检索结果-内蒙古大学图书馆

中国畜牧兽医学会禽病学分会第12次学术研讨会

作者：姜永萍李呈军张洪波张芳芳步志高于康震陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨) 农业部畜牧兽医总站(北京)

免疫原基因的密码子优化是提高DNA疫苗免疫保护效果的有效策略.不同物种间细胞在蛋白翻译过程中具有密码子使用的偏嗜性,鸡与A型流感病毒保护性免疫原HA蛋白氨基酸密码子使用频率存在着明显差异.为此,利用寡核苷酸合成、重叠延伸PCR及... 详细信息

免疫原基因的密码子优化是提高DNA疫苗免疫保护效果的有效策略.不同物种间细胞在蛋白翻译过程中具有密码子使用的偏嗜性,鸡与A型流感病毒保护性免疫原HA蛋白氨基酸密码子使用频率存在着明显差异.为此,利用寡核苷酸合成、重叠延伸PCR及限制酶切法构建了密码子优化的A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)<'[GD/1/96(H5N1)]>的HA基因(optiHA),并将其插入CMV启动子表达载体pCI构建了H5亚型DNA疫苗质粒pCIopiHA,将含有GD/1/96(H5N1)野生型HA基因的质料pCIHA和pCIoptiHA分别转染293T细胞,间接免疫荧光检测转染后24-48小时293T细胞中瞬时表达的HA抗原蛋白;Western-blot证实上述2种表达质粒均可正确表达H5亚型HA抗原蛋白,结果表明密码子优化的HA基因体外瞬时表达水平显著高于野生型HA基因.这一结果为进一步开展SPF鸡免疫保护效果的比较研究奠定了基础.

关键词： HA基因密码子优化重叠延伸PCR 间接免疫荧光 Western blot检测禽流感病毒 DNA疫苗疫苗免疫保护

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

抗原基因密码子的优化增强H5亚型禽流感DNA疫苗免疫保护效果

抗原基因密码子的优化增强H5亚型禽流感DNA疫苗免疫保护效果

引用

第六次人畜共患病学术交流会

作者：姜永萍张洪波李呈军张芳芳朱启运邓国华包红梅于康震陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨)

免疫原基因的密码子优化是提高DNA疫苗免疫保护效果的有效策略.鸡与哺乳动物细胞在蛋白翻译过程中具有相同的密码子编嗜性,但与A型流感病毒保护性免疫原HA蛋白氨基酸密码子使用频率存在着明显差异.为此,利用寡核苷酸合成、重叠延伸PCR... 详细信息

免疫原基因的密码子优化是提高DNA疫苗免疫保护效果的有效策略.鸡与哺乳动物细胞在蛋白翻译过程中具有相同的密码子编嗜性,但与A型流感病毒保护性免疫原HA蛋白氨基酸密码子使用频率存在着明显差异.为此,利用寡核苷酸合成、重叠延伸PCR法及限制酶切法构建了密码子优化的A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[GD/1/96(H5N1)]的HA基因(optiHA),并将其插入CMV启动子表达载体pCI构建了H5亚型DNA疫苗质粒***疫苗质粒pCIHA和pCIoptiHA分别围染293T细胞,间接免疫荧光检测转染后24-48小时293T细胞中瞬时表达的HA抗原蛋白,结果密码子优化的HA基因表达水平显著高于野生型HA基因.为进一步评估HA基因密码子优化对H5亚型禽流感DNA疫苗免疫效果的影响,表达野生型HA基因的DNA疫苗质粒pCIHA及pCIoptiHA分析以100μg和10μg剂量一次免疫3周龄SPF鸡,4周后分别用100LD<,50>的HPAIV A/Chicken/LN/45/01(H5N1)[LN/45/01(H5N1)]鼻腔途径进行攻击,观察发病与死亡情况,分别于攻毒后第3、5、7采集喉头及泄殖腔拭子进行病毒分离、滴定检测排毒情况,同时检测免疫后、攻毒前及攻毒后血清HI抗体、AGP抗体的动态变化.结果,100μg pCIoptiHA可形成75﹪的免疫保护,100μg pCIHA可形成50﹪的免疫保护;10μg pCIoptiHA可形成对免疫鸡75﹪的部分免疫保护,而10μg pCIHA则基本不能形成免疫保护;pCIoptiHA诱导的HI抗体水平远远高于pCIHA.试验结果表明,HA基因密码子的优化可显著提高H5亚型禽流感DNA疫苗诱导的保护性抗体免疫反应水平,增强免疫保护效果.

