜕疫苗裂解基因基因重排突变体溶菌效率

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猪胸膜肺炎放线杆菌ClpP蛋白酶基因缺失株的构建及其生物学活性

猪胸膜肺炎放线杆菌ClpP蛋白酶基因缺失株的构建及其生物学活性

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纪念中国微生物学会成立六十周年大会暨2012年中国微生物学会学术年会

作者：谢芳周泷张艳禾李刚王春来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/细菌病研究室黑龙江哈尔滨 150001

本研究构建clpP基因缺失的胸膜肺炎放线杆菌突变株，采用结晶紫染色法和荧光显微镜观察比较c1pP基因缺失株和APP亲本株的生物被膜形成能力。结果成功筛选获得一株c1pP基因缺失的胸膜肺炎放线杆菌突变株，通过对突变株生物学特性进行初... 详细信息

本研究构建clpP基因缺失的胸膜肺炎放线杆菌突变株，采用结晶紫染色法和荧光显微镜观察比较c1pP基因缺失株和APP亲本株的生物被膜形成能力。结果成功筛选获得一株c1pP基因缺失的胸膜肺炎放线杆菌突变株，通过对突变株生物学特性进行初步研究，结果表明突变株与亲本株相比，在25℃和37℃条件下培养生长能力未受影响，在42℃条件下培养生长能力略有下降，在添加有1mM H2O2和0.5M KC1的培养条件下也表现出下降的生长能力;结晶紫染色法和荧光显微镜观察结果显示，clpf，基因缺失株与亲本株相比，其生物被膜形成能力显著下降。该突变株构建体系的建立为胸膜肺炎放线杆菌新毒力基因的功能研究及猪传染性胸膜肺炎弱毒活疫苗的开发奠定了良好基础。

关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌 ClpP蛋白酶基因缺失生物学活性

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感染兔出血症病毒兔肝组织蛋白表达差异研究

感染兔出血症病毒兔肝组织蛋白表达差异研究

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：李茂中刘家森王泽祥孙宏勇郭东春姜骞林欢曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／实验动物研究室，黑龙江哈尔滨 150001

提取感染组和对照组的兔肝脏总蛋白，采用双向凝胶电泳技术比较分析差异表达蛋白;经MALDI-TOF-TOF质谱分析，搜索蛋白质数据库，获得差异蛋白质的信息。经过初步筛选和质谱分析，共获得60个具有统计学意义的表达差异蛋白点，其中19个在... 详细信息

提取感染组和对照组的兔肝脏总蛋白，采用双向凝胶电泳技术比较分析差异表达蛋白;经MALDI-TOF-TOF质谱分析，搜索蛋白质数据库，获得差异蛋白质的信息。经过初步筛选和质谱分析，共获得60个具有统计学意义的表达差异蛋白点，其中19个在感染中表达上调，41个表达下调。通过比较人工感染兔出血热病毒(RHDV)组和对照组兔肝脏整体蛋白表达谱，筛选出了5种可能在病毒整个感染过程中起作用的差异蛋白。

关键词：兔出血症病毒肝组织蛋白表达双向凝胶电泳

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猪胸膜肺炎放线杆菌ClpP蛋白酶基因缺失株的构建及其生物学活性

猪胸膜肺炎放线杆菌ClpP蛋白酶基因缺失株的构建及其生物学活性

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2012年全国病原微生物学术会议

作者：谢芳周泷张艳禾李刚王春来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001

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