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中国林牧渔业经济学会饲料经济专业委员会第八届学术交流大会

作者：张名岳周财源韩宗玺邵昙昊刘胜旺马得莹东北农业大学动物营养研究所哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150001 东北农业大学动物营养研究所哈尔滨150030

为了克隆鹅β-防御素(AvBD)3基因，并在原核表达重组鹅AvBD3蛋白，进一步研究鹅AvBD3蛋白的生物学特性，本研究利用RT-PCR方法从鹅脾脏和法氏囊组织中扩增到鹅AvBD3基因片段，其cDNA片段大小为182bp，编码60个氨基酸残基。经同源性分析... 详细信息

为了克隆鹅β-防御素(AvBD)3基因，并在原核表达重组鹅AvBD3蛋白，进一步研究鹅AvBD3蛋白的生物学特性，本研究利用RT-PCR方法从鹅脾脏和法氏囊组织中扩增到鹅AvBD3基因片段，其cDNA片段大小为182bp，编码60个氨基酸残基。经同源性分析发现鹅AvBD3氨基酸序列与鸡AvBD3氨基酸序列同源性最高，为100％。将该基因亚克隆到原核表达载体pGEx-6p-1的BamH Ⅰ和Sa l Ⅰ双酶切位点上，构建重组表达质粒pGEX-goose AvBD3。将重组质粒转化大肠杆菌BL21，于37℃用IPTG诱导表达，SDS-PAGE电泳表明，重组鹅AvBD3蛋白在原核高效表达(分子量约31 kDa)。该重组蛋白经纯化后测定其体外抗菌活性与理化特性，结果显示，重组鹅AvBD3蛋白具有广谱的抗菌活性，对12种细菌，包括革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均具有抑菌作用。高盐离子浓度显著降低重组鹅AvBD3蛋白的抗菌活性。此外，该重组蛋白的溶血活性极低，并对酸碱度具有较高的稳定性。

关键词：鹅β-防御素3基因融合蛋白生物学特性抗菌活性溶血活性

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兔多杀性巴氏杆菌热休克蛋白60基因的原核表达及抗原性分析

兔多杀性巴氏杆菌热休克蛋白60基因的原核表达及抗原性分析

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中国畜牧兽医学会2011年学术年会

作者：卢艳郭东春刘家森原冬伟姜骞司昌德林欢崔玉东曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物研究室黑龙江八一农垦大学动物科技学院

引言/目的兔巴氏杆菌病(Pasteurellosis cuniculum)又称兔出血性败血病,由兔多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)引起的传染病,为家兔的主要传染病之一。热休克蛋白(heat shock protein,Hsp)是生物体在不利环境因素刺激下应激合... 详细信息

引言/目的兔巴氏杆菌病(Pasteurellosis cuniculum)又称兔出血性败血病,由兔多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)引起的传染病,为家兔的主要传染病之一。热休克蛋白(heat shock protein,Hsp)是生物体在不利环境因素刺激下应激合成的一组特殊的蛋白质。Hsp60是HSPs家族中的一个大家族,广泛存在于原核生物及真核生物体内,且高度同源,原核生物Hsp60的同源性可以达到97%,而原核生物与人Hsp60的同源性也达到了70%。不同家族HSPs的亚细胞定位有所区别。真核生物的Hsp60主要位于线粒体内(约70～80%),另有小部分位于胞浆。此外,Hsp60存在于某些细胞的分泌颗粒中。缺氧等刺激还可能造成Hsp60向细胞膜转位甚至被分泌出胞。本试验旨在通过对兔*** Hsp60蛋白进行原核表达,对其抗原性进行研究,为*** Hsp60的免疫佐剂功能及其在细胞中定位的研究奠定基础。

关键词：兔多杀性巴氏杆菌抗原性分析原核表达热休克蛋白

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鹅β-防御素3基因的分离、鉴定及其表达产物生物学特性的分析

鹅β-防御素3基因的分离、鉴定及其表达产物生物学特性的分析

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第二届全国禽病分子生物技术青年学者论坛

作者：张名岳周财源韩宗玺邵昙昊刘胜旺马得莹东北农业大学动物营养研究所黑龙江哈尔滨 150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨 150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨 150001

为了克隆鹅β-防御素(AvBD)3基因，并在原核表达重组鹅AvBD3蛋白，进一步研究鹅AvBD3蛋白的生物学特性，本研究利用RT-PCR方法从鹅脾脏和法氏囊组织中扩增到鹅AvBD3基因片段，其cDNA片段大小为182 bp，编码60个氨基酸残基。经同源性分... 详细信息

