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第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会

作者：姜永萍张洪波张平静于康震田国斌陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室农业部畜牧兽医总站

将H5亚型禽流感DNA疫苗pCAGGoptiHA5对SPF鸡、商品蛋鸡、鹅和鸭的免疫效力进行了实验室研究。pCAGGoptiHA5以10μg剂量加强免疫3周龄SPF鸡和5周龄商品蛋鸡,加强免疫后2周分别用100LD50的HPAIV A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[Gs/GD/1/96(H5N1)]鼻腔途径进行攻击,pCAGGoptiHA5以100μg剂量加强免疫4周龄本地鹅和金定鸭,加强免疫后2周分别用100LD50的HPAIVA/Duck/ShanghaiNanhui/16/2004(H5N1)[DK/SHNH/1604(H5N1)]鼻腔途径进行攻击,其免疫保护效力通过免疫和攻毒后的HI抗体反应水平、攻毒后的AGP抗体测定、病毒分离与滴定以及对发病率和死亡率的统计等几个方面来综合评价。结果,10μg pCAGGoptiHA5加强免疫可对SPF鸡形成100%完全保护(不发病、不致死、不排毒),10μg剂量pCAGGoptiHA5加强免疫可对商品蛋鸡形成100%的保护(不发病、不致死),100μg pCAGGoptiHA5加强免疫可对鹅和鸭均形成100%的保护(不发病、不致死)。结果表明,pCAGGoptiHA5作为免疫效果良好、成本低廉的DNA疫苗,有望成为预防H5亚型高致病力禽流感的高效、安全新型基因工程疫苗。

关键词：禽流感 H5亚型 DNA疫苗免疫效力

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禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗(H5亚型)研究与应用

禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗(H5亚型)研究与应用

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届全国会员代表大会暨第11次学术研讨会

作者：乔传玲于康震姜永萍李呈军田国彬王秀荣陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室及兽医生物技术国家重点实验室全国畜牧兽医总站

本研究利用DNA重组技术,以我国H5N1亚型禽流感病毒早期分离株的HA和NA基因为抗原基因供体,以高度成熟安全的鸡痘病毒疫苗株S-FPV-017为载体,构建了一株可共表达HA和NA基因的重组鸡痘病毒疫苗株。经细胞连续传代确证了重组病毒良好的遗... 详细信息

本研究利用DNA重组技术,以我国H5N1亚型禽流感病毒早期分离株的HA和NA基因为抗原基因供体,以高度成熟安全的鸡痘病毒疫苗株S-FPV-017为载体,构建了一株可共表达HA和NA基因的重组鸡痘病毒疫苗株。经细胞连续传代确证了重组病毒良好的遗传稳定性,经鸡体内连续传代证实了其毒力稳定性。大量的实验室研究与现地应用结果表明,该疫苗免疫后对鸡十分安全、无任何不良反应;免疫后1周可诱导免疫效力产生,免疫持续期可达10个月。

关键词：禽流感重组鸡痘病毒疫苗

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两株H5N1亚型禽流感病毒诱导的BALB/C小鼠细胞凋亡初步研究

两株H5N1亚型禽流感病毒诱导的BALB/C小鼠细胞凋亡初步研究

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十三次学术讨论会和中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十二次学术讨论会

作者：余丹丹张书霞陈化兰南京农业大学动物医学院南京农业大学动物医学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点实验室/兽医生物技术国家重点实验室

1 目的1997香港H5N1禽流感病毒感染人事件预见着流感流行进入了一个新的时代,因为这是首次完成未经中间宿主适应而直接由禽感染人并引起严重疾病和致人死亡事件。为了解H5N1亚型高致病性禽流感病毒致病机理,我们应用香港流感发生后几年... 详细信息

1 目的1997香港H5N1禽流感病毒感染人事件预见着流感流行进入了一个新的时代,因为这是首次完成未经中间宿主适应而直接由禽感染人并引起严重疾病和致人死亡事件。为了解H5N1亚型高致病性禽流感病毒致病机理,我们应用香港流感发生后几年中建立起的哺乳动物模型BALB/C小鼠来对这两株病毒感染并诱导细胞凋亡的能力进行研究。本文用A/Duck/Guangdong/40/2000(H5N1)和A/Duck/Guangxi/35/2001(H5N1)两株H5N1亚型毒株感染BALB/C小鼠后,应用了组织病理学的方法,研究高致病性禽流感病毒对哺乳动物的致病作用,以期为禽流感病毒对哺乳动物的致病机理提供新的思路。

关键词：禽流感病毒哺乳动物 BALB/C 细胞凋亡初步研究

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两株H5N1亚型禽流感病毒NS1基因诱导细胞凋亡的研究

两株H5N1亚型禽流感病毒NS1基因诱导细胞凋亡的研究

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十三次学术讨论会和中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十二次学术讨论会

