检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2010年第9期32卷 659-663页

作者：邓小芸祁小乐高玉龙高宏雷秦立廷高立王永强王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 黑龙江畜牧兽医职业学院黑龙江双城150111

为建立网状内皮组织增生病病毒(REV)的反向遗传操作系统,本研究分别以6个含有连续并且部分重叠的REV HLJR0901株基因组片段的重组质粒为模板,通过重叠延伸PCR(SOE PCR)和酶切拼接将HLJR0901的全基因组克隆于pBluescriptⅡ载体中,并在基... 详细信息

为建立网状内皮组织增生病病毒(REV)的反向遗传操作系统,本研究分别以6个含有连续并且部分重叠的REV HLJR0901株基因组片段的重组质粒为模板,通过重叠延伸PCR(SOE PCR)和酶切拼接将HLJR0901的全基因组克隆于pBluescriptⅡ载体中,并在基因组中通过改变核苷酸(C2250G)消除了其中的MscⅠ酶切位点作为分子标签,构建了REV感染性分子克隆pBlu-mHLJR0901。测序结果表明,REV HLJR0901株前病毒DNA全长为8284bp。将pBlu-mHLJR0901转染鸡胚成纤维细胞(CEF)进行病毒拯救,间接免疫荧光、PCR、测序及电镜观察表明拯救出REV。其拯救的REV在CEF细胞上具有与亲本毒相似的复制特性。该反向遗传操作系统的建立为REV的深入研究提供了有效的技术操作平台。

关键词：网状内皮组织增生病感染性分子克隆病毒拯救

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牛呼吸道合胞体病毒研究进展

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中国奶牛 2010年第9期 1-4页

作者：冯军科薛飞朱远茂任宪刚史鸿飞高欲燃中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室哈尔滨150001

牛呼吸道合胞体病毒（bovine respiratory syncytial virus,BRSV）是引起犊牛呼吸道疾病的主要病原之一。本病早在1968年就有记载,1970年BRSV首次从患有呼吸道疾病的牛体中分离到[1]。其危害性在于BRSV感染发病率很高,达到60%～80%,死... 详细信息

牛呼吸道合胞体病毒（bovine respiratory syncytial virus,BRSV）是引起犊牛呼吸道疾病的主要病原之一。本病早在1968年就有记载,1970年BRSV首次从患有呼吸道疾病的牛体中分离到[1]。其危害性在于BRSV感染发病率很高,达到60%～80%,死亡率在一些爆发中也能达到20%以上[2,3]。本病多发于秋冬季节,

关键词：牛呼吸道合胞体病毒呼吸道疾病 virus 秋冬季节发病率死亡率病原犊牛

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通过暂时免疫抑制研究跨膜蛋白C末端缺失对EIAV疫苗株EIAV_(FDDV12)体内复制的影响

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中国预防兽医学报 2010年第11期32卷 829-833页

作者：姜成刚马建林跃智赵立平吕晓玲华育平刘娣周建华黑龙江省农业科学院畜牧研究中心博士后工作站黑龙江哈尔滨150086 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北林业大学博士后流动站黑龙江哈尔滨150086

马传染性贫血病毒(EIAV)减毒疫苗是世界首例慢病毒疫苗,但其作用机理尚不明了。我们的前期研究发现EIAV疫苗株EIAVFDDV12编码跨膜蛋白gp45的基因在马体内发生高频率G2230A点突变形成终止子,使该蛋白C末端出现154个氨基酸的截短。为了探... 详细信息