关键词：禽流感 DNA疫苗免疫保护免疫原基因免疫反应

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

本地毛形线虫49 Ku ES蛋白结构基因的分子克隆及原核表达

引用

中国预防兽医学报 2007年第7期29卷 510-514页

作者：郑宝亮王秀荣路义鑫李冬梅闫清波宋铭忻郑州牧业工程高等专科学校生物工程系河南郑州450011 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院预防医学系寄生虫学教研室黑龙江哈尔滨150030

提取Trichinella nativa(***)肌幼虫的总RNA,用RT-PCR方法扩增出了编码*** 49 Ku ES蛋白的结构基因。基因克隆后测序,序列测定结果表明:目的基因TNPG长度为951 bp,核苷酸序列同已发表的Trichinella spiralis(***)相应的序列P49同源性为9... 详细信息

提取Trichinella nativa(***)肌幼虫的总RNA,用RT-PCR方法扩增出了编码*** 49 Ku ES蛋白的结构基因。基因克隆后测序,序列测定结果表明:目的基因TNPG长度为951 bp,核苷酸序列同已发表的Trichinella spiralis(***)相应的序列P49同源性为97.68%,所推导的氨基酸序列同源性为95.24%。将目的基因TNPG插入到原核表达载体pET-30a的BamHⅠ酶切位点处,并转化到感受态表达菌中进行诱导表达。结果显示TNPG在原核表达菌BL-21中获得了高效表达,表达产物为40.8 Ku的融合蛋白,表达量达到菌体总蛋白的22.8%。通过Western blot分析,表达产物可以被小鼠***和***阳性血清以及它们的中国地理株的小鼠血清特异性识别。

关键词：旋毛虫 nativa种旋毛虫 spiralis种 49 Ku ES蛋白基因序列 Westem blot分析

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

鸡β—actin启动子表达载体pCAGGS显著增强H5亚型禽流感DNA疫苗免疫保护效果

鸡β—actin启动子表达载体pCAGGS显著增强H5亚型禽流感DNA疫苗免...

引用

中国畜牧兽医学会禽病学分会第12次学术研讨会

作者：姜永萍张洪波李呈军张芳芳步志高于康震陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨) 农业部畜牧兽医总站(北京)

真核表达载体的优化是提高DNA疫苗免疫保护效果的有效策略之一.pCAGGS含鸡β-actin启动子和CMV增强子,是一种高效真核表达载体.将A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)的HA基因插入pCAGGS,构建了DNA疫苗质粒pCAGGHA,将pCAGGHA和表达GD/1/96(H5N... 详细信息

真核表达载体的优化是提高DNA疫苗免疫保护效果的有效策略之一.pCAGGS含鸡β-actin启动子和CMV增强子,是一种高效真核表达载体.将A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)<'[GD/1/96(H5N1)]>的HA基因插入pCAGGS,构建了DNA疫苗质粒pCAGGHA,将pCAGGHA和表达GD/1/96(H5N1)HA基因的质粒pCIHA分别转染293T细胞,间接免疫荧光检测转染后24-48小时293T细胞中瞬时表达的HA抗原蛋白,Western-blot证实上述2种表达质粒均可正确表达H5亚型HA抗原蛋白,结果载体pCAGGS表达水平显著高于载体pCI.为进一步评估不同表达载体对H5亚型禽流感DNA疫苗免疫效果的影响,DNA疫苗质粒pCIHA及pCAGGHA分别以100μg和10μg剂量一次免疫3周龄SPF鸡,4周后分别用100LD<,50>的HPAIV GD/1/96(H5N1)鼻腔途径进行攻击,观察发病与死亡情况,分别于攻毒后第3、5、7采集喉头及泄殖腔拭子进行病毒分离、滴定检测排毒情况,同时检测免疫后、攻毒前及攻毒后血清HI抗体、AGP抗体的动态变化.结果,100μg pCAGGHA可形成100﹪的免疫保护,100μg pCIHA可形成50﹪的免疫保护,10μg pCAGGHA可形成对免疫鸡100﹪的免疫保护,而10μg pCIHA则基本不能形成免疫保护;pCAGGHA诱导的HI抗体水平远远高于pCIHA.试验结果表明,鸡β-actin启动子表达载体pCAGGS可显著提高H5亚型禽流感DNA疫苗诱导的保护性抗体免疫反应水平,增强免疫保护效果.