目的:研究A/Duck/Guangdong/40/2000(H5N1)(简称DKGD/40/00)和A/Duck/Guangxi/35/2001(简称DKGX/35/01)两株H5N1亚型禽流感病毒的NS1基因对Hela细胞凋亡的影响,为该两株病毒的致病机理提供依据。材料与方法:病毒株A/Duck/Guangdong/40/2000(H5N1)(简称DKGD/40/00)和A/Duck/Guangxi/35/2001(H5N1)(简称DKGX/35/01)由哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室保存;10日龄的SPF鸡胚由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物中心提供;引物参照NS1基因序列保守区设计。并引入EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ两个酶切位点,由上海博亚生物技术有限公司合成;病毒NS1基因的克隆与表达

关键词：禽流感病毒 NS1 细胞凋亡

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两株H5N1亚型禽流感病毒诱导鸡胚成纤维细胞凋亡的初步研究

两株H5N1亚型禽流感病毒诱导鸡胚成纤维细胞凋亡的初步研究

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十三次学术讨论会和中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十二次学术讨论会

目的:为了弄清禽流感病毒的毒力强弱与细胞凋亡的关系,我们进行了生物学特性差异明显的A/Duck/Guangdong/40/2000(H5N1)和A/Duck/Guangxi/35/2001(H5N1)两株H5N1亚型禽流感病毒对鸡胚成纤维细胞的感染实验,并检测了细胞凋亡指标,以期为... 详细信息

目的:为了弄清禽流感病毒的毒力强弱与细胞凋亡的关系,我们进行了生物学特性差异明显的A/Duck/Guangdong/40/2000(H5N1)和A/Duck/Guangxi/35/2001(H5N1)两株H5N1亚型禽流感病毒对鸡胚成纤维细胞的感染实验,并检测了细胞凋亡指标,以期为该两株病毒的致病机理及相关比较研究提供参考依据。方法:用灭菌PBS将含有两株病毒的尿囊液分别以十倍比稀释到10-4,置于冰上。接种100μl禽流感病毒稀释液于鸡胚成纤维细胞上,37℃吸附30min,PBS洗涤3次,加入5ml 2%DMEM维持液。置37℃5%CO2培养箱培养,逐日观察,出现细胞病变时收集细胞供DNA抽提及流式细胞仪测试。

关键词：鸡胚成纤维细胞禽流感病毒初步研究

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镉致鸡脾淋巴细胞凋亡及对p53mRNA表达的影响

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中国环境科学 2004年第4期24卷 456-459页

作者：李金龙徐世文熊永忠李术王秀荣东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室及兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

应用吖啶橙/溴化乙锭荧光染色(AO/EB)法、DNA琼脂糖凝胶电泳及半定量RT-PCR法检测了氯化镉在浓度0～30μmol/L范围内对体外培养的鸡脾脏淋巴细胞凋亡及对p53mRNA表达的影响.结果表明,浓度为0～30μmol/L的镉能引起鸡脾脏淋巴细胞凋亡及... 详细信息

应用吖啶橙/溴化乙锭荧光染色(AO/EB)法、DNA琼脂糖凝胶电泳及半定量RT-PCR法检测了氯化镉在浓度0～30μmol/L范围内对体外培养的鸡脾脏淋巴细胞凋亡及对p53mRNA表达的影响.结果表明,浓度为0～30μmol/L的镉能引起鸡脾脏淋巴细胞凋亡及干扰p53mRNA的表达,低浓度镉引起的细胞凋亡与p53mRNA的表达密切相关,而高浓度的镉能够导致鸡脾脏淋巴细胞坏死.

关键词：镉鸡脾脏淋巴细胞凋亡坏死 p53mRNA

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表达H5亚型禽流感病毒HA基因的DNA疫苗免疫保护效力研究

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中国农业科学 2004年第7期37卷 1071-1075页

作者：姜永萍于康震邓国华田国斌乔传玲陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

表达高致病力禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1) [GD/1/96(H5N1)]HA基因的DNA疫苗质粒pCIHA5具有良好的免疫保护性,为了将其开发并应用于实际,对其免疫保护效力进行了进一步的研究。结果表明,用10、40、70、100和150g pCIHA... 详细信息

表达高致病力禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1) [GD/1/96(H5N1)]HA基因的DNA疫苗质粒pCIHA5具有良好的免疫保护性,为了将其开发并应用于实际,对其免疫保护效力进行了进一步的研究。结果表明,用10、40、70、100和150g pCIHA5和油苗1次免疫后,其免疫保护率分别为12.5%(1/8)、58.3%(7/12)、72.7%(8/11)、50.0%(6/12)、66.7%(8/12)和100%(12/12),其中70和100g剂量组的病毒分离结果为1/8和2/6;用剂量为5、20、35和50g pCIHA5分别免疫2次,免疫保护率分别为45.5%(5/11)、58.3%(7/12)、58.3%(7/12)和91.7%(11/12),5g的病毒分离结果为1/5,其余组未分离出病毒;pCIHA5免疫后AGP抗体均未检出,油苗免疫后其HI抗体虽高,但AGP抗体也呈阳性。结果显示,加强免疫应为DNA疫苗质粒pCIHA5的安全免疫方式,DNA疫苗质粒pCIHA5虽具有较为稳定的免疫原性和免疫保护性,但有必要进一步提高其在肌肉组织中的有效表达水平和抗体反应水平。

