检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2009年第2期31卷 161-164页

作者：葛叶邓国华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

A型流感病毒（Influenza A virus，IV）基因组为单负链线状分节段RNA，总长约13600个核苷酸（nt）。根据襄膜上血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）抗原性的不同，可分为16个H亚型（H1～H16）和9个N亚型（N1～N9）。A型流感病毒可突破种问... 详细信息

A型流感病毒（Influenza A virus，IV）基因组为单负链线状分节段RNA，总长约13600个核苷酸（nt）。根据襄膜上血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）抗原性的不同，可分为16个H亚型（H1～H16）和9个N亚型（N1～N9）。A型流感病毒可突破种问障碍适应新的宿主，从而导致新的血清型毒株流行。1918年、1957年和1968年3次大规模流感疫病的暴发，给人们敲响了警钟。在此背景下，疫苗不断更新、预防流感病毒的药物相继问世，

关键词： A型流感病毒聚合酶 virus 神经氨酸酶 RNA 基因组核苷酸抗原性

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

流感病毒聚合酶PB1-1蛋白的表达与单克隆抗体的制备

引用

中国预防兽医学报 2009年第9期31卷 726-729页

作者：葛叶邓国华李雪平陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为制备抗流感病毒(AIV)聚合酶PB1-1蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究采用RT-PCR技术扩增H5N1亚型AIV聚合酶PB1部分基因片段,并将其克隆至载体pET-32a,转化至BL21细菌进行重组蛋白表达。靶蛋白经Ni+柱纯化后,western blot分析证实该重组蛋白... 详细信息

为制备抗流感病毒(AIV)聚合酶PB1-1蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究采用RT-PCR技术扩增H5N1亚型AIV聚合酶PB1部分基因片段,并将其克隆至载体pET-32a,转化至BL21细菌进行重组蛋白表达。靶蛋白经Ni+柱纯化后,western blot分析证实该重组蛋白与AIV阳性血清具有良好的免疫反应性。用纯化的PB1-1蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,采用ELISA方法筛选阳性细胞克隆,连续多次克隆纯化后获得2株能稳定分泌抗H5亚型PB1 MAb的细胞株CGFF10和FGFCE5,2株杂交瘤细胞的细胞培养上清及腹水效价分别为103、103和106、107。2株MAb的亚类均为IgG1。实验证明:所制备的MAb能与H5N1亚型PB1-1抗原发生特异反应,具有免疫活性,从而为PB1结构及功能的深入研究奠定了基础。

关键词： PB1基因原核表达单克隆抗体

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

H5N1亚型高致病性禽流感病毒A/duck/FuJian/01/02株反向基因操作系统的建立

引用

农业生物技术学报 2009年第3期17卷 393-397页

作者：索永兵樊树芳邓国华温峰琴希尼尼根陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室内蒙古农业大学动物科学与医学学院

从含A/duck/FuJian/01/02(W-DKFJ)株病毒的鸡胚尿囊液中提取总RNA,用RT-PCR扩增PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M和NS全基因片段,将其分别克隆至PBD载体中。利用8质粒反向遗传操作系统,将重组的PBD质粒共转染293T细胞,成功拯救了该病毒,并... 详细信息

从含A/duck/FuJian/01/02(W-DKFJ)株病毒的鸡胚尿囊液中提取总RNA,用RT-PCR扩增PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M和NS全基因片段,将其分别克隆至PBD载体中。利用8质粒反向遗传操作系统,将重组的PBD质粒共转染293T细胞,成功拯救了该病毒,并命名为R-DKFJ。106EID50的W-DKFJ和R-DKFJ分别经鼻腔接种BALB/c小鼠后,观察到两组小鼠体重均明显下降,并且在10d之内全部死亡。与此同时,在感染小鼠后第3天在脑、脾、肾、肺脏等脏器中分离到病毒,两组小鼠肺脏病毒含量分别为7.4±0.4和7.1±0.1,其MLD50分别为0.5log10EID50/mL和0.98log10EID50/mL。结果表明,救获病毒R-DKFJ与其亲本野生毒W-DKFJ在对哺乳动物模型BALB/c小鼠致病性方面保持着一致的生物学特性。

关键词： H5N1 禽流感病毒反向遗传生物学特性

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

表达H5N1亚型猪流感病毒HA基因重组腺病毒的构建及其免疫原性

引用

畜牧兽医学报 2009年第9期40卷 1363-1369页

作者：吴运谱乔传玲杨焕良陈艳展小过辛晓光陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室哈尔滨150001 辽宁省动物疫病预防控制中心沈阳110164

RT-PCR扩增猪流感病毒A/Swine/Fujian/1/2001(H5N1)株的HA基因,构建重组腺病毒穿梭质粒pDC315-H5 HA-EGFP。采用Ad-Max同源重组系统和共转染技术,构建了表达H5N1亚型猪流感病毒HA基因的复制缺陷型重组腺病毒(rAd-H5 HA-EGFP)。经目的基... 详细信息

