检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2012年第4期34卷 257-261页

作者：田美杰葛金英王喜军冯娜马良帅磊苏华高玉伟夏咸柱步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130062 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为研制安全、有效的新型犬瘟热疫苗,本研究利用新城疫病毒(NDV)LaSota弱毒疫苗株反向遗传操作系统,构建出表达犬瘟热病毒(CDV)弱毒疫苗株Rockborn-20/8血凝素(H)蛋白的重组病毒rLa-CDV-H,并对其生物学特性进行鉴定,评估其作为犬瘟热活... 详细信息

为研制安全、有效的新型犬瘟热疫苗,本研究利用新城疫病毒(NDV)LaSota弱毒疫苗株反向遗传操作系统,构建出表达犬瘟热病毒(CDV)弱毒疫苗株Rockborn-20/8血凝素(H)蛋白的重组病毒rLa-CDV-H,并对其生物学特性进行鉴定,评估其作为犬瘟热活载体疫苗的安全性和有效性。通过免疫荧光和western blot试验证明了CDV H蛋白的正确表达;重组病毒株保持了LaSota亲本株的低致病性和高滴度鸡胚生长特性;重组病毒rLa-CDV-H接种12周龄比格犬后,可以诱导显著的CDV中和抗体反应。本研究表明重组病毒rLa-CDV-H具有作为犬瘟热重组病毒活载体疫苗的潜力。

关键词：犬瘟热病毒血凝素蛋白重组新城疫病毒

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抗蓝舌病病毒VP6和VP7蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

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中国预防兽医学报 2012年第5期34卷 412-414页

作者：魏鹏孙恩成刘霓红杨涛徐青元秦永丽赵晶冯瑜菲王文世张翠云吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 湖南农业大学动物医学学院湖南长沙410128

为制备针对蓝舌病病毒(BTV)的单克隆抗体(MAb),本研究利用血清型1型BTV(BTV1)免疫BALB/c鼠,将其脾淋巴细胞与SP2/0进行融合,并用BTV1包被ELISA板,通过间接ELISA方法筛选出3株稳定分泌抗BTV1的MAb的杂交瘤细胞株(2B10、3D4和4H8)。利用表... 详细信息

为制备针对蓝舌病病毒(BTV)的单克隆抗体(MAb),本研究利用血清型1型BTV(BTV1)免疫BALB/c鼠,将其脾淋巴细胞与SP2/0进行融合,并用BTV1包被ELISA板,通过间接ELISA方法筛选出3株稳定分泌抗BTV1的MAb的杂交瘤细胞株(2B10、3D4和4H8)。利用表达BTV1主要蛋白的真核表达重组质粒转染BHK-21后,对所制备的杂交瘤细胞株上清进行间接免疫荧光(IFA)以及western blot鉴定,结果显示:2B10和4H8与VP7蛋白反应,而3D4与VP6蛋白反应。同时,IFA鉴定结果进一步表明,3株MAb与24个血清型的BTV均可以发生反应。本研究制备的MAb为建立BTV免疫学检测方法和相关病毒蛋白的功能研究奠定了基础。

关键词：蓝舌病病毒单克隆抗体 VP6蛋白 VP7蛋白

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2009年～2011年中国南方H4亚型禽流感病毒生物学特性研究

2009年～2011年中国南方H4亚型禽流感病毒生物学特性研究

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十六次学术研讨会

作者：张文亮张曦朱占松谭丹崔鹏飞施建忠邓国华陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室

我国南方地区一直以来是禽流感的易发地,目前该区域已分离到的禽流感病毒除高致病性禽流感(HPAIV)外,也存在多种低致病性禽流感(IPAIV)并存现象,尤其是近年来H6和H9等LPAIV呈现广泛流行态势。2009年以来,在中国南方地区的正常禽流感疫... 详细信息

我国南方地区一直以来是禽流感的易发地,目前该区域已分离到的禽流感病毒除高致病性禽流感(HPAIV)外,也存在多种低致病性禽流感(IPAIV)并存现象,尤其是近年来H6和H9等LPAIV呈现广泛流行态势。2009年以来,在中国南方地区的正常禽流感疫情监测过程中分离到多株H4亚型禽流感病毒(AIV),发现H4亚型禽流感病毒的分离率逐渐提高。本研究对2009年至2011年间分离的55株病毒进行RNA提取、基因组扩增、序列分析、相关抗原性分析以及对小鼠的感染能力评估,以了解我国当前南方地区H4亚型AIV的遗传进化关系,抗原

