检索结果-内蒙古大学图书馆

江苏农业学报 2019年第4期35卷 874-879页

作者：肖春婷廉传江易诚陈洪岩东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室黑龙江哈尔滨150069 东北林业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150040

为确定gga-miR-7b与SNCA的靶向关系以及检测他们在MDV超强毒株Md5感染SPF抗性鸡(B21单倍型)和易感鸡(B19单倍型)后5 d、14 d、25 d脾脏中的表达量。利用TargetScan、miRBD软件预测gga-miR-7b的靶基因,通过双荧光素酶报告基因检测系统体... 详细信息

为确定gga-miR-7b与SNCA的靶向关系以及检测他们在MDV超强毒株Md5感染SPF抗性鸡(B21单倍型)和易感鸡(B19单倍型)后5 d、14 d、25 d脾脏中的表达量。利用TargetScan、miRBD软件预测gga-miR-7b的靶基因,通过双荧光素酶报告基因检测系统体外验证gga-miR-7b与SNCA之间的靶向关系。qRT-PCR检测SNCA和gga-miR-7b在B21、B19感染Md5脾脏中的表达量。荧光素酶活性结果显示,gga-miR-7b与SNCA-wt-3′UTR共转染后显著抑制萤火虫荧光素酶活性(P<0.05),对SNCA-mut-3′UTR活性无显著影响。qRT-PCR结果显示,SNCA在B21、B19中,Md5感染5 d均显著上调表达(P<0.05),Md5感染25 d时SNCA在B21中极显著上调表达(P<0.01),在B19中极显著下调表达(P<0.01)。gga-miR-7b在Md5感染14 d,在B21中显著上调表达而在B19中显著下调表达(P<0.05),Md5感染25 d,gga-miR-7b在B21、B19中均极显著上调表达(P<0.01)。综上所述,SNCA是gga-miR-7b的靶基因。gga-miR-7b和SNCA可能与MD抗性/易感性以及MD肿瘤转化有关。

关键词： gga-miR-7b SNCA 靶向关系表达分析

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伏马毒素B_1适配体的筛选及其快速定量检测方法的建立

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动物营养学报 2018年第9期30卷 3740-3750页

作者：周妍刁晨曦张圆圆陆涛峰赵丽丽陈洪岩东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069 牡丹江师范学院生命科学与技术学院牡丹江157011

本研究旨在获得伏马毒素B1特异性适配体并利用其和胶体金的作用建立伏马毒素B1的快速检测方法。通过非固定靶标的指数富集配体系统进化技术筛选获得伏马毒素B1的适配体,并用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法测定所获适配体的亲和力和特异性... 详细信息

本研究旨在获得伏马毒素B1特异性适配体并利用其和胶体金的作用建立伏马毒素B1的快速检测方法。通过非固定靶标的指数富集配体系统进化技术筛选获得伏马毒素B1的适配体,并用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法测定所获适配体的亲和力和特异性,建立基于适配体的胶体金快速定量检测方法。结果表明:筛选得到的伏马毒素B1适配体F102亲和力解离常数为(42.1±4.0)nmol/L;建立的胶体金检测方法简便、快速、特异性强;样品检测结果与液相色谱结果的相对误差低于15.7%。因此,本研究利用筛选得到的适配体建立了可用于谷物和饲料中伏马毒素B1含量的快速定量检测方法。

关键词：非固定靶标法 SELEX技术伏马毒素B1 适配体胶体金

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鸡gga-miR-7b靶基因VDAC1-3’UTR双荧光素酶报告基因质粒的构建

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基因组学与应用生物学 2020年第2期39卷 533-538页

作者：肖春婷廉传江易诚陈洪岩东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069 东北林业大学生命科学学院哈尔滨150040

本研究以鸡gga-miR-7b作为研究对象,为了明确与肿瘤形成相关的关键基因VDAC1(Voltage-dependent anion channel 1)是否为gga-miR-7b的靶基因,深入研究gga-miR-7b对VDAC1基因的调控作用,本研究运用TargetScan和miRBD生物学软件预测了gga-miR-7b与VDAC1 m RNA的3’端非编码区(3’UTR)存在种子结合位点(GTCTTCC),并使用PCR克隆以及同源重组突变的方法构建VDAC1-3’UTR野生型和突变型双荧光素酶报告基因重组质粒,经SacⅠ和XbaⅠ双酶切鉴定及测序结果显示,片段大小符合且序列正确;成功构建了VDAC1-3’UTR野生型和突变型双荧光素酶报告基因重组质粒并命名为pmirGLOVDAC1-wt3’UTR和pmirGLO-VDAC1-mut3’UTR。本研究结果进一步为gga-miR-7b候选靶基因VDAC1的鉴定以及功能研究提供理论依据。

