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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：魏鹏张翠云吴东来孙恩成刘霓红杨涛徐青元秦永丽赵晶冯瑜菲王文世中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／农业部兽医公共卫生重点开放实验室，黑龙江哈尔滨 150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／农业部兽医公共卫生重点开放实验室，黑龙江哈尔滨 150001 湖南农业大学动物医学学院，湖南长沙410128 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／农业部兽医公共卫生重点开放实验室，黑龙江哈尔滨 150001 东北农业大学动物医学学院，黑龙江哈尔滨150030

为制备针对蓝舌病病毒(BTV)的单克隆抗体(MAb)，本研究利用血清型1型蓝舌病病毒(BTVI)免疫BALB／c鼠，4次免疫后取小鼠脾淋巴细胞与SP2／0进行融合，并用BTVl包被ELISA板，通过间接ELISA方法筛选出3株稳定分泌抗BTVl的MAb的杂交瘤细胞株... 详细信息

为制备针对蓝舌病病毒(BTV)的单克隆抗体(MAb)，本研究利用血清型1型蓝舌病病毒(BTVI)免疫BALB／c鼠，4次免疫后取小鼠脾淋巴细胞与SP2／0进行融合，并用BTVl包被ELISA板，通过间接ELISA方法筛选出3株稳定分泌抗BTVl的MAb的杂交瘤细胞株(2810、3D4、4H8)。利用表达BTVl主要蛋白的真核表达重组质粒转染BHK-21后，对所制备的杂交瘤细胞株上清进行间接免疫荧光(IFA)以及Western blot鉴定，结果显示：2810和4H8与VP7蛋白反应，而3D4与VP6蛋白反应。进一步利用IFA对3株MAb的反应特异性进行鉴定，结果表明3株MAb与24个血清型的BTV均可反应。本实验室制备所得的MAb为建立BTV免疫学检测方法和相关病毒蛋白的功能研究奠定了基础。

关键词：蓝舌病病毒单克隆抗体 VP7蛋白抗体制备抗性鉴定

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蓝舌病病毒8型VP2蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定

蓝舌病病毒8型VP2蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定

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2012年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会学术研讨会

作者：秦永丽孙恩成耿宏伟徐青元杨涛赵晶王文世魏鹏冯瑜菲李俊平李文京吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室中国动物疫病预防控制中心

蓝舌病(Bluetongue,BT)是由呼肠孤病毒科环状病毒属蓝舌病病毒(Bluetongue virus,BTV)引起的,主要由库蠓传播的反刍动物烈性非接触性传染病。BT血清型众多,目前已发现24个血清型,最近又相继分离到BTV25和26型。BTV基因组由10个线性双链... 详细信息

蓝舌病(Bluetongue,BT)是由呼肠孤病毒科环状病毒属蓝舌病病毒(Bluetongue virus,BTV)引起的,主要由库蠓传播的反刍动物烈性非接触性传染病。BT血清型众多,目前已发现24个血清型,最近又相继分离到BTV25和26型。BTV基因组由10个线性双链RNA片段组成,共编码11种蛋白,七种结构蛋白(VP1-VP7)和四种非结构蛋白(NS1、NS2、NS3/NS3a和NS4)。其

关键词：抗原表位 VP2 单克隆抗体制备

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蓝舌病病毒VP7蛋白单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定

蓝舌病病毒VP7蛋白单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定

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2012年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会学术研讨会

作者：王文世孙恩成刘霓红杨涛徐青元秦永丽赵晶冯瑜菲魏鹏张翠云李文京吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室中国动物疫病预防控制中心

研究目的:蓝舌病(Bluetongue,BT)是由呼肠孤病毒科环状病毒属蓝舌病病毒引起,由库蠓等昆虫传播的反刍动物非接触性传染病;主要侵害绵羊、山羊,牛为隐性感染。由于发病绵羊持续高热、消瘦、口鼻和胃粘膜出现溃疡损伤、口腔粘膜及舌头发蓝... 详细信息

研究目的:蓝舌病(Bluetongue,BT)是由呼肠孤病毒科环状病毒属蓝舌病病毒引起,由库蠓等昆虫传播的反刍动物非接触性传染病;主要侵害绵羊、山羊,牛为隐性感染。由于发病绵羊持续高热、消瘦、口鼻和胃粘膜出现溃疡损伤、口腔粘膜及舌头发蓝,因此命名为蓝舌病。蓝舌病VP7蛋白位于病毒颗粒内衣壳的最外侧,约占病毒成分的36%,是主要的血清群特异性抗原,因此获得针对VP7蛋白的单克隆抗体,就为蓝舌病免疫学检测方法的建立奠定了基础。