关键词：禽流感病毒生物学特性研究中国南方

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蓝舌病病毒重组VP7蛋白单克隆抗体制备及竞争ELISA检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2012年第5期34卷 388-392页

作者：耿宏伟秦永丽李俊平杨涛孙恩成刘霓红白安斌徐青元王凌凤赵晶覃绍敏林俊郭怡璠吴东来东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江省农业科学院黑龙江哈尔滨150086 广西兽医研究所广西南宁530001 广西大学广西南宁530004

为了建立蓝舌病(BT)的血清学诊断方法,本研究利用原核表达的蓝舌病病毒(BTV)血清型12型VP7纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,制备2株单克隆抗体(MAb),分别命名为BTV-2D10和BTV-4H7。IFA试验表明,2株MAb均能与BTV 24个血清型发生特异性反应,而与... 详细信息

为了建立蓝舌病(BT)的血清学诊断方法,本研究利用原核表达的蓝舌病病毒(BTV)血清型12型VP7纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,制备2株单克隆抗体(MAb),分别命名为BTV-2D10和BTV-4H7。IFA试验表明,2株MAb均能与BTV 24个血清型发生特异性反应,而与茨城病病毒(IBAV)、中山病病毒(CV)、赤羽病病毒(AKAV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛轮状病毒(BRV)、牛肠道病毒(BEV)、牛呼肠孤病毒(RV)及口蹄疫病毒(FMDV)无交叉反应,表明2株MAb均为BTV群特异性抗体。采用重组表达的VP7蛋白作为包被抗原建立的竞争ELISA方法证明,BTV-4H7 MAb对不同血清型BTV阳性血清具有良好的阻断效果,而对AKAV、IBAV、BRV和FMDV阳性血清无阻断作用。本研究建立的竞争ELISA方法与IDEXX公司的试剂盒检测包括65份已知背景血清和322份采自广西省的山羊血清样品,检测结果符合率分别达100%和98%。该竞争ELISA方法的建立为BTV抗体的监测提供了安全、快速、准确的技术手段。

关键词：蓝舌病病毒重组VP7蛋白群特异性单克隆抗体竞争ELISA

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蓝舌病病毒VP5蛋白的原核表达及其抗原性分析

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中国预防兽医学报 2012年第8期34卷 607-610页

作者：赵大维朱彦青陈伟业胡倩倩殷倩倩黄克和步志高南京农业大学动物医学学院江苏南京210095 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 南京农业大学公共管理学院江苏南京210095

为表达蓝舌病病毒(BTV)VP5蛋白并检测其生物学活性,本实验采用RT-PCR方法扩增血清12型BTV的VP5基因,构建重组质粒pMAL-VP5。将重组质粒转化TB1感受态细胞,以0.4 mmol/L的IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE电泳结果显示,融合了大肠杆菌麦芽糖结... 详细信息

为表达蓝舌病病毒(BTV)VP5蛋白并检测其生物学活性,本实验采用RT-PCR方法扩增血清12型BTV的VP5基因,构建重组质粒pMAL-VP5。将重组质粒转化TB1感受态细胞,以0.4 mmol/L的IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE电泳结果显示,融合了大肠杆菌麦芽糖结合蛋白(MBP)标签的VP5重组蛋白以可溶形式表达,分子质量约为112.2 ku。利用MBP标签对重组蛋白进行纯化,并以其作为包被抗原,间接ELISA检测山羊血清样品,结果 5份羊血清P/N值均大于1,其中有1只羊检测结果 P/N值为2.396,鉴定为阳性血清,表明重组蛋白可以与VP5抗体反应,可以作为检测BTV VP5抗体的抗原,为今后进一步开展BT诊断研究奠定了基础。

关键词：蓝舌病病毒 VP5基因原核表达间接ELISA

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禽流感病毒RT-LAMP快速检测方法的建立

禽流感病毒RT-LAMP快速检测方法的建立

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：包红梅王秀荣陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／农业部动物流感重点开放实验室，黑龙江哈尔滨 150001

