检索结果-内蒙古大学图书馆

中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：李媛宋志强刘洋孙文静邹晓辉辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室／国家牛传染性胸膜肺炎指定检测实验室，黑龙江哈尔滨 150001 东北农业大学动物医学院，黑龙江哈尔滨 150000

牛支原体是牛支原体相关疾病的病原。最近的研究表明很多细菌表面存在的可结合纤溶酶原的结构能够加强细菌在宿主体内的侵袭力与传播。烯醇化酶是一种普遍存在与生物体内的糖酵解酶并存在在不同的原核以及真核生物的细胞表面作为一种重... 详细信息

牛支原体是牛支原体相关疾病的病原。最近的研究表明很多细菌表面存在的可结合纤溶酶原的结构能够加强细菌在宿主体内的侵袭力与传播。烯醇化酶是一种普遍存在与生物体内的糖酵解酶并存在在不同的原核以及真核生物的细胞表面作为一种重要的纤溶酶原结合蛋白从而与细菌粘附宿主细胞的能力相关。我们第一次证明了牛支原体细胞表面具有结合纤溶酶原的能力。并且我们在大肠杆菌中以可溶性形式表达出重组的牛支原体烯醇化酶。通过抗牛支原体烯醇化酶抗血清应用western blot与EusA方法牛支原体中烯醇化酶被证明同时存在于细胞的胞浆部分与胞膜部分。同时，牛支原体烯醇化酶被证明是牛支原体膜蛋白组分中的最主要的一种纤溶酶原结合蛋白。所有的实验数据表明与表面相关的牛支原体烯醇化酶能够加强牛支原体粘附宿主细胞的能力。

关键词：牛支原体 α烯醇化酶功能分析细菌粘附宿主细胞

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牛肠道病毒的分离鉴定

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中国预防兽医学报 2011年第5期33卷 388-390页

作者：李英利常继涛于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001

本研究从内蒙古某奶牛场的犊牛粪便样品中分离的一株牛肠道病毒(BEV),命名为BHM26,通过电镜观察显示和分子生物学鉴定,发现病毒粒子在细胞浆中呈结晶状排列,单一病毒粒子呈典型小RNA病毒粒子形态,直径为25nm～30nm,无囊膜;病毒的部分3D... 详细信息

本研究从内蒙古某奶牛场的犊牛粪便样品中分离的一株牛肠道病毒(BEV),命名为BHM26,通过电镜观察显示和分子生物学鉴定,发现病毒粒子在细胞浆中呈结晶状排列,单一病毒粒子呈典型小RNA病毒粒子形态,直径为25nm～30nm,无囊膜;病毒的部分3D蛋白编码区和全长3'UTR区段的1026bpDNA片段的RT-PCR扩增和序列分析表明,其核苷酸序列与GenBank登录的参考病毒株核苷酸序列同源性为71.9%～87%,其中与BEVWye-3A株同源性最高,为87%。分析表明中国BEV分离株与国外参考毒株具有较大差异。

关键词：牛肠道病毒分离鉴定

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鹅β-防御素3基因的分离、鉴定及其表达产物的生物学特性

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生物工程学报 2011年第12期27卷 1711-1721页

作者：张名岳周财源韩宗玺邵昙昊刘胜旺马得莹东北农业大学动物营养研究所哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150001

为了克隆鹅β-防御素(AvBD)3基因,并在原核表达重组鹅AvBD3蛋白,进一步研究鹅AvBD3蛋白的生物学特性,利用RT-PCR方法从鹅脾脏和法氏囊组织中扩增到鹅AvBD3基因片段,其cDNA片段大小为182 bp,编码60个氨基酸残基。经同源性分析发现鹅AvBD... 详细信息