关键词：禽流感 H5亚型鸡β-actin启动子 DNA疫苗免疫保护

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

A型流感病毒H7N9亚型和通用三重荧光RT-PCR诊断方法的建立

A型流感病毒H7N9亚型和通用三重荧光RT-PCR诊断方法的建立

引用

中国畜牧兽医学会2014年学术年会

作者：徐晓龙包红梅马勇施建忠曾显营李雁冰陈化兰王秀荣中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室国家禽流感参考实验室

引言新型的H7N9亚型流感病毒在家禽上无任何症状显现,无法依靠临床症状进行初步鉴别,这使得监控变得更加困难。目前,在生物安全级别较高的实验室,H7N9亚型流感病毒采取病毒分离培养后,结合血凝和血凝抑制方法做出确诊。在全国各省市级... 详细信息

引言新型的H7N9亚型流感病毒在家禽上无任何症状显现,无法依靠临床症状进行初步鉴别,这使得监控变得更加困难。目前,在生物安全级别较高的实验室,H7N9亚型流感病毒采取病毒分离培养后,结合血凝和血凝抑制方法做出确诊。在全国各省市级实验室,由于不具备生物安全级别较高的实验条件,并且H7N9病毒可感染人类,导致临床发病甚至死亡,病毒分离培养将增加传播风险。因此,国家相

关键词：流感病毒 RT-PCR

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

H10亚型禽流感病毒对不同宿主的致病性研究

H10亚型禽流感病毒对不同宿主的致病性研究

引用

中国畜牧兽医学会2014年学术年会

作者：王德丽慈彦鹏崔艳芳樊兆斌刘丽玲田国彬曾显营陈化兰李雁冰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室国家禽流感参考实验室

引言禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)属于正黏病毒科流感病毒属,是一种能够引起严重危害的人兽共患病原。2013年12月,我国第一次发生H10N8亚型AIV感染人并致人死亡的病例,这引起公众对H10亚型流感病毒的广泛关注。本研究对从野... 详细信息

引言禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)属于正黏病毒科流感病毒属,是一种能够引起严重危害的人兽共患病原。2013年12月,我国第一次发生H10N8亚型AIV感染人并致人死亡的病例,这引起公众对H10亚型流感病毒的广泛关注。本研究对从野鸟体内分离到的多株H10亚型流感病毒株以及H10亚型参考毒株进行遗传演化分析,并对其生物学特性进行研究,为进一步探索H10亚型AIV在自然界

关键词：禽流感病毒 H10

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

禽流感病毒H5 HA和M基因双重荧光RT-PCR诊断方法的建立

禽流感病毒H5 HA和M基因双重荧光RT-PCR诊断方法的建立

引用

中国畜牧兽医学会2014年学术年会

作者：王秀荣徐晓龙马勇包红梅施建忠曾显营李雁冰陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室国家禽流感参考实验室

引言H5亚型禽流感的爆发不仅给家禽养殖业带来了巨大的损失,同时也造成了人的死亡。因此,迫切需要一种快速、敏感、特异的分子检测方法来应用于H5亚型禽流感病毒（AIV）的诊断。荧光RT-PCR方法作为病毒快速诊断的有效工具,已经用于H5亚... 详细信息

引言H5亚型禽流感的爆发不仅给家禽养殖业带来了巨大的损失,同时也造成了人的死亡。因此,迫切需要一种快速、敏感、特异的分子检测方法来应用于H5亚型禽流感病毒（AIV）的诊断。荧光RT-PCR方法作为病毒快速诊断的有效工具,已经用于H5亚型和AIV的检测。但是,由于疫苗免疫大面积应用形成的高免疫压力,H5亚型禽流感病毒不断发生遗传变异,针对H5亚型引物和探针需要随着新病

关键词：禽流感病毒 AIV 双重荧光 RT-PCR H5 HA

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

H1N1亚型猪流感病毒中国分离株核蛋白基因分子演化的研究

H1N1亚型猪流感病毒中国分离株核蛋白基因分子演化的研究

引用

第六次人畜共患病学术交流会

作者：陈君彦李海燕陈化兰李泽君于康震中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨) 内蒙古农业大学动物科学与医学学院(呼和浩特) 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨) 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨) 全国畜牧兽医总站(北京)

本研究对2001年中国华南及东北地区的15株H1N1亚型猪流感病毒(SIV)分离株的核蛋白(NP)基因进行了序列测定和分析,并绘制了进化树.研究结果表明,15株H1N1亚型SIV的NP基因核甘酸全长为1565bp,共编码498个氨基酸.经同源性比较结果中知,除SW... 详细信息