根据GenBank中登录的A型禽流感病毒(AIr)的M基因序列，设计了一套特异识别M基因序列中6个不同区段的环介导恒等温扩增(LAMP)引物，并以此套引物建立了一种基于RT-LAMP(逆转录环介导等温核酸扩增)技术的A型禽流感病毒诊断方法。结果表明... 详细信息

根据GenBank中登录的A型禽流感病毒(AIr)的M基因序列，设计了一套特异识别M基因序列中6个不同区段的环介导恒等温扩增(LAMP)引物，并以此套引物建立了一种基于RT-LAMP(逆转录环介导等温核酸扩增)技术的A型禽流感病毒诊断方法。结果表明，该方法对M-AIV RNA的最小检测限为10．6，灵敏度高于普通一步法RT-PCR 10倍；全部反应可在1．5h内完成；在反应体系中添加Fluorescent Detection Reagent染料后，可通过肉眼观察有无荧光直接判定结果。灵敏性及特异性试验证明，该方法灵敏度高、特异性好，能够作为A型禽流感病毒的快速诊断方法。

关键词：禽流感病毒逆转录环介导恒等温扩增病毒检测性能评价

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H3亚型猪流感病毒抗原捕捉ELISA诊断方法的建立

H3亚型猪流感病毒抗原捕捉ELISA诊断方法的建立

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：陈艳孔维乔传玲杨焕良辛晓光陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室，黑龙江哈尔滨 150001

为了检测H3N2亚型猪流感病毒，将一株H3亚型猪流感病毒特异性单克隆抗体(4E8)进行纯化，建立了以多抗作为包被抗体，单抗作为检测抗体的H3亚型猪流感病毒抗原捕捉ELISA方法。通过对反应条件的优化。确定多抗1：800倍稀释，单抗0．51μg... 详细信息

为了检测H3N2亚型猪流感病毒，将一株H3亚型猪流感病毒特异性单克隆抗体(4E8)进行纯化，建立了以多抗作为包被抗体，单抗作为检测抗体的H3亚型猪流感病毒抗原捕捉ELISA方法。通过对反应条件的优化。确定多抗1：800倍稀释，单抗0．51μg／孔，酶标抗体1：5000稀释;单抗37 4℃作用***，酶标抗体37℃作用1.0h。并对此方法的特异性和敏感性进行了分析。同时，应用建立的抗原捕捉ELISA方法对84份H3亚型SIV实验室感染猪的拭子和肺脏样品进行检测。结果显示该方法具有良好的特异性和敏感性，可用于H3亚型SIV的临床检测。

关键词：猪流感病毒单克隆抗体病毒检测性能评价

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HBK-SPF鸭MHCⅠ区域多态性分析

HBK-SPF鸭MHCⅠ区域多态性分析

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全国生物遗传多样性高峰论坛

作者：武永淑杨柳杨超李海超廉传江韩建林韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物研究室兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业部畜禽遗传资源与利用重点开放实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物研究室兽医生物技术国家重点实验室东北农业大学中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业部畜禽遗传资源与利用重点开放实验室

禽主要组织相容性复合体是一组紧密连锁高度多态的基因群,与免疫反应或敏感性密切相关,鸭MHC I区域全长36.8kb,由TAP1、TAP2和5个MHC I拷贝基因(UAA-UEA)组成。HBK-SPF鸭是中国农业科学院哈尔滨兽医研究所培育的无特定病原体种鸭,包括B... 详细信息

禽主要组织相容性复合体是一组紧密连锁高度多态的基因群,与免疫反应或敏感性密切相关,鸭MHC I区域全长36.8kb,由TAP1、TAP2和5个MHC I拷贝基因(UAA-UEA)组成。HBK-SPF鸭是中国农业科学院哈尔滨兽医研究所培育的无特定病原体种鸭,包括B和Q 2个品系,已封闭繁育了7个世代。本文在鸭MHC I区域筛选了4个微卫星位点,通过单链构象多