关键词：禽流感病毒血凝素基因 DNA疫苗免疫保护效力

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共表达禽流感病毒HA和NA基因的重组禽痘病毒在SPF鸡的免疫效力试验

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中国农业科学 2004年第4期37卷 605-608页

作者：乔传玲姜永萍于康震田国斌陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/农业部动物流感重点开放实验室及兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/农业部动物流感重点开放实验室及兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

将禽流感病毒A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)毒株的HA和NA2个基因同源重组到禽痘病毒基因组中,获得了能同时高效表达这2种蛋白的重组禽痘病毒(rFPV-HA-NA)。将rFPV-HA-NA经翅膀刺种途径接种8周龄SPF鸡,免疫后4周分别用10LD50的高致病力... 详细信息

将禽流感病毒A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)毒株的HA和NA2个基因同源重组到禽痘病毒基因组中,获得了能同时高效表达这2种蛋白的重组禽痘病毒(rFPV-HA-NA)。将rFPV-HA-NA经翅膀刺种途径接种8周龄SPF鸡,免疫后4周分别用10LD50的高致病力禽流感病毒(HPAIV)A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)和A/FPV/Rostock/34(H7N1)毒株进行攻击。结果重组禽痘病毒免疫鸡群诱导产生了高水平的抗体,能够完全抵抗H5N1和H7N1亚型病毒的致死性攻击;并可有效阻止病毒在泄殖腔的排出。而禽痘病毒免疫组和非免疫对照组在攻毒后全部发病并死亡。

关键词：禽流感病毒 HA NA 重组禽痘病毒免疫效力

来源：评论

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禽流感病毒N3亚型神经氨酸酶基因的克隆

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中国预防兽医学报 2004年第3期26卷 161-164页

作者：邓国华王秀荣张立春刘振勇乔传玲田国彬于康震陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

本研究应用11日龄SPF鸡胚增殖禽流感病毒标准株A/Duck/Germany/1215(H2N3),用LSTRIAZOL试剂盒提取病毒RNA,应用自行设计的NA基因半特异性引物进行RT＿PCR扩增,得到NA基因的全长DNA片段,克隆到PMD18＿T载体上,并进行鉴定和序列测定。测... 详细信息

本研究应用11日龄SPF鸡胚增殖禽流感病毒标准株A/Duck/Germany/1215(H2N3),用LSTRIAZOL试剂盒提取病毒RNA,应用自行设计的NA基因半特异性引物进行RT＿PCR扩增,得到NA基因的全长DNA片段,克隆到PMD18＿T载体上,并进行鉴定和序列测定。测定结果表明所获得的NA基因DNA片段长1451bp,编码469个氨基酸残基,与其他亚型的NA基因编码的氨基酸长度相一致。根据推导的氨基酸序列进行预测,该蛋白具有6个潜在的糖基化位点和19个半胱氨酸残基。与其他亚型的NA基因相比较发现克隆的NA基因符合神经氨酸的分子结构特征,本研究首次获得N3亚型NA基因全序列。

关键词：禽流感病毒神经氨酸酶 N3 NA基因克隆

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禽流感病毒N4亚型神经氨酸酶基因的克隆和序列分析

引用

中国兽医学报 2004年第3期24卷 212-215页

作者：王秀荣邓国华姜永萍乔传玲田国斌刘丽玲于康震陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室及兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 农业部畜牧兽医局

应用无特定病原体 (SPF)鸡胚增殖禽流感病毒 A/ Turkey/ Ontario/ 6 118/ 6 8(H8N4 )毒株 ,Tri Zol L S Reagent提取病毒 RNA,RT- PCR扩增神经氨酸酶 (NA)基因全片段 ,克隆到 p MD18- T载体上 ,并进行了鉴定和序列测定。所获得的 NA基... 详细信息

应用无特定病原体 (SPF)鸡胚增殖禽流感病毒 A/ Turkey/ Ontario/ 6 118/ 6 8(H8N4 )毒株 ,Tri Zol L S Reagent提取病毒 RNA,RT- PCR扩增神经氨酸酶 (NA)基因全片段 ,克隆到 p MD18- T载体上 ,并进行了鉴定和序列测定。所获得的 NA基因片段长 14 4 1bp,编码 4 90个氨基酸残基。根据推导的氨基酸序列进行预测 ,有 9个潜在的糖基化位点和2

关键词：禽流感病毒 N4亚型神经氨酸酶基因克隆序列分析鸡群生物学特征

来源：评论

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