本研究对2001年中国华南及东北地区的15株H1N1亚型猪流感病毒(SIV)分离株的核蛋白(NP)基因进行了序列测定和分析,并绘制了进化树.研究结果表明,15株H1N1亚型SIV的NP基因核甘酸全长为1565bp,共编码498个氨基酸.经同源性比较结果中知,除SW/HLJ/395/01外,其余14株H1N1亚型SIV的NP基因核苷酸序列与参考毒株SW/BJ/94/91保持相对最高的同源性,核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为96.5~97.4﹪、97.8~99.0﹪;并且与类猪人流感病毒WIS/3523/88和NJ/8/76核苷酸序列的同源性也可分别达到95.5~96.5﹪、92.7~93.7﹪,推导氨基酸序列的同源性分别为96.8~99.0﹪、94.6~97.2﹪,相对较高.但是,SW/HLJ/395/01与类禽型H1N1猪谱系的代表毒株SW/GER/2/81同源性最高,核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为93.9﹪和99.0﹪.经进化树分析可见,SW/HLJ/395/01属于类禽H1N1猪谱系,其它14株H1N1亚型SIV的NP基因皆属于古典型H1N1猪谱系.

关键词：猪流感病毒核蛋白序列分析分子演化

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

H1N1亚型猪流感病毒HA基因的序列测定及原核表达

H1N1亚型猪流感病毒HA基因的序列测定及原核表达

引用

中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术年会

作者：丁选亚乔传玲韩庆功杨焕良陈艳辛晓光陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室及兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

利用RT-PCR方法扩增出猪流感病毒A/Swine/Henan/11/2005(H1N1)HA基因,然后克隆到PMD18-T载体上,并进行测序和构建其系统进化树.根据测出的HA序列设计出带酶切位点的一对引物,并以PMD18-HA为模板进行PCR,扩增出HA的开放阅读框(ORF),克隆... 详细信息

利用RT-PCR方法扩增出猪流感病毒A/Swine/Henan/11/2005(H1N1)HA基因,然后克隆到PMD18-T载体上,并进行测序和构建其系统进化树.根据测出的HA序列设计出带酶切位点的一对引物,并以PMD18-HA为模板进行PCR,扩增出HA的开放阅读框(ORF),克隆到表达载体pET32a中,经双酶切和测序及PCR鉴定得到阳性重组表达质粒pET-HA,将质粒转化到表达宿主菌BL21(DE3)中,经终浓度为1mM的IPTG诱导,SDS-PAGE结果显示,HA蛋白获得了高效表达,经Western-blot检测证实表达产物具有良好的抗原反应活性,为以重组HA蛋白作为抗原建立检测H1N1亚型猪流感病毒血清学抗体水平奠定了基础.

关键词：猪流感病毒 HA基因原核表达基因序列

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

H7亚型禽流感DNA疫苗免疫保护效力研究

H7亚型禽流感DNA疫苗免疫保护效力研究

引用

第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会

作者：姜永萍张洪波张平静王全英于康震田国斌陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室农业部畜牧兽医总站

将表达密码子优化的H7亚型HA基因的DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA7的免疫保护效力进行了评估。首先以100μg、50μg和10μg剂量一次免疫3周龄SPF鸡,然后以100μg、50μg和10μg剂量间隔3周加强免疫3周龄SPF鸡,一次免疫后4周、加强免疫后2周用1... 详细信息

将表达密码子优化的H7亚型HA基因的DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA7的免疫保护效力进行了评估。首先以100μg、50μg和10μg剂量一次免疫3周龄SPF鸡,然后以100μg、50μg和10μg剂量间隔3周加强免疫3周龄SPF鸡,一次免疫后4周、加强免疫后2周用100LD50的HPAIV A/FPV/Rostock/34(H7N1)[RK/34(H7N1)]鼻腔途径进行攻击,观察发病与死亡情况,分别于攻毒后第3、5、7采集喉头及泄殖腔拭子进行病毒分离、滴定检测排毒情况,同时检测免疫后、攻毒前及攻毒后血清HI抗体、AGP抗体的动态变化。结果,pCAGGoptiHA7一次免疫后,100μg、50μg和100μg剂量均可对免疫鸡形成90%的死亡保护;pCAGGoptiHA7加强免疫后, 100μg和50μg剂量可对免疫鸡形成100%完全保护(不发病、不致死、不排毒),而10μg剂量则可对免疫鸡形成100%的保护(不发病、不致死),但不能完全阻止排毒。结果表明,H7亚型DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA7具有良好的免疫保护性,有望成为预防H7亚型高致病力禽流感的物质技术储备。

关键词：禽流感 H7亚型 DNA疫苗保护效力

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：