为了克隆鹅β-防御素(AvBD)3基因,并在原核表达重组鹅AvBD3蛋白,进一步研究鹅AvBD3蛋白的生物学特性,利用RT-PCR方法从鹅脾脏和法氏囊组织中扩增到鹅AvBD3基因片段,其cDNA片段大小为182 bp,编码60个氨基酸残基。经同源性分析发现鹅AvBD3氨基酸序列与鸡AvBD3氨基酸序列同源性最高,为100%。将该基因亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1的BamHⅠ和SalⅠ双酶切位点上,构建重组表达质粒pGEX-goose AvBD3。将重组质粒转化大肠杆菌BL21,于37℃用IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳表明,重组鹅AvBD3蛋白在原核高效表达(分子量约31 kDa)。该重组蛋白经纯化后测定其体外抗菌活性与理化特性,结果显示,重组鹅AvBD3蛋白具有广谱的抗菌活性,对12种细菌,包括革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均具有抑菌作用。高盐离子浓度显著降低重组鹅AvBD3蛋白的抗菌活性。此外,该重组蛋白的溶血活性极低,并对酸碱度具有较高的稳定性。

关键词：鹅AvBD3 β一防御素3基因分离鉴定表达产物生物学特性

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牛副流感病毒3型NP单抗的制备及初步应用

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中国预防兽医学报 2011年第12期33卷 970-973页

作者：吕闯朱远茂董秀梅蔡红于作高欲燃薛飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为制备牛副流感病毒3型(BPIV3)核衣壳蛋白(NP)单克隆抗体(MAb),本研究利用原核表达并纯化的重组NP(rNP)免疫BALB/c小鼠,取免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合。采用以BPIV3为检测抗原的间接ELISA方法筛选阳性细胞克隆,经3次克隆纯... 详细信息

为制备牛副流感病毒3型(BPIV3)核衣壳蛋白(NP)单克隆抗体(MAb),本研究利用原核表达并纯化的重组NP(rNP)免疫BALB/c小鼠,取免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合。采用以BPIV3为检测抗原的间接ELISA方法筛选阳性细胞克隆,经3次克隆纯化后获得1株稳定分泌抗NP特异性MAb的杂交瘤细胞株(5E5)并制备腹水,采用rNP及BPIV3包被的ELISA效价分别是2×106和1.28×105。间接ELISA、western blot、IFA试验表明该MAb具有良好的反应性和特异性。经抗体亚类鉴定该MAb亚类为IgG1/κ。特异性试验表明该MAb不与牛传染性鼻气管炎病毒、牛病毒性腹泻病毒反应。免疫组化试验表明该MAb可以检测BPIV3感染动物体内的病原。该MAb还可用于建立检测BPIV3病原及抗体的诊断方法,同时为研究NP的结构和功能提供了条件。

关键词：牛副流感病毒3型核衣壳蛋白单克隆抗体特异性

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一株3型牛腺病毒的分离与鉴定

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中国预防兽医学报 2011年第3期33卷 169-172页

作者：于作朱远茂蔡红高欲燃董秀梅吕闯薛飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

本研究于2009年由患急性呼吸道疾病牛的鼻拭子中分离获得一株病毒,经形态特征、血清学试验及PCR鉴定表明,该病毒与牛腺病毒3型(BAV-3)相似。对其E2A基因进行序列测定,并与GenBank中登录的BAV1型、3型、4型及人、绵羊、鼠等其它种属来源... 详细信息

本研究于2009年由患急性呼吸道疾病牛的鼻拭子中分离获得一株病毒,经形态特征、血清学试验及PCR鉴定表明,该病毒与牛腺病毒3型(BAV-3)相似。对其E2A基因进行序列测定,并与GenBank中登录的BAV1型、3型、4型及人、绵羊、鼠等其它种属来源的腺病毒E2A基因序列进行比对及系统进化分析,结果显示该分离株与BAV-3的同源性为95.5%。经MEGA4软件分析,分离株与BAV-3验证值为100,表明其为BAV-3,并命名为BAV-3HLJ0955株。对该分离株热敏感试验表明,BAV-3 HLJ0955在56℃ 30min可被完全灭活,属于BAV第一群。这是国内首次分离获得BAV-3的报道。

关键词：牛腺病毒3型分离鉴定

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兔出血症病毒衣壳蛋白VP60与兔肝脏细胞中相互作用蛋白的初步筛选