关键词：马立克氏病 gga-miR-7b VDAC1基因 pmirGLO-VDAC1-wt-3’UTR pmirGLO-VDAC1-mut-3’UTR

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MHC单倍体型无特定病原体鸭的培育

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实验动物科学 2018年第4期35卷 14-20页

作者：王兴童孟兴佟相慧陈洪岩韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物与比较医学团队兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069

目的培育MHC单倍型无特定病原体单倍型鸭。方法以国家禽类实验动物种子中心培育并保存的无特定病原体(SPF)麻鸭为基础,根据位于主要组织相容性复合体(MHC)核心区域的鸭抗原处理相关转运体分子(TAP)双拷贝基因(Tap1和Tap2)的多态性,分别... 详细信息

目的培育MHC单倍型无特定病原体单倍型鸭。方法以国家禽类实验动物种子中心培育并保存的无特定病原体(SPF)麻鸭为基础,根据位于主要组织相容性复合体(MHC)核心区域的鸭抗原处理相关转运体分子(TAP)双拷贝基因(Tap1和Tap2)的多态性,分别利用Tap1基因组短串联重复序列(STR)、TAP2的肽结合区序列以及Tap2全基因组序列的基因型分型,连续选育主要组织相容性复合体(MHC)单倍型SPF鸭。结果 F0代和F1代鸭的STR结果完全一致;F2和F3代鸭的Tap1和Tap2基因组序列完全纯合。连续6个世代的Tap2基因组序列分析,B3群鸭有2个位点发生突变,B1、B2和B4遗传学稳定。结论成功建立了4个MHC单倍体型SPF鸭群B1、B2、B3和B4,为深入开展鸭的免疫遗传学研究提供了实验动物支撑条件。

关键词：鸭主要组织相容性复合体无特定病原体单倍体型抗原处理相关转运体

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实验用猪感染模型研究概况

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实验动物与比较医学 2019年第4期39卷 253-259页

作者：王玉娥张贺陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室

传统的生物医学模型动物在实验设施中易于管理,可快速高效地应用于人类疾病相关基因的基础研究,但在某些情况下,它们无法代表人类生理的复杂性。猪在解剖学和生理学上与人类相似度很高,在人类疾病的相关研究中的应用广泛。本综述回顾了... 详细信息

传统的生物医学模型动物在实验设施中易于管理,可快速高效地应用于人类疾病相关基因的基础研究,但在某些情况下,它们无法代表人类生理的复杂性。猪在解剖学和生理学上与人类相似度很高,在人类疾病的相关研究中的应用广泛。本综述回顾了猪作为人类传染性疾病及自身传染病模型的应用概况,并概述了疫病感染模型的表征及特性。

关键词：实验动物猪感染模型

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猪内源性逆转录病毒在3种不同品系猪中的分布及序列特征研究

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中国预防兽医学报 2022年第11期44卷 1141-1148,1168页

作者：冯天悦 Kamal Shah 张文立付利芝李昌文王玉娥陈洪岩东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室/国家禽类实验动物资源库黑龙江哈尔滨150069 重庆市畜牧科学研究院兽医兽药研究所重庆402460

为研究猪内源性逆转录病毒(PERV)在不同猪种中的分布情况、序列结构、遗传变异、表达特性等特征,本研究选取大白猪、荣昌猪、五指山小型猪3种常见猪种为研究对象,分别设计特异性引物,检测各猪种肺组织中PERV 3种亚型(PERV-A、PERV-B、PE... 详细信息

