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禽流感病毒H5N1变异株灭活疫苗(Re-4株)对鸡、鸭和鹅的免疫效果研究

中国预防兽医学报 2010年第10期32卷 800-803页

作者：曾显营钟功勋李雁冰施建忠姜永萍王彦妮万晓鹏毛胜刚田国彬陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所哈尔滨维科生物技术开发公司黑龙江哈尔滨150001

为系统评估禽流感病毒(AIV)H5N1变异株灭活疫苗(Re-4株)对家禽的免疫效果,本研究将Re-4株油乳剂灭活疫苗免疫SPF鸡和商品蛋鸡、商品鸭及商品鹅。免疫后每周采集血清测定HI抗体,绘制抗体消长曲线,免疫SPF鸡在免疫后2周、3周和50周时以105... 详细信息

为系统评估禽流感病毒(AIV)H5N1变异株灭活疫苗(Re-4株)对家禽的免疫效果,本研究将Re-4株油乳剂灭活疫苗免疫SPF鸡和商品蛋鸡、商品鸭及商品鹅。免疫后每周采集血清测定HI抗体,绘制抗体消长曲线,免疫SPF鸡在免疫后2周、3周和50周时以105EID50剂量的强毒株(CK/SX/2/06)进行攻毒。研究结果显示,该疫苗对蛋鸡、鸭、鹅均具有良好的免疫效果,而且SPF免疫鸡血清HI抗体在4log2以上时能够完全抵抗CK/SX/2/06强毒的攻击。因此,根据实验结果推荐该油乳剂灭活疫苗的对上述禽类的免疫程序:商品蛋鸡10日龄颈部皮下注射0.3mL,60日龄和110日龄(开产前)时依次胸肌注射0.5mL和1.0mL进行免疫;商品鸭、鹅在2周龄均以0.5mL首免,5周龄和4月龄左右时以1mL的剂量肌肉注射方式进行加强免疫。

关键词：禽流感 H5N1 变异株灭活疫苗免疫效果

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禽流感病毒N8亚型神经氨酸酶基因的克隆和全序列分析

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中国兽医科学 2010年第1期40卷 24-29页

作者：王馥梅包红梅陶启蒙蔡东东赵玉辉王秀荣陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

用SPF鸡胚增殖禽流感病毒A/Duck/Australia/341/83(H15N8),通过RT-PCR获得了NA基因全长,连接并转化,增菌培养后,提取阳性质粒进行序列测定,获得了禽流感病毒N8亚型的NA基因序列,分析了NA8基因与其他流感病毒神经氨酸酶基因的相互关系。... 详细信息

用SPF鸡胚增殖禽流感病毒A/Duck/Australia/341/83(H15N8),通过RT-PCR获得了NA基因全长,连接并转化,增菌培养后,提取阳性质粒进行序列测定,获得了禽流感病毒N8亚型的NA基因序列,分析了NA8基因与其他流感病毒神经氨酸酶基因的相互关系。结果显示,所获得的NA基因片段全长1459bp,最大开放阅读框编码457个氨基酸残基,经Blast分析,该基因与GenBank中其他13株N8亚型毒株的NA基因核苷酸序列同源性为91.6%～73.3%。与其他8个N1～N9亚型NA基因进行遗传演化分析,N8亚型与N5亚型NA基因的亲缘关系最近,与N3亚型NA基因的亲缘关系最远。结果表明,禽流感病毒N8亚型NA基因序列的测定对N8亚型流感病毒的诊断和预防具有重要意义。

关键词：禽流感病毒 N8亚型序列同源性

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一株鸡源H6N1亚型禽流感病毒全基因的分子特征

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中国预防兽医学报 2010年第3期32卷 214-217页

作者：刘丽玲李雁冰施建忠田国彬张翼曾显营刘娣陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江省农业科学院黑龙江哈尔滨150086

2008年国家禽流感参考实验室在我国禽流感流行病学调查期间分离到1株鸡源H6N1亚型禽流感病毒(AIV)A/Chicken/ZheJiang/80/2008(H6N1)(简称为CK/ZJ/80/08),为了弄清该病毒的分子特征,我们对其8个基因片段分别进行扩增和序列测定,对每个... 详细信息