为了克隆鹅β-防御素(AvBD)3基因，并在原核表达重组鹅AvBD3蛋白，进一步研究鹅AvBD3蛋白的生物学特性，本研究利用RT-PCR方法从鹅脾脏和法氏囊组织中扩增到鹅AvBD3基因片段，其cDNA片段大小为182 bp，编码60个氨基酸残基。经同源性分析发现鹅AvBD3氨基酸序列与鸡AvBD3氨基酸序列同源性最高，为100％。将该基因亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1的BamHⅠ和Sel Ⅰ双酶切位点上，构建重组表达质粒pGEX-goose AvBD3。将重组质粒转化大肠杆菌BL21，于37℃用IPTG诱导表达，SDS—PAGE电泳表明，重组鹅AvBD3蛋白在原核高效表达(分子量约31 kDa)。该重组蛋白经纯化后测定其体外抗菌活性与理化特性，结果显示，重组鹅AvBD3蛋白具有广谱的抗菌活性，对12种细菌，包括革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均具有抑菌作用。高盐离子浓度显著降低重组鹅AvBD3蛋白的抗菌活性。此外，该重组蛋白的溶血活性极低，并对酸碱度具有较高的稳定性。

关键词：鹅β-防御素重组蛋白分离鉴定生物学特性

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检测猪捷申病毒、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒的多重RT-PCR方法的建立及应用

检测猪捷申病毒、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒的多重RT-PCR...

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中关村全球农业生物技术创新论坛

作者：刘杉杉赵亚荣吕超超王贵华胡峰蔺文成王晓玲崔尚金中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨 150001 大北农动物医学中心北京 100097

猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)和猪捷申病毒(PTV)是严重危害中国养猪业的重要病毒，经常继发或者混合感染。为了建立同时检测PTV、CSFV和PRRSV的多重RT-PCR(mRT-PCR)检测方法，本试验根据国内外发表的有关检测PRRSV、C... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)和猪捷申病毒(PTV)是严重危害中国养猪业的重要病毒，经常继发或者混合感染。为了建立同时检测PTV、CSFV和PRRSV的多重RT-PCR(mRT-PCR)检测方法，本试验根据国内外发表的有关检测PRRSV、CSFV和PTV的引物．对比GenBank中登录的这3种病毒的序列。选出3对引物．通过优化反应条件，建立了检测这3种病毒的mRT-PCR检测方法，并进行了特异性试验和敏感性试验。特异性试验表明，mRT-PCR可以特异扩增出PRRSV ORF6基因45lbp片段、CSFV Ems基因343bp片段、PTV 5 -UTR基因163bp片段，而对大肠杆菌、猪圆环病毒Ⅱ型、猪细小病毒、猪伪狂犬病毒和猪流感病毒不能扩出;敏感性试验表明，mRT-PCR方法中3种病毒的最低核酸检出量分别是7.11×102(PRRSV),7.8l×103，(CSFV)，8.43×102(PTV)拷贝数/μL，比单个RT-PCR敏感性略低。利用该方法对69份送检病料样品进行检测，其中PRRsV和CSFV混合感染检出率为4.35％。PRRSV和PTV的混合感染检出率为11.59％，CSFV和PTV的混合感染检出率为13.04％，3种病毒的混合感染检出率为8.70％，与单个RT-PCR检测结果对比，符合率为98．6％。该方法快速简便，可以作为疾病的初步筛选。对临床早期诊断和流行病学调查具有重要意义。

关键词：猪繁殖障碍 RNA病毒多重RT-PCR检测临床应用

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鸭β-防御素5基因的分离、鉴定及其生物学作用的研究

鸭β-防御素5基因的分离、鉴定及其生物学作用的研究

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第二届全国禽病分子生物技术青年学者论坛

作者：张可心蔺利娟韩宗玺邵昱昊刘胜旺马得莹东北农业大学动物营养研究所黑龙江哈尔滨 150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物营养研究所黑龙江哈尔滨 150030

为克隆与表达鸭β-防御素5(AvBD5)基因及测定其生物学特性，本研究采用RT-PCR方法从鸭肺脏组织中扩增到鸭AvBD5，将测得的序列与已发现的禽β-防御素和部分哺乳类动物β-防御素的氨基酸序列构建进化树进行同源性分析。结果显示鸭AvBD5 c... 详细信息