马传染性贫血病毒(EIAV)减毒疫苗是世界首例慢病毒疫苗,但其作用机理尚不明了。我们的前期研究发现EIAV疫苗株EIAVFDDV12编码跨膜蛋白gp45的基因在马体内发生高频率G2230A点突变形成终止子,使该蛋白C末端出现154个氨基酸的截短。为了探讨该截短蛋白对EIAV疫苗株生物学特性的作用,本研究以EIAV弱毒疫苗株感染性克隆基础上,构建了gp45截短型感染性克隆,脂质体转染细胞,增殖传代,获得病毒株EIAVFDDVTM-36,接种到马体内。在接种后167 d内未观察到临床症状,连续注射10 d地塞米松以暂时抑制免疫系统,并用迟发性超敏反应和淋巴细胞增殖实验评价免疫抑制效果。结果显示,截短型跨膜蛋白疫苗株EIAVFDDVTM-36接种组免疫抑制前后病毒载量和中和抗体效价差异不显著,而完整型跨膜蛋白疫苗株感染性克隆EIAVFDDVTM-45接种组4匹马中3匹免疫抑制后病毒载量显著上升,同时组内中和抗体效价明显提高。以上结果表明,马体特异性免疫压力对EIAVFDDVTM-36复制无影响,而对亲本株EIAVFDDVTM-45复制有抑制,显示跨膜蛋白截短型EIAV作为疫苗更为安全。但免疫抑制造成的gp45跨膜蛋白未截短型疫苗株感染性克隆体内病毒载量升高,可以促使机体产生更高的中和抗体效价,提示该疫苗的安全性和有效性在一定程度内呈负相关(相互制约)。因此,安全性和有效性的平衡是慢病毒减毒疫苗研发需注意的重要因素。

关键词：马传染性贫血病毒跨膜蛋白截短突变体内复制免疫抑制

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从驴体内分离一株马流感病毒及其HA基因的遗传特征分析

从驴体内分离一株马流感病毒及其HA基因的遗传特征分析

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会

作者：戚亭郭巍戴伶俐李雪峰何娜盛明巍赵立平李红梅相文华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室

2007年,中国新疆地区暴发马流感疫情,我们从新疆乌鲁木齐自治区发病驴体内分离了一株马流感病毒,命名为A/驴/新疆/5/2007。为了分析这个新分离株的遗传特征,根据GenBank上登录的EIV序列,设计了扩增H3N8亚型EIV HA基因的特异性引物,并扩... 详细信息

2007年,中国新疆地区暴发马流感疫情,我们从新疆乌鲁木齐自治区发病驴体内分离了一株马流感病毒,命名为A/驴/新疆/5/2007。为了分析这个新分离株的遗传特征,根据GenBank上登录的EIV序列,设计了扩增H3N8亚型EIV HA基因的特异性引物,并扩增了该株HA基因。对HA蛋白的序列分析、糖基化位点分析以及遗传进化分析表明,A/驴/新疆/5/2007属于美洲系马流感病毒佛罗里达2亚型。A/驴/新疆/5/2007与我国今年来的流行毒株同源性最高,而与我国上世纪的流行毒株,如A/马/青海/1/1994,序列同源性较远。并且,与目前流行的疫苗株相比,A/驴/新疆/5/2007处在不同的进化分支里。这表明我国需要进一步加强对H3N8亚型马流感病毒的监测。

关键词：马流感病毒驴分离序列分析

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抗牛γ-干扰素特异性单克隆抗体的制备

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黑龙江畜牧兽医 2010年第1期 101-102页

作者：林靖凯赵海玲杜艳芬王春来刘慧芳司微王聃刘思国李广兴广西大学动物科学技术学院广西南宁530004 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物科学学院黑龙江哈尔滨150030

为了制备抗牛γ-干扰素(IFN-γ)的单克隆抗体(McAb),并对其部分生物学特性进行初步研究,试验用重组牛IFN-γ蛋白免疫小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术和间接ELISA方法进行试验.结果表明:共获得5株抗IFN-γ的单克隆抗体,Ig亚类鉴定均为IgGI,... 详细信息

为了制备抗牛γ-干扰素(IFN-γ)的单克隆抗体(McAb),并对其部分生物学特性进行初步研究,试验用重组牛IFN-γ蛋白免疫小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术和间接ELISA方法进行试验.结果表明:共获得5株抗IFN-γ的单克隆抗体,Ig亚类鉴定均为IgGI,轻链为k链;经Weatern-blot试验证实5株McAb均能与IFN-γ发生特异性反应,而与其他蛋白不发生反应,特异性好;以5株分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株制备腹水,效价均达到1:50 000以上.