关键词：单克隆抗体 BTV 群特异性抗原 VP7 生物学特性杂交瘤细胞株特异性反应

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2009-2011年环洞庭湖区主要活禽批发市场低致病禽流感监测情况

2009-2011年环洞庭湖区主要活禽批发市场低致病禽流感监测情况

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2015年中国微生物学会学术年会

作者：黄建龙王昌建邓国华谭丹范仲鑫何世成朱春霞汪洪冰刘道新湖南省动物疫病预防控制中心湖南长沙 410014 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨 150001 湖南省动物疫病预防控制中心湖南长沙 410014 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨 150001

目的了解环洞庭湖区主要活禽批发市场低致病性禽流感病毒的分布和流行情况,为该地区活禽批发市场低致病性禽流感的防控措施提供一些依据.方法对在活禽批发市场上采集的拭子样品先由尿囊腔接种SPF鸡胚,然后用血凝试验(HA)测定所收集的...

目的了解环洞庭湖区主要活禽批发市场低致病性禽流感病毒的分布和流行情况,为该地区活禽批发市场低致病性禽流感的防控措施提供一些依据.方法对在活禽批发市场上采集的拭子样品先由尿囊腔接种SPF鸡胚,然后用血凝试验(HA)测定所收集的尿囊液,对HA测定有滴度的再进行血凝抑制试验(HI)和RT-PCT方法相结合鉴定病毒的亚型.结果 2009年-2011年冬春季节,我们在环洞庭湖地区主要活禽批发市场上共分离到627株低致病性禽流感病毒,总的分离率为22.2％,其中鸭拭子低致病性禽流感病毒的分离率最高,达到24.6％,其次是鸡拭子,达到21.5％,鹅拭子为11％.在所监测的5家活禽批发市场中共分离到H3、H4、H6、H9、H10型和H11等6种亚型的低致病性禽流感病毒,其中H9、H6和H4亚型比较高,其分离率分别可达到11％、6.3％和3.4％.结论活禽批发市场中低致病性禽流感隐性带毒的情况普遍存在,其发生禽流感疫情的威胁较大.建议整顿规范市场经营管理,特别是要建立活禽交易市场定期休市制度.

关键词：

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H3N2亚型猪流感病毒HA基因序列测定及抗原性分析

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动物医学进展 2008年第3期29卷 5-9页

作者：刘大飞杨涛刘明刘春国桑学波刘大程中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江农垦总局畜牧兽医总站哈尔滨分站．黑龙江哈尔滨150038 莱阳市城厢兽医站山东莱阳265200

采用RT～PCR技术对4株H3N2亚型猪流感病毒的HA基因进行了扩增，将获得的PCR产物分别与pMD18-T克隆载体连接，进行序列测定。测序结果显示，4个毒株均含有完整的开放阅读框，并且均未发现核苷酸插入或缺失现象；分离毒株间核苷酸同源性... 详细信息

采用RT～PCR技术对4株H3N2亚型猪流感病毒的HA基因进行了扩增，将获得的PCR产物分别与pMD18-T克隆载体连接，进行序列测定。测序结果显示，4个毒株均含有完整的开放阅读框，并且均未发现核苷酸插入或缺失现象；分离毒株间核苷酸同源性为99．4％～99．7％，氨基酸同源性为98．2％～99．3％。同源性分析表明，4个毒株与2003年的猪流感病毒广东分离株有很高同源性（均在99％以上），说明近段时间我国H3N2亚型的猪流感病毒变异不大，重组的频率不是很高，同时又与人流感病毒香港分离株有较高的同源性（均为99．4％）。交叉血凝抑制试验显示，S3株与其他3毒株抗原性差异明显。鉴于猪在流感病毒传播与复制间的特殊地位，应密切监测猪流感。

关键词：猪流感病毒 HA基因克隆抗原性分析

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HBK-SPF鸭MHCI区域微卫星标记分析

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实验动物科学 2015年第3期32卷 6-9页

作者：韩凌霞武永淑吴少莲彭蔚宇王兴童韩建林陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物研究室兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业部畜禽遗传资源与利用重点开放实验室北京100193 中农威特生物科技股份有限公司兰州730046