为克隆与表达鸭β-防御素5(AvBD5)基因及测定其生物学特性，本研究采用RT-PCR方法从鸭肺脏组织中扩增到鸭AvBD5，将测得的序列与已发现的禽β-防御素和部分哺乳类动物β-防御素的氨基酸序列构建进化树进行同源性分析。结果显示鸭AvBD5 cDNA大小为201 bp，编码66个氨基酸残基，内含6个位置保守的半胱氨酸残基，分别在分子内形成Cys1-Cys5，Cys2-Cys4，Cys3-Cys6共3对二硫键，与鸡AvBD5氨基酸同源性高达97％。进一步将其亚克隆到大肠杆菌pGEX-6p-1载体中进行原核表达。重组GST融合蛋白经纯化后，通过菌落计数法测定其体外抗菌活性，盐离子浓度对其抗菌活性的影响，以及该重组GST融合蛋白对溶血活性的影响。鸭AvBD5重组蛋白分子量约为32 ku，具有良好的抗菌活性，对11种细菌均有不同程度的抑制作用，高盐浓度对其抗菌活性有一定影响。此外，该重组蛋白对鸭血红细胞无明显溶血活性。

关键词：鸭β-防御素重组蛋白分离鉴定生物学作用

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鸭β-防御素5基因的分离、鉴定及其生物学作用

鸭β-防御素5基因的分离、鉴定及其生物学作用

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中国林牧渔业经济学会饲料经济专业委员会第八届学术交流大会

作者：张可心蔺丽娟韩宗玺邵昱昊刘胜旺马得莹东北农业大学动物营养研究所黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物营养研究所黑龙江哈尔滨150030

为克隆与表达鸭β-防御素5(AvBD5)基因及测定其生物学特性，本研究采用RT-PCR方法从鸭肺脏组织中扩增到鸭AvBD5，将测得的序列与已发现的禽β-防御素和部分哺乳类动物β-防御素的氨基酸序列构建进化树进行同源性分析。结果显示鸭AvBD5 cDNA大小为201bp，编码66个氨基酸残基，内含6个位置保守的半胱氨酸残基，分别在分子内形成Cys1-Cys5，Cys2-Cys4，Cys3-Cys6共3对二硫键，与鸡AvBD5氨基酸同源性高达97％。进一步将其亚克隆到大肠杆菌pGEX-6p-1载体中进行原核表达。重组GST融合蛋白经纯化后，通过菌落计数法测定其体外抗菌活性，盐离子浓度对其抗菌活性的影响，以及该重组GST融合蛋白对溶血活性的影响。鸭AvBD5重组蛋白分子量约为32 ku，具有良好的抗菌活性，对11种细菌均有不同程度的抑制作用，高盐浓度对其抗菌活性有一定影响。此外，该重组蛋白对红细胞溶血活性极低。

关键词：鸭β-防御素5基因生物学特性抗菌活性重组蛋白

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西尼罗病毒NSl蛋白特异性单克隆抗体的制备与鉴定

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中国免疫学杂志 2011年第6期27卷 529-532页

作者：马健男杨涛徐青元孙恩成林燕刘霓红杨银辉李文京步志高吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室哈尔滨150001 军事医学科学院微生物流行病研究所、病原微生物生物炎全国家重点实验室北京100071 中国动物疫病预防控制中心北京100125

目的：制备针对西尼罗病毒NSl蛋白的特异性单克隆抗体。方法：以原核表达的重组NSI蛋白为免疫原，免疫BALB／c小鼠并通过常规杂交瘤技术将免疫后小鼠脾细胞与SP2／O细胞进行融合。以真核表达的重组NSl蛋白为检测用抗原，建立间接ELISA... 详细信息

目的：制备针对西尼罗病毒NSl蛋白的特异性单克隆抗体。方法：以原核表达的重组NSI蛋白为免疫原，免疫BALB／c小鼠并通过常规杂交瘤技术将免疫后小鼠脾细胞与SP2／O细胞进行融合。以真核表达的重组NSl蛋白为检测用抗原，建立间接ELISA检测方法筛选分泌NSl蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞。并利用Western blot和IFA试验对所获得的单克隆抗体进行鉴定。结果：共获得了2株稳定分泌NSl蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为WN-1CIO和WN-3D10，其亚类鉴定分别属于IgG2z和IgG1o这2株单克隆抗体均能与西尼罗病毒NSl蛋白和病毒抗原发生特异性反应，而与日本脑炎病毒无交叉反应。结论：本实验成功制备出针对西尼罗病毒NSI蛋白的特异性单克隆抗体，为我国建立西尼罗病毒与日本脑炎病毒的血清学鉴别诊断方法奠定了基础。