关键词：牛γ-干扰素蛋白免疫单克隆抗体

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猪传染性胸膜肺炎的诊断技术

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兽医导刊 2010年第9期 38-40页

作者：谢芳张艳禾司微刘思国王春来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001

猪传染性胸膜肺炎（PCP）,是一种高度传染性、致死性的呼吸系统传染病。该病的主要特征是急性与亚急性病例呈现纤维素性出血性胸膜肺炎、慢性病例呈现纤维素性坏死性胸膜肺炎。1957年,英国人Pattison等首次发现该病,目前已在世界各国广... 详细信息

猪传染性胸膜肺炎（PCP）,是一种高度传染性、致死性的呼吸系统传染病。该病的主要特征是急性与亚急性病例呈现纤维素性出血性胸膜肺炎、慢性病例呈现纤维素性坏死性胸膜肺炎。1957年,英国人Pattison等首次发现该病,目前已在世界各国广泛流行,造成巨大的经济损失,严重阻碍了世界养猪业的健康发展,

关键词：猪传染性胸膜肺炎诊断技术呼吸系统传染病纤维素性经济损失亚急性致死性出血性

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禽网状内皮组织增生症流行现状及检测技术研究进展

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动物医学进展 2010年第9期31卷 93-96页

作者：邓小芸祁小乐高玉龙高宏雷秦立廷王永强王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 黑龙江畜牧兽医职业学院黑龙江双城150111

禽网状内皮组织增生症(RE)是禽类一种重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。近年来,国内外鸡群中网状内皮组织增生症病毒(REV)流行比较严重;REV与马立克病病毒(MDV)、鸡贫血病病毒(CAV)和J亚群禽白血病病毒(Avianleukosis virus subgroup J,AL... 详细信息

禽网状内皮组织增生症(RE)是禽类一种重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。近年来,国内外鸡群中网状内皮组织增生症病毒(REV)流行比较严重;REV与马立克病病毒(MDV)、鸡贫血病病毒(CAV)和J亚群禽白血病病毒(Avianleukosis virus subgroup J,ALV-J)几种免疫抑制性病毒的混合感染在我国部分养鸡场中均普遍存在,使得鸡群处于免疫力低下的状态,导致禽流感、新城疫等重要疫苗免疫失败,并容易造成继发感染,使疫病的诊断和防控难度加大。另外,REV可以整合到MDV和鸡痘病毒(Fowlpox virus,FPV)基因组中,从而导致商品化疫苗受到污染,并可用做将外源基因插入到鸡和哺乳动物细胞内的表达载体;基于REV传统检测方法的基础上,新型的分子生物学检测技术如PCR、实时荧光PCR、LAMP提高了诊断REV的敏感性和特异性。

关键词：禽网状内皮组织增生症流行感染基因重组检测技术

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牛病毒性腹泻病毒重组E2蛋白多克隆抗体的制备及鉴定

牛病毒性腹泻病毒重组E2蛋白多克隆抗体的制备及鉴定

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会

作者：高欲燃朱远茂史鸿飞任宪刚冯军科于作薛飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室

为制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)重组E2蛋白兔源多克隆抗体,利用已有的表达E2蛋白的重组质粒pET30a-E2转化表达菌BL21(DE3),经培养诱导表达出重组E2蛋白,western blot显示纯化的重组E2蛋白能够与BVDV阳性血清反应。用纯化的重组E2蛋白免... 详细信息

为制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)重组E2蛋白兔源多克隆抗体,利用已有的表达E2蛋白的重组质粒pET30a-E2转化表达菌BL21(DE3),经培养诱导表达出重组E2蛋白,western blot显示纯化的重组E2蛋白能够与BVDV阳性血清反应。用纯化的重组E2蛋白免疫新西兰白兔制备了多克隆抗体,病毒中和试验测定其中和抗体效价为1:2 048,间接免疫荧光和免疫印迹试验证实其具有良好的反应性和特异性。本研究所制备的BVDV重组E2蛋白兔源多克隆抗体可应用于国内BVDV的检测,同时为进一步建立检测BVDV E2蛋白的ELISA诊断方法奠定了基础。

