检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2011年第8期33卷 658-660页

作者：柳金雄陈普成邬丽姜永萍陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为研究鸭病毒性肠炎病毒(DEV)基因组异构体的存在形式,本研究在已建立的以pCC1FOS为载体的DEV疫苗株基因文库基础上对DEV全序列进行了测定,并进一步对DEV基因组的异构体进行了研究。对261个重组fosmid中的DEV基因组片段的末端序列进行... 详细信息

为研究鸭病毒性肠炎病毒(DEV)基因组异构体的存在形式,本研究在已建立的以pCC1FOS为载体的DEV疫苗株基因文库基础上对DEV全序列进行了测定,并进一步对DEV基因组的异构体进行了研究。对261个重组fosmid中的DEV基因组片段的末端序列进行测序及序列分析,初步证明了DEV基因组有3种异构体,即P型、IS型和ILS型,未发现IL型的存在。并且,以上3种异构体在基因组中所占比例分别为77.1%、8.6%和14.3%。通过对11个重组fosmid的全序列测定,进一步确认了以上3种异构体的存在。该结果为DEV的分类提供了重要实验依据。

关键词：鸭病毒性肠炎病毒 fosmid文库异构体

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H9亚型禽流感病毒血凝素特异性单因子血清制备

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中国预防兽医学报 2011年第6期33卷 439-442页

作者：陈晓妹王飞张翼刘丽玲田国斌曾显营管雪婷程成陈化兰李雁冰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为制备特异性的H9亚型禽流感病毒(AIV)单因子血清,本研究分别将6株不同亚群的H9亚型AIV的血凝素(HA)基因以鸡偏嗜的密码子进行优化,经全基因合成插入高效真核表达载体pCAGGS中,构建的真核重组质粒转染293T细胞进行瞬时表达,间接免疫荧... 详细信息

为制备特异性的H9亚型禽流感病毒(AIV)单因子血清,本研究分别将6株不同亚群的H9亚型AIV的血凝素(HA)基因以鸡偏嗜的密码子进行优化,经全基因合成插入高效真核表达载体pCAGGS中,构建的真核重组质粒转染293T细胞进行瞬时表达,间接免疫荧光试验结果表明,重组质粒中的HA目的基因获得表达。将重组质粒以200μg/只的剂量免疫1月龄SPF鸡,6周后采血分离血清。交叉微量血凝抑制试验结果表明,血凝抑制效价可达8 log2～12 log2,灵敏度高,与其他AIV亚型抗原无交叉反应,型特异性强。

关键词：禽流感病毒 H9亚型真核表达重组质粒单因子血清

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H5N1亚型禽流感病毒感染小鼠肺组织蛋白质组分析

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中国预防兽医学报 2011年第4期33卷 261-264页

作者：梁立滨赵东明李俊平李雁冰施建忠姜永萍陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为鉴定禽流感病毒(AIV)感染状态下的差异表达蛋白,本研究将H5N1亚型AIV感染组与对照组小鼠肺组织蛋白样品分别进行双向电泳分离,并采用ImageMaster 2D Platinum 6.0软件进行分析。在AIV感染72h后,共有9个表达差异显著的蛋白点(ratio>... 详细信息

为鉴定禽流感病毒(AIV)感染状态下的差异表达蛋白,本研究将H5N1亚型AIV感染组与对照组小鼠肺组织蛋白样品分别进行双向电泳分离,并采用ImageMaster 2D Platinum 6.0软件进行分析。在AIV感染72h后,共有9个表达差异显著的蛋白点(ratio>2,p<0.05),而且该蛋白在感染组均呈上调表达。将差异蛋白进行串联质谱分析,并对其中7个蛋白进行鉴定,包括:interferon-induced protein with tetratricopeptide repeats 3(IFIT-3)、ATP依赖的干扰素反应蛋白1(ADIR1)、γ干扰素诱导的p47鸟苷三磷酸酶(IRG)、T细胞受体a TA27、气味受体S86、胞苷单磷酸激酶2(Cmpk2)和肌球蛋白。将前3个蛋白基因采用荧光定量PCR方法进行mRNA水平的验证,所获得的结果与双向电泳结果一致。本研究为在蛋白质组水平进一步分析H5N1亚型AIV与宿主相互作用奠定了基础。

关键词： H5N1亚型禽流感病毒双向凝胶电泳蛋白质组病原宿主相互作用

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表达猪白细胞介素2重组腺病毒的构建

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中国预防兽医学报 2011年第4期33卷 313-315页

作者：张健陈艳乔传玲杨焕良唐续辛晓光陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为构建表达猪白细胞介素2(IL-2)的复制缺陷型重组腺病毒,本研究提取经刀豆球蛋白A(Con A)刺激体外培养的长白猪外周血淋巴细胞总RNA,利用RT-PCR扩增猪IL-2基因,并克隆于质粒pIRES2-EGFP中,将含有IL-2及EGFP的基因片段亚克隆到腺病毒的... 详细信息