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中国预防兽医学报 2011年第5期33卷 354-357页

作者：穆亚芳刘家森郭东春李茂中原冬伟姜骞林欢曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物研究室黑龙江哈尔滨150001

为鉴定兔出血症病毒(RHDV)在感染兔肝脏过程中与肝细胞膜表面相互作用的靶蛋白,本研究利用SMART文库构建技术构建了兔肝脏细胞的真核表达cDNA重组质粒文库,将其转染SP2/0细胞,经嘌呤霉素筛选表达兔肝细胞蛋白的阳性SP2/0细胞。以RHDV-V... 详细信息

为鉴定兔出血症病毒(RHDV)在感染兔肝脏过程中与肝细胞膜表面相互作用的靶蛋白,本研究利用SMART文库构建技术构建了兔肝脏细胞的真核表达cDNA重组质粒文库,将其转染SP2/0细胞,经嘌呤霉素筛选表达兔肝细胞蛋白的阳性SP2/0细胞。以RHDV-VP60蛋白作为固相包被抗原,经筛选,获得能够与VP60蛋白相互结合的表达性阳性SP2/0细胞克隆。测序表明26个克隆与兔的一些功能性蛋白有较高的同源性,其中包括代谢酶类13个、免疫信号通路受体蛋白5个以及其他细胞膜蛋白等。本研究鉴定的与RHDVVP60具有结合性的细胞蛋白为RHDV感染机制的研究奠定了基础。

关键词：兔出血症病毒衣壳蛋白VP60 文库构建

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利用Red重组系统敲除大肠杆菌菌株ClpP基因方法的研究

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黑龙江畜牧兽医 2011年第8期 28-30页

作者：司微刘慧芳王春来彭玮赫明雷杜艳芬赵海玲王聃杨金国林靖凯倪洪波刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室哈尔滨150001

为了研究ClpP基因的功能,试验利用Red系统的重组功能,通过PCR扩增出两端与大肠杆菌菌株ClpP基因上、下游序列同源,中间为氯霉素抗性基因cat的DNA片段,电击转化含质粒pKD46的大肠杆菌菌株DH091,筛选替换ClpP基因的阳性转化子,再导入质粒p... 详细信息

为了研究ClpP基因的功能,试验利用Red系统的重组功能,通过PCR扩增出两端与大肠杆菌菌株ClpP基因上、下游序列同源,中间为氯霉素抗性基因cat的DNA片段,电击转化含质粒pKD46的大肠杆菌菌株DH091,筛选替换ClpP基因的阳性转化子,再导入质粒pCP20去除氯霉素抗性基因。结果表明:成功敲除大肠杆菌菌株ClpP基因。

关键词： Red重组系统 ClpP基因基因敲除

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应用ViewRNA技术特异性检测感染细胞中的不同马传染性贫血病毒株

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中国预防兽医学报 2011年第10期33卷 800-803页

作者：王珊珊马建史楠刘强韦华冕周建华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北林业大学野生动物资源学院黑龙江哈尔滨150040

为了对体外培养细胞感染的不同马传染性贫血病毒(EIAV)株进行特异的鉴别检测,本研究基于一种新的RNA原位杂交-ViewRNA技术,通过设计合成针对EIAVFDDV13和EIAVUK3病毒株基因组RNA的特异性探针,并结合信号放大技术和荧光标记技术,同时通... 详细信息

为了对体外培养细胞感染的不同马传染性贫血病毒(EIAV)株进行特异的鉴别检测,本研究基于一种新的RNA原位杂交-ViewRNA技术,通过设计合成针对EIAVFDDV13和EIAVUK3病毒株基因组RNA的特异性探针,并结合信号放大技术和荧光标记技术,同时通过激光共聚焦显微镜进行观察,建立了可时两种不同株的EIAV基因组RNA进行细胞内原位检测的方法.研究结果表明,两组探针能够特异地与感染细胞中EIAVFDD13和EIAVUK3的病毒RNA相结合,可在两种不同EIAV株共感染的宿主细胞中实现对两种毒株的有效鉴别和定位检测.该方法为进一步研究EIAV与宿主细胞间相互作用提供了有效手段.