关键词：牛病毒性腹泻病毒 E2蛋白表达多克隆抗体

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表达FMDV Asia 1 VP1基因重组BHV-1的构建

表达FMDV Asia 1 VP1基因重组BHV-1的构建

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会

作者：朱远茂高欲燃于作董秀梅吕闯薛飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室

为了构建表达FMDV Asia1（Asia1 IND 49197）VP1重组BHV-1,首先人工合VP1全基因并引入限制性内切酶XabⅠ和KpnⅠ,通过酶切连接等生物学方法用VP1基因替换本实验室前期构建好的转移载体pGEMT-gE-/LacZLacZ基因,从而构建获得含有巨细胞病... 详细信息

为了构建表达FMDV Asia1（Asia1 IND 49197）VP1重组BHV-1,首先人工合VP1全基因并引入限制性内切酶XabⅠ和KpnⅠ,通过酶切连接等生物学方法用VP1基因替换本实验室前期构建好的转移载体pGEMT-gE-/LacZLacZ基因,从而构建获得含有巨细胞病毒（Cytomegalovirus,CMV）早期启动子和BGH PolyA调节信号及VP1的完整表达盒同时含有BHV-1同源重组上下游臂的转移载体。采用磷酸钙介导转染法将该转移载体与前期获得的gE基因缺失并表达LacZ基因的重组病毒rBHV-1/gE-/LacZ基因组DNA共转染牛鼻甲细胞,采通过反向病毒蚀斑筛选,获得表达VP1基因的重组病毒rBHV-1/gE-/AsiaVP1。PCR鉴定结果表明VP1基因成功重组到rBHV-1/gE-/AsiaVP1基因组中,间接免疫荧光试验和Western blot证实VP1基因在rBHV-1/gE-/AsiaVP1感染的细胞中获得了表达。在MDBK细胞中连续传25代,PCR鉴定结果表明VP1基因在rBHV-1/gE-/AsiaVP1中稳定存在。rBHV-1/gE-/AsiaVP1与亲本病毒rBHV-1/gE-/LacZ的TCID测定结果分别是10/mL、10/mL,表明他们之间的增殖能力相似。

关键词：口蹄疫病毒 VP1基因牛疱疹病毒1型

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牛传染性鼻气管炎病毒gE蛋白单抗的制备及鉴定

牛传染性鼻气管炎病毒gE蛋白单抗的制备及鉴定

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会

作者：于作朱远茂高欲燃董秀梅吕闯薛飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室

为了制备牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的特异性单克隆抗体(MAb),本研究根据GenBank登录的IBRV gE基因序列设计一对特异性引物,扩增出长350 bp的gE基因片段,定向克隆到pET-32a(+)表达载体中,然后转化BL21表达菌,经过IPTG诱导表达,获得了... 详细信息

为了制备牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的特异性单克隆抗体(MAb),本研究根据GenBank登录的IBRV gE基因序列设计一对特异性引物,扩增出长350 bp的gE基因片段,定向克隆到pET-32a(+)表达载体中,然后转化BL21表达菌,经过IPTG诱导表达,获得了可溶性重组gE蛋白。利用Ni柱亲和层析法纯化重组gE蛋白,免疫印迹试验检测证明其具有良好的抗原性和特异性。以纯化的gE蛋白为免疫原,免疫6周龄～8周龄Balb/c小鼠,免疫3次后,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,利用间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞株,并对其生物学特性进行研究。结果共获得2株能稳定分泌抗gE MAb的杂交瘤细胞,将其命名为1E4和3F11。间接免疫荧光试验表明,2株单抗均可与IBRV/gE+株发生特异性的反应,与IBRV/gE-株不反应。这些MAb的研制为IBRV gE缺失标记疫苗株和自然感染株的鉴别诊断提供了物质基础。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒 gE基因单克隆抗体

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