为研究猪内源性逆转录病毒(PERV)在不同猪种中的分布情况、序列结构、遗传变异、表达特性等特征,本研究选取大白猪、荣昌猪、五指山小型猪3种常见猪种为研究对象,分别设计特异性引物,检测各猪种肺组织中PERV 3种亚型(PERV-A、PERV-B、PERV-C)的分布情况。结果显示,PERV在3种猪种中均有分布,其中PERV-A分布最广泛。进一步分段扩增3种猪的PERV-A全基因组序列并测序分析。全基因组序列进化树与囊膜(env)基因进化树分析均显示,东北地区的大白猪与荣昌猪PERV-A归为同一分支,亲缘关系较近;对测序结果进行生物信息学分析和蛋白二级结构预测,结果显示,PERV-A Gag蛋白和Pol蛋白的变异程度较大,有多种结构,但Env蛋白保守性较高,结构较为单一。采用荧光定量PCR法检测SPF大白猪不同组织中的PERV-A,结果显示从SPF大白猪心、肝、脾、肺、肾、扁桃体、淋巴结等7种组织中均检测出PERV-A,且在扁桃体等免疫器官组织中的转录水平最高。本研究共获得了5条不同猪种的PERV-A全基因组序列,首次鉴定了荣昌猪PERV全基因组序列,提示东北地区大白猪的引种来源可能与韩国猪种存在一定同源性,且五指山小型猪与荣昌猪、大白猪亲缘关系较远,有助于PERV分子特性的研究,并为评估不同猪种PERV在异种移植中的安全性并筛选合适猪种提供参考。

关键词：猪内源性逆转录病毒序列分析囊膜基因遗传进化分析

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猪NLRC5对PK15细胞中SLA Ⅰ类分子表达的调控研究

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中国预防兽医学报 2021年第7期43卷 746-752页

作者：刘英华马丽娜王有祺高彩霞陈洪岩东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物与比较医学创新团队/国家禽类实验动物资源库黑龙江哈尔滨150069

为探究猪核苷酸结合寡聚化结构域样受体(NLR)家族端酶募集(CARD)结构域-5(NLRC5)在PK15细胞中的表达情况及其对猪白细胞抗原I类分子(SLA I)表达的调控作用,本研究利用不同终浓度(1μg/mL、1.5μg/mL、2μg/mL)Poly I:C刺激PK15细胞后24... 详细信息

为探究猪核苷酸结合寡聚化结构域样受体(NLR)家族端酶募集(CARD)结构域-5(NLRC5)在PK15细胞中的表达情况及其对猪白细胞抗原I类分子(SLA I)表达的调控作用,本研究利用不同终浓度(1μg/mL、1.5μg/mL、2μg/mL)Poly I:C刺激PK15细胞后24 h,通过荧光定量PCR(qPCR)和western blot方法分别检测NLRC5 mRNA转录水平和蛋白的表达水平;设计NLRC5的3条siRNA和对照siRNA分别转染PK15细胞48 h后,分别采用qPCR和western blot检测PK15细胞中NLRC5 mRNA转录水平和蛋白表达水平,从而筛选出最优敲低NLRC5表达的siRNA;将筛选出的最优siRNA和对照siRNA分别转染PK15细胞48 h后,采用qPCR分别检测PK15细胞中NLRC5和SLA I类分子mRNA的转录水平,采用western blot检测PK15细胞中NLRC5蛋白表达水平,通过流式细胞术检测PK15细胞表面SLA I类分子的表达。构建重组质粒pCAGGS-HA-NLRC5并鉴定正确后转染PK15细胞,48 h后,采用qPCR分别检测PK15细胞中NLRC5和SLA I类分子mRNA的转录水平,采用western blot检测PK15细胞中NLRC蛋白表达水平,通过流式细胞术检测PK15细胞表面SLA I类分子表达水平。结果显示,与正常PK15细胞相比,经不同浓度Poly I:C刺激后PK15细胞中NLRC5 mRNA转录水平和蛋白水平均显著升高(p<0.01)。siRNA的筛选结果显示,NLRC5-sus-3为最优siRNA;将其转染PK15细胞后的qPCR和流式细胞术检测结果显示,与转染对照siRNA的PK15细胞相比,敲低NLRC5的PK15细胞中SLA I类分子的mRNA转录水平(p<0.01)和细胞表面SLA I类分子的表达水平均显著降低(p<0.01);重组质粒pCAGGS-HA-NLRC5转染PK15细胞后的结果显示,NLRC5 mRNA转录水平和蛋白水平均显著增高(p<0.01),表明NLRC5在PK15细胞中获得了过表达。qPCR和流式细胞术结果显示,过表达NLRC5后的PK15细胞中SLA I类分子mRNA的转录水平(p<0.01)和其在细胞表面的表达量均升高(p<0.05)。综上所述,经Poly I:C刺激可促进PK15细胞中NLRC5的表达,且NLRC5对SLA I类分子的表达具有正调控作用。本实验是首次在猪源细胞中进行了NLRC5对SLA I类分子表达的调控研究,为进一步探究机体在病原感染过程中的免疫防御机制提供了新思路。