关键词： HBK-SPF 单倍型 MHC 多态性分析

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HBK-SPF鸭MHC I区域微卫星标记分析

HBK-SPF鸭MHC I区域微卫星标记分析

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首届中国SPF禽类实验动物与兽用生物制品产业论坛

作者：武永淑韩建林韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物研究室兽医生物技术国家重点实验室 150001 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业部畜禽遗传资源与利用重点开放实验室 100193 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业部畜禽遗传资源与利用重点开放实验室 100193 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物研究室兽医生物技术国家重点实验室 150001

禽主要组织相容性复合体是一组紧密连锁高度多态的基因群，与免疫反应或敏感性密切相关，鸭MHCⅠ区域全长36.8kb,由TAP1、TAP2和5个MHC（Ⅰ)拷贝基因（UAA-UEA)组成。HBK-SPF鸭是中国农业科学院哈尔滨兽医研究所培育的无特定病原体种鸭... 详细信息

禽主要组织相容性复合体是一组紧密连锁高度多态的基因群，与免疫反应或敏感性密切相关，鸭MHCⅠ区域全长36.8kb,由TAP1、TAP2和5个MHC（Ⅰ)拷贝基因（UAA-UEA)组成。HBK-SPF鸭是中国农业科学院哈尔滨兽医研究所培育的无特定病原体种鸭，包括B和Q2个品系，已封闭繁育了7个世代。本文在鸭MHCⅠ区域筛选了4个微卫星位点，通过单链构象多态性分析和聚合酶链式反应直接测序，发现A位点具有多态性，为（GT)n的重复结构，第6代HBK-B和HBK-Q的31个个体和第7代的140个个体进行聚合酶链式反应，结果直接测序，得到15种（GT)n基因型，未发现纯合基因型，重复结构之前的108bp中，发现了4种纯合单倍型和6种杂合单倍型;B位点未得到目的产物：C位点位于MHC（Ⅰ)拷贝基因UDA和UEA之间，扩增结果与UAA和UBA之间序列高度同源，无法判断基因型;D位点表现为单态，为（ATA)15的固定重复结构。本结果为进一步研究鸭MHC（Ⅰ)基因组序列提供了依据。

关键词：无特定病原体鸭主要组织相容性复合体微卫星标记

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抗蓝舌病病毒VP6和VP7蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

抗蓝舌病病毒VP6和VP7蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：魏鹏张翠云吴东来孙恩成刘霓红杨涛徐青元秦永丽赵晶冯瑜菲王文世中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／农业部兽医公共卫生重点开放实验室，黑龙江哈尔滨 150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／农业部兽医公共卫生重点开放实验室，黑龙江哈尔滨 150001 湖南农业大学动物医学学院，湖南长沙410128 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／农业部兽医公共卫生重点开放实验室，黑龙江哈尔滨 150001 东北农业大学动物医学学院，黑龙江哈尔滨150030

为制备针对蓝舌病病毒(BTV)的单克隆抗体(MAb)，本研究利用血清型1型蓝舌病病毒(BTVI)免疫BALB／c鼠，4次免疫后取小鼠脾淋巴细胞与SP2／0进行融合，并用BTVl包被ELISA板，通过间接ELISA方法筛选出3株稳定分泌抗BTVl的MAb的杂交瘤细胞株... 详细信息

为制备针对蓝舌病病毒(BTV)的单克隆抗体(MAb)，本研究利用血清型1型蓝舌病病毒(BTVI)免疫BALB／c鼠，4次免疫后取小鼠脾淋巴细胞与SP2／0进行融合，并用BTVl包被ELISA板，通过间接ELISA方法筛选出3株稳定分泌抗BTVl的MAb的杂交瘤细胞株(2810、3D4、4H8)。利用表达BTVl主要蛋白的真核表达重组质粒转染BHK-21后，对所制备的杂交瘤细胞株上清进行间接免疫荧光(IFA)以及Western blot鉴定，结果显示：2810和4H8与VP7蛋白反应，而3D4与VP6蛋白反应。进一步利用IFA对3株MAb的反应特异性进行鉴定，结果表明3株MAb与24个血清型的BTV均可反应。本实验室制备所得的MAb为建立BTV免疫学检测方法和相关病毒蛋白的功能研究奠定了基础。

关键词：蓝舌病病毒单克隆抗体 VP7蛋白抗体制备抗性鉴定

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