关键词：马传染性贫血病毒原位杂交 ViewRNA技术

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鹅β-防御素基因克隆与生物学特性的初步分析

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畜牧兽医学报 2011年第8期42卷 1193-1200页

作者：周财源蔺利娟韩宗玺邵昱昊刘胜旺马得莹东北农业大学动物营养研究所哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150001

本试验采用RT-PCR方法,从鹅的骨髓细胞中扩增到禽β-防御素(AvBD)基因。测序结果表明,该基因的cDNA大小为201 bp,编码66个氨基酸。经遗传进化分析发现,该基因推导的氨基酸序列与鸡AvBD5的同源性最高,达84.8%。因此,将其命名为鹅AvBD5。... 详细信息

本试验采用RT-PCR方法,从鹅的骨髓细胞中扩增到禽β-防御素(AvBD)基因。测序结果表明,该基因的cDNA大小为201 bp,编码66个氨基酸。经遗传进化分析发现,该基因推导的氨基酸序列与鸡AvBD5的同源性最高,达84.8%。因此,将其命名为鹅AvBD5。进一步将该基因定向插入到pGEX-6p-1的EcoRⅠ和SalⅠ双酶切位点上,构建pGEX-AvBD 5重组表达质粒。将重组质粒转化大肠杆菌BL 21,于37℃不同时间进行诱导表达,SDS-PAGE检测外源基因的表达情况。结果表明,重组鹅AvBD 5融合蛋白的分子量约为32 ku,重组蛋白以包涵体形式存在。采用菌落计数法进行抗菌活性测定,结果表明,重组鹅AvBD 5有广谱的抗菌活性,对11种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均具有较强抗菌作用。此外,该蛋白对温度和pH有较高的稳定性。

关键词：鹅β-防御素5 重组蛋白抗菌活性

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鸭β-防御素4cDNA的克隆、表达及其抑菌活性的初步分析

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畜牧兽医学报 2011年第9期42卷 1309-1315页

作者：蔺利娟韩宗玺邵昱昊张可心刘胜旺李子瑞马得莹东北农业大学动物营养研究所哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150001

本研究旨在克隆与表达鸭β-防御素4(AvBD4)基因及测定其生物学特性,并检测其在鸭脏器组织中的分布。采用RT-PCR方法从鸭法氏囊组织中扩增到鸭AvBD4,其cDNA大小为171bp,编码56个氨基酸。经同源性分析,鸭AvBD4与鸡AvBD4的氨基酸序列同源... 详细信息

本研究旨在克隆与表达鸭β-防御素4(AvBD4)基因及测定其生物学特性,并检测其在鸭脏器组织中的分布。采用RT-PCR方法从鸭法氏囊组织中扩增到鸭AvBD4,其cDNA大小为171bp,编码56个氨基酸。经同源性分析,鸭AvBD4与鸡AvBD4的氨基酸序列同源性最高,达73.2%。将该基因亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1的EcoRⅠ和SalⅠ双酶切位点上,构建重组表达质粒pGEX-duck AvBD4。将重组质粒转化大肠杆菌BL21,于37℃进行诱导表达,SDS-PAGE电泳表明,重组鸭AvBD4蛋白的相对分子质量约为32ku,与预期大小一致。该重组蛋白经纯化后测定其体外抗菌活性与理化特性,结果显示,重组鸭AvBD4蛋白具有广谱的抗菌活性,对11种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均具有抑菌作用。在高盐离子条件下,重组鸭AvBD4蛋白仍具有抑制金黄色葡萄球菌和多杀性巴氏杆菌的作用。此外,该重组蛋白的溶血活性极低。运用实时荧光定量PCR法检测到该基因在鸭组织器官中表达局限,仅在盲肠扁桃体、脾脏和法氏囊中表达。

关键词：鸭 AvBD4 重组蛋白抗菌活性组织分布

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