为构建表达猪白细胞介素2(IL-2)的复制缺陷型重组腺病毒,本研究提取经刀豆球蛋白A(Con A)刺激体外培养的长白猪外周血淋巴细胞总RNA,利用RT-PCR扩增猪IL-2基因,并克隆于质粒pIRES2-EGFP中,将含有IL-2及EGFP的基因片段亚克隆到腺病毒的穿梭质粒pDC315中,构建重组腺病毒穿梭质粒pDC315-IL-2-EGFP。利用脂质体转染方法将pDC315-IL-2-EGFP和腺病毒骨架质粒pBHGloxΔE1,E3Cre共转染HEK293细胞。根据腺病毒感染后形成的典型细胞病变及EGFP的荧光信号筛选重组腺病毒rAd-IL-2-EGFP。经western blot鉴定,结果表明获得了一株能够表达猪IL-2蛋白的重组腺病毒rAd-IL-2-EGFP。本研究为进一步研究猪IL-2在疫苗免疫中的增强作用及研制新型免疫增强剂奠定了基础。

关键词： IL-2 重组腺病毒基因表达

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一株H5亚型禽流感病毒NP蛋白两个鸡MHC分子限制性T细胞表位的鉴定

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中国预防兽医学报 2011年第6期33卷 457-460页

作者：侯艳霞郭莹莹沈楠吴春艳姜永萍王靖飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／疫病诊断中心黑龙江哈尔滨150001 国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为验证一株禽流感病毒(AIV)核蛋白(NP)中的3条T细胞表位候选肽NP89-97(PKKTGGPIY)、NP198-206(KRGINDRNF)和NP64-71(ERMVLSAF)的免疫原性,本研究构建了含有NP基因的重组质粒pCAGGS-NP,将其转染293T细胞,间接免疫荧光和western blot检测表明NP蛋白在293T细胞中获得表达。重组质粒免疫鸡后,用间接酶联免疫实验检测发现重组质粒在鸡体内能诱导产生相应的抗体。将多肽NP89-97、NP198-206、NP64-71和不相关肽N71-78(WRRQARYK)在体外刺激免疫后鸡的脾淋巴细胞,流式细胞术检测发现CD8+T淋巴细胞增殖分别为13.7%、11.9%、0.6%和0.4%;ELISA检测结果显示多肽NP89-97、NP198-206刺激后的淋巴细胞中IFN-γ的分泌量明显增加。本实验表明多肽NP89-97和NP198-206能在体外诱导活化的鸡淋巴细胞产生细胞毒性T淋巴细胞反应,为AIV NP的T细胞表位。该研究结果对研究禽类抗流感病毒的免疫机制及抗流感疫苗具有重要的意义。

关键词：禽流感病毒 NP蛋白 T细胞表位鉴定

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甲型H1N1流感病毒株的分离鉴定以及PR8株的相关基因对重组病毒增殖能力的影响

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中国预防兽医学报 2011年第7期33卷 517-520页

作者：李建辉刘春国张云刘明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为分离流感病毒,本研究将疑似甲型流感患者的咽喉拭子接种SPF鸡胚尿囊腔,经检测收获的鸡胚尿囊液具有血凝活性。采用流感病毒通用引物进行PCR扩增出8个基因节段,经测序与GenBank中登录的序列比对后确定该病毒株为2009年爆发的甲型H1N1... 详细信息

为分离流感病毒,本研究将疑似甲型流感患者的咽喉拭子接种SPF鸡胚尿囊腔,经检测收获的鸡胚尿囊液具有血凝活性。采用流感病毒通用引物进行PCR扩增出8个基因节段,经测序与GenBank中登录的序列比对后确定该病毒株为2009年爆发的甲型H1N1流感病毒,并命名为A/Harbin/LM/2009(H1N1),简称LM株。由于LM分离株在鸡胚中增殖能力比较弱,为提高其在鸡胚中的增殖能力,我们利用反向遗传技术将LM株的HA和NA基因与高增殖特性的人流感病毒细胞高产株PR8的另外6个节段进行"6+2"重配,获得拯救病毒,但该重配病毒血凝价并未显著提高。为进一步鉴定影响病毒增殖能力的基因,本研究将LM株所有节段以"7+1"的方式逐一与PR8的7个片段搭配构成完整的流感病毒基因组,分别得到8个重配病毒。结果显示分离株的PB1、PA、HA基因显著降低了重配病毒在鸡胚细胞中的增殖能力。

关键词：甲型H1N1流感病毒反向遗传重配增殖能力

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H5N1亚型禽流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

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中国预防兽医学报 2011年第6期33卷 476-478页

作者：崔佳莹李印于扬张文亮邓国华陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为制备抗H5N1禽流感病毒(AIV)的单克隆抗体(MAb),本研究以灭活的H5N1亚型A/Chicken/Guangdong/S2261/2009(H5N1GD261)株免疫4周龄～6周龄BALB/c雌鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,经间接ELISA及HI筛选获得了3株能稳定分泌抗HA的MAb杂交瘤细胞,分别命名为1A4、2F5和3D3。MAb亚类鉴定表明,2F5为IgM类,其它为IgG2a亚类,轻链均为κ链。经血凝抑制检测,3株MAb均能与H5亚型的AIV结合,并具有较好的型广谱性。