2008年国家禽流感参考实验室在我国禽流感流行病学调查期间分离到1株鸡源H6N1亚型禽流感病毒(AIV)A/Chicken/ZheJiang/80/2008(H6N1)(简称为CK/ZJ/80/08),为了弄清该病毒的分子特征,我们对其8个基因片段分别进行扩增和序列测定,对每个基因进行BLAST分析,找出同源性最高的毒株。利用DNAStar中的Megalign功能进行进化分析。结果表明CK/ZJ/80/08的HA裂解位点附近的氨基酸序列为QIETR↓GLF,推测可能为一株低致病力AIV。其HA基因与日本北海道的A/duck/Hokkaido/228/2003(H6N8)和黑龙江的A/mallard/Heilongjiang/131/2006(H6N2)以及香港早期分离株A/chicken/HongKong/17/77(H6N1)等处于同一分支;NA基因在颈部没有缺失,与A/duck/Tsukuba/718/2005(H1N1)、A/goose/Guangdong/1/96(H5N1)等处于同一分支;M基因与A/duck/Hokkaido/W90/2007(H10N7)高度同源(同源性为99%);NS基因与A/duck/Denmark/65047/04(H5N2)和A/goose/Guangdong/1/96(H5N1)处于同一分支。NP、PA、PB1、PB2分别与贵州和江西分离的H5N2亚型AIV的相应基因关系密切,同源性分别为98%、97%、97%、97%。由此推测CK/ZJ/80/08可能是由H6N2、H1N1、H10N7、H5N2等多个亚型病毒重组而成。

关键词：禽流感病毒 H6N1亚型全基因分子特征

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H5N1亚型人禽流感病毒A/Anhui/2/2005株反向遗传操作系统的建立

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中国预防兽医学报 2010年第2期32卷 135-138页

作者：冯华朋钟功勋张月梅李旭勇李雁冰施建忠陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古呼和浩特010018

为建立H5N1亚型人源禽流感病毒A/Anhui/2/2005(W-AH05)反向遗传操作系统,本研究构建了W-AH05的8重组质粒,拯救出人源禽流感病毒R-A/Anhui/2/2005(R-AH05)。全基因序列测定结果表明,救获病毒R-AH05与野生病毒W-AH05的核苷酸序列完全一致... 详细信息

为建立H5N1亚型人源禽流感病毒A/Anhui/2/2005(W-AH05)反向遗传操作系统,本研究构建了W-AH05的8重组质粒,拯救出人源禽流感病毒R-A/Anhui/2/2005(R-AH05)。全基因序列测定结果表明,救获病毒R-AH05与野生病毒W-AH05的核苷酸序列完全一致;动物试验证实,R-AH05保持了W-AH05的对BALB/c小鼠呈高致病力的特性,其MLD50分别为1.5log10EID50和1.2log10EID50。R-AH0与W-AH05分别以106EID50剂量鼻腔感染BALB/c小鼠,病毒在小鼠体内的分布情况及各个脏器中的病毒滴度基本相同。由此可见,R-AH05保持了W-AH05的生物学特性,从而为进一步研究人源禽流感病毒的致病机理及跨宿主传播机制等提供了操作平台。

关键词： H5N1 人源禽流感病毒反向遗传操作

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猪流感病毒河南株的分离鉴定和生物学特性

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华北农学报 2010年第4期25卷 107-110页

作者：赵朴郑玉姝贾贝贝刘丽艳刘兴友李海燕河南科技学院动物科学学院河南新乡453003 动物疫病和残留物防控河南省高校工程技术研究中心河南新乡453003 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、兽医生物技术国家重点实验室、农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

从河南省有呼吸道症状的5个不同猪场采集棉拭子和肺组织样品。样品处理后,通过尿囊腔途径接种10日龄SPF鸡胚。获得3株病毒,经血凝和血凝抑制试验鉴定,为H3N2亚型流感病毒,并对其部分生物学特性进行了研究。结果表明,其半数鸡胚感染量(EI... 详细信息

从河南省有呼吸道症状的5个不同猪场采集棉拭子和肺组织样品。样品处理后,通过尿囊腔途径接种10日龄SPF鸡胚。获得3株病毒,经血凝和血凝抑制试验鉴定,为H3N2亚型流感病毒,并对其部分生物学特性进行了研究。结果表明,其半数鸡胚感染量(EID50)分别是0-9.56/0.2mL,10-8.56/0.2mL和10-8.44/0.2mL,对小白鼠的半数致死量(LD50)分别是10-1.56/0.1mL,10-1.45/0.1mL和10-1.50/0.1mL;它们的血凝素对热不稳定,能凝集1%马、牛、驴、猪、绵羊、鸡、兔、豚鼠、小白鼠及人O型血的红细胞。这为了解河南猪群中流行的流感病毒奠定了基础。