关键词： PK15细胞猪NLRC5 SLAⅠ类分子表达

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兔出血症病毒衣壳蛋白VP60基因克隆与序列分析

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中国预防兽医学报 2002年第5期24卷 321-324页

作者：刘怀然陈洪岩关云涛王云峰李昌文夏长友张立成中国农业科学院哈尔滨兽医研究所黑龙江省实验动物质量监督检验站黑龙江哈尔滨150001 兽医生物技术国家重点实验室西北农林科技大学畜牧兽医学院

自感染RHDV致死的兔肝脏组织中提纯病毒 ,提取病毒总RNA ,以RT_PCR方法扩增得到RHDVVP6 0基因全长片段 ,克隆到T载体中 ,经酶切分析及PCR鉴定后进行序列测定。同一毒株不同克隆产物进行 3次测序 ,测序结果已输送到GeenBank中 (注册号为A... 详细信息

自感染RHDV致死的兔肝脏组织中提纯病毒 ,提取病毒总RNA ,以RT_PCR方法扩增得到RHDVVP6 0基因全长片段 ,克隆到T载体中 ,经酶切分析及PCR鉴定后进行序列测定。同一毒株不同克隆产物进行 3次测序 ,测序结果已输送到GeenBank中 (注册号为AF45 376 1)。将测得序列与GeneBank中记录的RHDV不同分离株进行比较。比较结果表明 :各毒株间核苷酸的同源性为 91%～ 98% ,氨基酸同源性为 94%～ 99% ,氨基酸变异多发生在高变区 ,进一步证明了毒株的高度保守性 ,为明确我国RHDV地方株VP6 0蛋白的分子特征。

关键词：兔出血症病毒衣壳蛋白 VP60 基因克隆序列分析

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CAV-1感染MDCK中各IFN及受体分子表达谱的差异

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实验动物科学 2020年第3期37卷 1-5页

作者：孟兴佟相慧陈洪岩韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物与比较医学团队/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069

目的分析犬肾细胞系(MDCK)感染犬腺病毒1型(CAV-1)后各种干扰素(IFN)亚型及其受体分子转录水平的表达情况。方法建立犬IFN-β、IFN-β受体(IFNAR1)、IFN-λ1、IFN-λ1受体(IFN-λ1R)、IFN-λ3和IFN-λ3受体(IFN-λ3R)的染料法定量PCR方... 详细信息

目的分析犬肾细胞系(MDCK)感染犬腺病毒1型(CAV-1)后各种干扰素(IFN)亚型及其受体分子转录水平的表达情况。方法建立犬IFN-β、IFN-β受体(IFNAR1)、IFN-λ1、IFN-λ1受体(IFN-λ1R)、IFN-λ3和IFN-λ3受体(IFN-λ3R)的染料法定量PCR方法,分析了MDCK在PolyⅠ∶C处理和接种CAV-1后细胞内各IFN及受体分子转录水平的相对含量。结果正常MDCK细胞内存在较高含量的IFN-λ3R且含量显著高于其他IFN及受体分子的转录水平;用PolyⅠ∶C处理MDCK细胞24 h后,IFN-λ1R、IFN-λ3和IFN-λ3R的表达量均显著性上调,而IFN-β、IFN-λ1和IFNAR1几乎没变化;接种CAV-1后,IFN-α的含量急剧上升至6倍。结论MDCK细胞存在不同水平浓度的IFN分子及其受体转录产物,且在PolyⅠ∶C刺激和腺病毒感染时受体分子的表达谱不同。

关键词：犬肾细胞系干扰素受体转录表达水平

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兽用疫苗中替代方法的研究进展

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实验动物科学 2018年第1期35卷 67-71页

作者：王兴童韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学团队黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069

本文介绍了兽用疫苗效力检验和安全检验中替代方法的应用及研究进展,并提出适合建立替代方法的兽用疫苗,以期为我国兽用疫苗替代方法研究提供思路。

关键词：兽用疫苗安全性检验效力检验替代

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