关键词：禽流感病毒血凝素单克隆抗体血凝抑制

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甲型H1N1流感病毒A/Sichuan/01/2009株反向遗传操作系统的建立

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中国兽医科学 2011年第5期41卷 448-452页

作者：张乾义张莹胡永浩娄慧姜永萍李雁冰田国斌邓国华施建忠关云涛杨焕良陈化兰甘肃农业大学甘肃兰州730070 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点实验室黑龙江哈尔滨150001

选取甲型H1N1流感病毒A/Sichuan/01/2009(SC/01)株为亲本毒株,构建了SC/01的八质粒反向遗传操作系统,并获得了甲型H1N1流感病毒救获株Rescue-A/Sichuan/01/2009(R-SC/01)。对救获毒株R-SC/01进行全基因序列测定,证明救获毒株与亲本毒株... 详细信息

选取甲型H1N1流感病毒A/Sichuan/01/2009(SC/01)株为亲本毒株,构建了SC/01的八质粒反向遗传操作系统,并获得了甲型H1N1流感病毒救获株Rescue-A/Sichuan/01/2009(R-SC/01)。对救获毒株R-SC/01进行全基因序列测定,证明救获毒株与亲本毒株的核苷酸序列完全一致。R-SC/01的小鼠半数感染量及受体结合特性与亲本野毒SC/01一致。SC/01反向遗传操作系统的成功建立为进一步开展甲型H1N1流感病毒的生物学特性研究,特别是跨宿主传播机制研究奠定了基础。

关键词：甲型H1N1流感病毒反向遗传操作系统受体结合能力

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两株鸭源H6N2亚型禽流感病毒的序列分析及对鸡的致病性研究

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中国预防兽医学报 2011年第4期33卷 270-275页

作者：丁晴微邓国华施建忠李印崔鹏飞齐瑛琳于杨崔佳莹邱伯根陈化兰湖南农业大学动物医学院湖南长沙410128 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为了解鸭源H6N2亚型禽流感病毒(AIV)的生物学特性,本研究对两株鸭源H6N2亚型AIV[A/duck/Hubei/Sd061/2008(HB/061/08)和A/duck/Fujian/S2080/2009(FJ/080/09)]进行序列分析和致病性试验。序列分析显示:两株病毒的HA和NA基因均来源于我国近年流行的H6亚型病毒株,但是HB/061/08株的内部基因可能来源于H9、H5等其他亚型。与病毒株HB/061/08NP、PA、PB2基因的核苷酸同源性最高的病毒株为A/environment/Hunan/2-84/2007(H9N2);与M、PB1和NS基因的核苷酸同源性最高的病毒株分别为A/duck/Zhejiang/11/2000(H5N1)、A/chicken/Hebei/7/2008(H9N2)和A/chicken/Henan/L1/2008(H9N2)。两株病毒的抗原差异性较显著,相关系数为0.49;用106EID50病毒剂量感染4周龄SPF鸡,结果显示FJ/080/09株不能感染鸡,而HB/061/08株在鸡体内能够高效复制,并通过咽喉和泄殖腔持续排毒。鸡群感染后第3d采取脏器样品,在气管和肺部能够检测到病毒存在,部分脏器和器官的组织学观察显示存在一定程度的病理变化。以上数据表明,H6亚型AIV在跨越不同宿主感染的传播过程中,对新宿主适应能力的差异导致对其致病性的差异。

关键词：禽流感病毒 H6N2 基因组分析抗原分析致病性

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H5亚型禽流感DNA疫苗pCAGGoptiHA5对鸭免疫保护效力的研究

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中国预防兽医学报 2011年第3期33卷 211-213页

作者：李俊平赵双成常晓飞柳金雄曾显营卫星辉李福基姜永萍陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 格兰柏生化科技有限公司香港999077

为评价H5亚型禽流感病毒(AIV)DNA疫苗pCAGGoptiHA5对鸭的免疫保护效力,本研究将pCAGGoptiHA5以20μg、30μg和50μg剂量免疫3周龄SPF鸭,首次免疫后3周加强免疫一次。2周后以105EID50的鸭源高致病力AIV由鼻腔攻毒,观察SPF鸭发病和死亡情... 详细信息

为评价H5亚型禽流感病毒(AIV)DNA疫苗pCAGGoptiHA5对鸭的免疫保护效力,本研究将pCAGGoptiHA5以20μg、30μg和50μg剂量免疫3周龄SPF鸭,首次免疫后3周加强免疫一次。2周后以105EID50的鸭源高致病力AIV由鼻腔攻毒,观察SPF鸭发病和死亡情况。分别于攻毒后3d、5d和7d采集喉头及泄殖腔拭子进行病毒分离,检测鸭排毒情况及免疫和攻毒后血凝抑制(HI)抗体、中和(NT)抗体的动态变化。结果表明:30μg和50μg免疫组均可对免疫鸭产生100%保护,而20μg剂量组则可对免疫鸭提供80%保护。

关键词：禽流感 DNA疫苗 pCAGGoptiHA5

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