禽主要组织相容性复合体是一组紧密连锁高度多态的基因群,与免疫反应或敏感性密切相关,鸭MHC I区域全长36.8 kb,由TAP1、TAP2和5个MHC I拷贝基因(UAA-UEA)组成。HBK-SPF鸭是中国农业科学院哈尔滨兽医研究所培育的无特定病原体种鸭,分为B... 详细信息

禽主要组织相容性复合体是一组紧密连锁高度多态的基因群,与免疫反应或敏感性密切相关,鸭MHC I区域全长36.8 kb,由TAP1、TAP2和5个MHC I拷贝基因(UAA-UEA)组成。HBK-SPF鸭是中国农业科学院哈尔滨兽医研究所培育的无特定病原体种鸭,分为B和Q 2个品系,已封闭繁育了7个世代。本文在鸭MHC I区域筛选了4个微卫星位点,通过单链构象多态性分析和聚合酶链式反应直接测序,发现A位点具有多态性,为(GT)n的重复结构,第6代HBK-B和HBK-Q的31个个体和第7代的140个个体进行聚合酶链式反应,结果直接测序,在重复结构之前的108bp中,发现了4种纯合单倍型和6种杂合单倍型;B位点未得到目的产物;C位点位于MHC I拷贝基因UDA和UEA之间,扩增结果与UAA和UBA之间序列高度同源,无法判断基因型;D位点表现为单态,为(ATA)15的固定重复结构。本研究为进一步研究鸭MHC I基因结构和建立家系提供了依据。

关键词： HBK鸭主要组织相容性复合体经典I类分子无特定病原体微卫星标记

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鸡IFN-γDNA-壳聚糖纳米粒的制备及体外转染

鸡IFN-γDNA-壳聚糖纳米粒的制备及体外转染

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十六次、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十五次学术研讨会

作者：殷喆张文龙刘霓红杨涛步志高王君伟吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨 150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨 150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨 150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨 150030

构建了携带鸡干扰素(IFN-)重组真核表达质粒pCAGGS-ChIFNr-,制备成承载pCAGGS-ChlFN- 的壳聚糖纳米粒子。透射电镜观察制备的纳米粒子呈不规则球形,光子相关色谱(PCS)仪测定显示纳米粒子的平均粒径为172.6+5.1nm;Zeta电位为20.8±2.... 详细信息

构建了携带鸡干扰素(IFN-)重组真核表达质粒pCAGGS-ChIFNr-,制备成承载pCAGGS-ChlFN- 的壳聚糖纳米粒子。透射电镜观察制备的纳米粒子呈不规则球形,光子相关色谱(PCS)仪测定显示纳米粒子的平均粒径为172.6+5.1nm;Zeta电位为20.8±2.9mV;载基因纳米粒子的重组质粒DNA包埋效率和载药量分别为91.21±2.54％和31.93±0.16％。载基因壳聚糖纳米粒子可以有效地保护重组质粒DNA,防止核酸酶对其的降解作用,并能良好的从纳米粒子中释放重组质粒DNA。CEF细胞体外转染实验表明：包裹后的纳米粒子对细胞基本无毒性,使携带的外源基因能在CEF细胞中正确表达,其转染效率约为阳离子脂质体转染试剂LipofectamineTM2000 Reagent的1/6。

关键词：壳聚糖纳米颗粒鸡γ-干扰素基因体外转染真核表达

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表达狂犬病病毒ERA株糖蛋白重组新城疫病毒活载体疫苗的构建及对小鼠的免疫原性研究

表达狂犬病病毒ERA株糖蛋白重组新城疫病毒活载体疫苗的构建及对...

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：马良王琪田美杰王喜军翟洪月于文会葛金英步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨 150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨 150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

在新城疫病毒LaSota弱毒疫苗株反向遗传操作系统的基础上,构建表达狂犬病病毒ERA株糖蛋白的重组新城疫病毒rLa-ERA-GP,并探索rLa-ERA-GP对小鼠免疫原性.利用RT-PCR技术,从狂犬病病毒ERA疫苗株上得到狂犬病病毒的糖蛋白(GP)基因,将其克... 详细信息