关键词：西尼罗病毒 NSl蛋白单克隆抗体

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禽网状内皮组织增生病诊断与防制研究进展

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畜牧兽医科技信息 2011年第5期27卷 12-13页

作者：吴俊铭任晓峰邓小芸王笑梅东北农业大学动物医学学院哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150001 黑龙江科技职业学院双城150111

禽网状内皮组织增生症(Reticuloendotheliosis,RE)是禽类一种重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。近年来,鸡群中REV流行比较严重;REV与马立克氏病病毒(Marek's disease virus,MDV)、鸡贫血病病毒(Chicken infectious anemia,CAV)和J亚... 详细信息

禽网状内皮组织增生症(Reticuloendotheliosis,RE)是禽类一种重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。近年来,鸡群中REV流行比较严重;REV与马立克氏病病毒(Marek's disease virus,MDV)、鸡贫血病病毒(Chicken infectious anemia,CAV)和J亚群禽白血病病毒(Subgroup J Avian Leukosis Virus,ALV-J)等几种免疫抑制性病毒的混合感染也比较普遍。鉴于REV正越来越受到重视。本文就RE的诊断和综合防制作一综述。

关键词：禽网状内皮组织增生病(RE) 诊断防制

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兔多杀性巴氏杆菌热休克蛋白60基因的原核表达及抗原性分析

兔多杀性巴氏杆菌热休克蛋白60基因的原核表达及抗原性分析

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中国畜牧兽医学会2011学术年会

作者：卢艳郭东春刘家森原冬伟姜骞司昌德林欢崔玉东曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物研究室黑龙江哈尔滨 150001 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆 163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物研究室黑龙江哈尔滨 150001 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆 163319

本试验旨在通过对兔*** Hsp60蛋白进行原核表达，对其抗原性进行研究。western blot检测结果证实，重组蛋白Hsp60与Pm阳性兔血清可产生特异反应，说明其具有良好的抗原性。本研究为*** Hsp60的免疫佐剂功能及其在细胞中定位的研究奠定... 详细信息

本试验旨在通过对兔*** Hsp60蛋白进行原核表达，对其抗原性进行研究。western blot检测结果证实，重组蛋白Hsp60与Pm阳性兔血清可产生特异反应，说明其具有良好的抗原性。本研究为*** Hsp60的免疫佐剂功能及其在细胞中定位的研究奠定基础。

关键词：兔巴氏杆菌热休克蛋白60 原核表达抗原性

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猪捷申病毒8型rVP1-ELISA方法的建立及初步应用

猪捷申病毒8型rVP1-ELISA方法的建立及初步应用

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中关村全球农业生物技术创新论坛

作者：胡峰刘朝霞胡泉博崔尚金刘杉杉赵亚荣吕超超王贵华蔺文成王晓玲张超范王朝中国农业科学院哈尔滨兽医研究所善医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室，黑龙江哈尔演 150001 大北农动物医学中心北京 100097

为建立猪捷申病毒(PTV)抗体检测方法，根据PTV-8 Jilin，2003的VP1基因组设计一对引物，利用RT-PCR扩增VPI基因,然后克隆至原核表达载体pET-30a中，获得重组质粒pET-VP1．并利用大肠杆菌Rosetta高效表达VP1蛋白。经鉴定表达的重组蛋白... 详细信息

为建立猪捷申病毒(PTV)抗体检测方法，根据PTV-8 Jilin，2003的VP1基因组设计一对引物，利用RT-PCR扩增VPI基因,然后克隆至原核表达载体pET-30a中，获得重组质粒pET-VP1．并利用大肠杆菌Rosetta高效表达VP1蛋白。经鉴定表达的重组蛋白主要以包涵体形式存在，分子量为36.2 ku，免疫印迹实验表明获得的重组蛋白具有良好的反应原性。应用***亲和层析柱纯化重组蛋白后作为ELISA诊断包被抗原，建立间接ELISA方法。经反应条件优化确定最佳抗原包被浓度为1μg/mL;待检血清最佳稀释倍数为1：100．其作用时间为60min;酶标二抗最佳稀释倍数为1：5000．其作用时间为30min;封闭液为8％的脱脂乳;显色时间为10min;阴阳性临界值为0.3。利用建立的方法对临床样品进行检测并与IFA作比对试验，结果表明该方法特异、敏感、重复性较好，适于PTV抗体检测。这为PTV抗体检测和流行病学调查提供了一种简便、快速的血清学检测方法。

关键词：猪捷申病毒抗体检测基因表达蛋白包被抗原间接ELISA法

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