RT-PCR扩增猪流感病毒A/Swine/Fujian/1/2001(H5N1)株的HA基因,构建重组腺病毒穿梭质粒pDC315-H5 HA-EGFP。采用Ad-Max同源重组系统和共转染技术,构建了表达H5N1亚型猪流感病毒HA基因的复制缺陷型重组腺病毒(rAd-H5 HA-EGFP)。经目的基因PCR检测及序列测定,结果表明:HA基因已经正确地插入到腺病毒的基因组中;通过RT-PCR检测与Western blot分析,结果表明:HA基因能够进行正确转录,并且所表达的蛋白具有相应的生物学活性。子代重组腺病毒rAd-H5 HA-EGFP经增殖、纯化后感染性滴度可达2.26×1010TCID50mL-1。rAd-H5 HA-EGFP免疫BALB/c小鼠能够诱导特异性的HI抗体产生,有效阻止病毒在体内的复制。

关键词：猪流感病毒 H5N1亚型 HA基因重组腺病毒

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

A型流感病毒核蛋白结构和功能的研究进展

引用

黑龙江畜牧兽医 2009年第9期 17-19页

作者：杜金玲刘春国刘明李洪涛张新涛石薇琳中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

A型流感病毒为重要的传染性病原。流感病毒核蛋白是病毒转录装置中的结构成分,在病毒生活周期中执行多种重要功能,文章简要综述了核蛋白在流感病毒结构和功能方面的研究进展,以便为促进疫苗的设计和抗病毒治疗药物的研制提供借鉴。

关键词：流感病毒核蛋白结构与功能

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

密码子优化的H5亚型流感病毒HA基因重组质粒在哺乳动物细胞中的高效表达及其免疫原性的研究

引用

自然科学进展 2009年第8期19卷 813-818页

作者：刘春国刘明孙恩成李洪涛杜金玲张新涛石薇琳谢金鑫刘大飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室及国家禽流感参考实验室哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学动物科技学院大庆163319

为了提高流感病毒血凝素(HA)基因的表达量及其免疫原性,按照哺乳动物偏爱密码子将A/Goose/HLJ/QFY/04(H5N1)流感病毒的血凝素基因进行优化改造,然后插入到真核表达载体pCI-neo中,构建了真核表达质粒pCI-opti-HA.将此质粒和含野生HA基因... 详细信息

为了提高流感病毒血凝素(HA)基因的表达量及其免疫原性,按照哺乳动物偏爱密码子将A/Goose/HLJ/QFY/04(H5N1)流感病毒的血凝素基因进行优化改造,然后插入到真核表达载体pCI-neo中,构建了真核表达质粒pCI-opti-HA.将此质粒和含野生HA基因的真核表达质粒pCI-wt-HA分别转染Vero或293T细胞,通过免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)和蛋白免疫印迹(WB)实验比较HA蛋白的表达量.将两种重组质粒免疫Balb/c小鼠,比较两者诱导的抗体产生水平.三次免疫后两周用强毒攻击,通过体温和体重变化评价两种重组质粒的免疫保护效果.IP-MA和WB实验结果表明:密码子优化后,HA蛋白在哺乳动物细胞中的表达水平显著提高.酶联免疫吸附实验(ELISA)结果表明:小鼠免疫后密码子优化的重组质粒诱导的特异性抗体效价较高.攻毒试验结果表明:两种重组质粒均能够提供较好的保护.

关键词： H5亚型流感病毒 HA 密码子优化 DNA疫苗免疫效果

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

以GPT和GFP为双重筛选标记的禽痘病毒转移载体的构建及鉴定

引用

中国预防兽医学报 2009年第7期31卷 501-504页

作者：王艳丽李俊辉姜永萍夏俊裴磊冉多良陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 新疆农业大学动物医学院新疆乌鲁木齐830052

为研制和开发以禽痘病毒为载体的重组病毒疫苗,本研究构建了禽痘病毒通用转移载体pSY681-gfp-gpt,该载体含有gfp和gpt2种报告基因及背对的痘苗病毒晚期启动子P11和早期启动子P7.5,P11启动gfp和gpt两个基因,P7.5用于启动外源基因,在早期... 详细信息

为研制和开发以禽痘病毒为载体的重组病毒疫苗,本研究构建了禽痘病毒通用转移载体pSY681-gfp-gpt,该载体含有gfp和gpt2种报告基因及背对的痘苗病毒晚期启动子P11和早期启动子P7.5,P11启动gfp和gpt两个基因,P7.5用于启动外源基因,在早期启动子P7.5下游引入NotⅡ和AflⅡ两个酶切位点,用于外源基因的插入。为检测禽痘病毒转移载体pSY681-gfp-gpt的有效性,将H9亚型禽流感病毒A/Chicken/Shanghai/10/01(H9N2)的HA基因插入到该载体中构建转移载体pSY681-gfp-gpt-HA9,将转移载体转染已感染禽痘病毒S-FPV-017的鸡胚成纤维细胞,利用gfp和gpt同时进行双重筛选、数轮蚀斑纯化后获得了重组病毒rFPV-gpt-gfp-HA9,通过PCR、westernblot鉴定,结果证明,获得了能稳定表达H9亚型禽流感病毒HA蛋白的重组禽痘病毒rFPV-gpt-gfp-HA9,为今后重组禽痘病毒活载体疫苗的研制奠定了基础。