在新城疫病毒LaSota弱毒疫苗株反向遗传操作系统的基础上,构建表达狂犬病病毒ERA株糖蛋白的重组新城疫病毒rLa-ERA-GP,并探索rLa-ERA-GP对小鼠免疫原性.利用RT-PCR技术,从狂犬病病毒ERA疫苗株上得到狂犬病病毒的糖蛋白(GP)基因,将其克隆到载体pBRN-FL-Pmel上,构建了表达狂犬病病毒糖蛋白重组新城疫病毒全长cDNA克隆pBRN-FL-ERA-GP.利用磷酸钙转染法,在辅助质粒pBS-NP、pBS-P和pBS-L的共同作用下,拯救重组病毒***-PCR检测证实重组病毒rLa-ERA-GP基因组中含有GP基因;western blot和IFA检测结果均表明GP基因在新城疫载体中得到了正确、稳定的表达;大剂量接种BALB/c小鼠不会引起小鼠发病和生长阻滞,并能诱导出高水平ERA特异中和抗体反应;加强免疫后可有效抵御致死剂量RV街毒对BALB/c小鼠的攻击.重组病毒rLa-ERA-GP有望成为防制狂犬病更加安全、有效的,新型重组基因工程活载体疫苗.

关键词：狂犬病病毒反向遗传操作系统重组新城疫病毒糖蛋白表达活载体疫苗免疫原性

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H3N2亚型猪流感病毒的拯救

H3N2亚型猪流感病毒的拯救

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：杜金玲刘明杨涛刘春国李洪涛孙恩成万春和刘大飞陈浩齐金龙中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室黑龙江八一农垦大学动物科技学院福建省农科院畜牧兽医研究所

利用反向遗传学操作技术,以A/Swine/Henan/S4/01(H3N2)毒株为亲本株,采用RT-PCR技术对该病毒的8个基因片段分11段进行扩增,通过与双向转录载体pHW2000连接,转染293T和MDCK共培养细胞,成功拯救出全部基因均来自于A/Swine/Henan/S4/01(H3... 详细信息

利用反向遗传学操作技术,以A/Swine/Henan/S4/01(H3N2)毒株为亲本株,采用RT-PCR技术对该病毒的8个基因片段分11段进行扩增,通过与双向转录载体pHW2000连接,转染293T和MDCK共培养细胞,成功拯救出全部基因均来自于A/Swine/Henan/S4/01(H3N2)的猪流感病毒,生物学实验结果表明该拯救毒株在鸡胚半数感染量,组织培养半数感染量,稳定性试验等方面都与亲本株保持一致。拯救的H3N2亚型猪流感病毒经鸡胚多次传代后血凝价最高可达到1颐256,在接种MDCK60h后,血凝价可达到1颐64。H3N2亚型猪流感病毒的拯救成功,为研究流感病毒突破种间屏障分子机制和猪流感基因工程疫苗株的筛选奠定了基础。

关键词：猪流感 H3N2亚型反向遗传病毒拯救

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西尼罗病毒NSl蛋白特异性单克隆抗体的制备与鉴定

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中国免疫学杂志 2011年第6期27卷 529-532页

作者：马健男杨涛徐青元孙恩成林燕刘霓红杨银辉李文京步志高吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室哈尔滨150001 军事医学科学院微生物流行病研究所、病原微生物生物炎全国家重点实验室北京100071 中国动物疫病预防控制中心北京100125

目的：制备针对西尼罗病毒NSl蛋白的特异性单克隆抗体。方法：以原核表达的重组NSI蛋白为免疫原，免疫BALB／c小鼠并通过常规杂交瘤技术将免疫后小鼠脾细胞与SP2／O细胞进行融合。以真核表达的重组NSl蛋白为检测用抗原，建立间接ELISA... 详细信息

目的：制备针对西尼罗病毒NSl蛋白的特异性单克隆抗体。方法：以原核表达的重组NSI蛋白为免疫原，免疫BALB／c小鼠并通过常规杂交瘤技术将免疫后小鼠脾细胞与SP2／O细胞进行融合。以真核表达的重组NSl蛋白为检测用抗原，建立间接ELISA检测方法筛选分泌NSl蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞。并利用Western blot和IFA试验对所获得的单克隆抗体进行鉴定。结果：共获得了2株稳定分泌NSl蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为WN-1CIO和WN-3D10，其亚类鉴定分别属于IgG2z和IgG1o这2株单克隆抗体均能与西尼罗病毒NSl蛋白和病毒抗原发生特异性反应，而与日本脑炎病毒无交叉反应。结论：本实验成功制备出针对西尼罗病毒NSI蛋白的特异性单克隆抗体，为我国建立西尼罗病毒与日本脑炎病毒的血清学鉴别诊断方法奠定了基础。

关键词：西尼罗病毒 NSl蛋白单克隆抗体

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