关键词：重组禽痘病毒绿色荧光蛋白黄嘌呤鸟嘌呤磷酸转移酶 HA基因

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

H1N1亚型猪流感病毒反向遗传操作系统的建立及高产细胞型疫苗株的拯救

引用

中国农业科学 2009年第5期42卷 1797-1804页

作者：刘大飞刘明刘春国杨涛万春和陈浩齐金龙杜金玲李洪涛孙恩成刘大程中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室东北农业大学动物医学院黑龙江八一农垦大学动物科技学院莱阳市城厢兽医站

【目的】建立H1N1亚型猪流感病毒反向遗传学操作系统及拯救出能够在动物传代细胞中高水平复制的H1N1亚型猪流感疫苗株。【方法】利用反向遗传操作技术,对猪流感病毒广东分离株进行拯救。【结果】首次成功拯救出全部片段均来自于亲本株... 详细信息

【目的】建立H1N1亚型猪流感病毒反向遗传学操作系统及拯救出能够在动物传代细胞中高水平复制的H1N1亚型猪流感疫苗株。【方法】利用反向遗传操作技术,对猪流感病毒广东分离株进行拯救。【结果】首次成功拯救出全部片段均来自于亲本株的猪流感病毒rH1N1,并且成功拯救出了具有高度细胞适应性毒株re-LM株,研究结果表明二者均具有良好的遗传稳定性。rH1N1经MDCK细胞连续传代培养后,血凝价最高仅为1:64;而re-LM的血凝价最高可以稳定在1:1024,表明该毒株具有细胞繁殖高产的特性。用该重组病毒制备油乳剂灭活苗免疫2月龄仔猪,首免2周即可检测出HI抗体,平均效价在1:32以上,三免后2周HI抗体平均效价达到1:512,说明其有良好的免疫原性。【结论】H1N1亚型猪流感病毒反向遗传操作系统的成功建立为猪流感病毒致病机理、传播机制及病毒基因功能的研究奠定了基础;重组细胞高产型猪流感病毒株的拯救为H1N1亚型猪流感疫苗的研制开辟了新的途径。

关键词：猪流感 H1N1亚型反向遗传操作技术细胞培养型流感疫苗

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪流感病毒HA基因的克隆及杆状病毒转移载体的构建

引用

生物技术通报 2009年第9期25卷 97-100页

作者：赵朴郑玉姝贾贝贝乔传玲陈化兰刘兴友李海燕河南科技学院动物科学学院新乡453003 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室哈尔滨150001

猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)不仅给养猪业造成重大经济损失,而且威胁人类健康。血凝素(hemag-glutinin,HA)是SIV囊膜上的重要免疫原,介导病毒吸附和膜融合。针对流感病毒的中和抗体主要以HA靶标阻断受体结合,本研究通过RT-PC... 详细信息

猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)不仅给养猪业造成重大经济损失,而且威胁人类健康。血凝素(hemag-glutinin,HA)是SIV囊膜上的重要免疫原,介导病毒吸附和膜融合。针对流感病毒的中和抗体主要以HA靶标阻断受体结合,本研究通过RT-PCR扩增了猪流感病毒A/Swine/Inner Mongolia/547/01(H3N2)的HA基因,并将其克隆入pMD18-T载体。重组pMD18-T经KpnI和PstI酶切后得到的HA基因插入pMelBacA载体的KpnI/PstI位点。PCR和限制性内切酶分析鉴定表明成功构建了pMelBacA-HA转移载体。这为开发HA亚单位疫苗奠定了基础。

关键词：猪流感病毒 HA基因克隆转移载体

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪流感疫苗的研究进展

引用

黑龙江畜牧兽医 2009年第6期 32-33页

作者：刘大飞刘明刘春国杨涛刘大程中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 莱阳市城厢兽医站山东莱阳265200

猪流感（swine influenza，SI）是由流感病毒引起的一种严重呼吸道疾病，临床以突发、高热、咳嗽、呼吸困难、衰竭、高发病率、低死亡率为特征。迄今已发现的A型猪流感病毒（swine influenza virus，SIV）有H1N1、H1N2、H1N7、H3N1、H3N... 详细信息

猪流感（swine influenza，SI）是由流感病毒引起的一种严重呼吸道疾病，临床以突发、高热、咳嗽、呼吸困难、衰竭、高发病率、低死亡率为特征。迄今已发现的A型猪流感病毒（swine influenza virus，SIV）有H1N1、H1N2、H1N7、H3N1、H3N2、 H3N3、H3N6、H4N6、H5N1和H9N2等10种不同血清亚型。自被发现以来，猪流感已成为严重危害猪群的疾病之一，已遍及亚洲、欧洲、非洲、南美洲、北美洲等，可谓全球流行。目前，世界范围内流行的猪流感血清型主要有人源H3N2、经典猪H1N1和类禽源H1N13种。

关键词：猪流感病毒流感疫苗呼吸道疾病 virus 呼吸困难血清亚型 H9N2 H5N1

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：