关键词：猪流感病毒分离鉴定生物学特性

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本地毛形线虫49 ku排泄分泌蛋白基因的克隆及序列分析

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动物医学进展 2010年第10期31卷 68-71页

作者：郑宝亮边传周王秀荣宋铭忻郑州牧业工程高等专科学校河南郑州450011 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

为了获得本地毛形线虫(Trichinella nativa)49 ku ES蛋白的结构基因,用Trizol提取***肌幼虫的总RNA,用RT-PCR方法扩增出了编码***49 ku排泄分泌蛋白的结构基因。将PCR产物与T载体连接并经过大肠埃希菌增殖后送检测序。序列测定表明,目... 详细信息

为了获得本地毛形线虫(Trichinella nativa)49 ku ES蛋白的结构基因,用Trizol提取***肌幼虫的总RNA,用RT-PCR方法扩增出了编码***49 ku排泄分泌蛋白的结构基因。将PCR产物与T载体连接并经过大肠埃希菌增殖后送检测序。序列测定表明,目的基因TNPG长度为951bp,核苷酸序列同已发表的***相应的序列P49同源性为98.63%,所推导的氨基酸序列同源性为99.05%。为***49 ku ES蛋白结构基因的进一步研究打下基础。

关键词：本地毛形线虫旋毛形线虫 49ku排泄分泌蛋白基因序列

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H7亚型禽流感病毒RT-LAMP快速检测方法的建立

H7亚型禽流感病毒RT-LAMP快速检测方法的建立

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会

作者：包红梅王秀荣赵玉辉陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室

根据GenBank中登录的H7亚型禽流感病毒（H7-AIV）血凝素基因序列,设计了一套特异识别HA基因序列中6个不同区段的环介导恒等温扩增（LAMP）引物,并以此套引物建立了一种基于RT-LAMP（逆转录环介导等温核酸扩增）技术的H7亚型禽流感病毒... 详细信息

根据GenBank中登录的H7亚型禽流感病毒（H7-AIV）血凝素基因序列,设计了一套特异识别HA基因序列中6个不同区段的环介导恒等温扩增（LAMP）引物,并以此套引物建立了一种基于RT-LAMP（逆转录环介导等温核酸扩增）技术的H7亚型禽流感病毒诊断方法。结果表明,该方法对H7-AIV RNA的最小检测限为10,灵敏度高于普通一步法RT-PCR 100倍;全部反应可在1.5 h内完成;在反应体系中添加SYBR GREENⅠ染料后,可通过肉眼观察有无荧光直接判定结果。灵敏性及特异性试验证明,该方法灵敏度高、特异性好,能够作为H7亚型禽流感病毒的快速诊断方法。

关键词： H7亚型禽流感病毒逆转录环介导恒等温扩增快速检测

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两湖地区H6亚型禽流感病毒HA及NA的基因序列分析

两湖地区H6亚型禽流感病毒HA及NA的基因序列分析

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会

作者：丁晴微齐瑛琳李印施建忠崔鹏飞于杨崔佳莹陈化兰邓国华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室

2008年～2009年间,哈尔滨兽医研究所动物流感实验室在两湖地区的市场检测过程中分离到了14株H6亚型禽流感病毒,其中H6N2亚型有12株,H6N6亚型有2株。我们对这14株病毒的HA,NA进行序列测定和进化分析。结果发现DK/HN/284/09的HA片段与其... 详细信息

2008年～2009年间,哈尔滨兽医研究所动物流感实验室在两湖地区的市场检测过程中分离到了14株H6亚型禽流感病毒,其中H6N2亚型有12株,H6N6亚型有2株。我们对这14株病毒的HA,NA进行序列测定和进化分析。结果发现DK/HN/284/09的HA片段与其他13株的HA差异很大,达到19.4%～20.2%,其余13株毒同源性在94.2%～99.9%。H6N2亚型间的NA片段的同源性在91.1%～99.9%,差异性比较大。两株H6N6的NA片段同源性为89.5%,差异显著;这些数据表明:不同毒株呈现出明显的时间和地域性差异。与我国周边地区的H6亚型禽流感毒株进行比较发现,只有DK/HN/284/09的HA片段与香港早期的毒株可能有着共同的来源,其余都和香港和韩国等的毒株有着较大的差异性,HA基因的糖基化位点也有所不同,表现出明显的异源性。

关键词：禽流感病毒 H6亚型 HA NA 基因分析

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两湖地区H6亚型禽流感病毒HA及NA的基因序列分析

两湖地区H6亚型禽流感病毒HA及NA的基因序列分析

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会

作者：丁睛微齐瑛琳李印施建忠崔鹏飞于杨崔佳莹陈化兰邓国华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨 150001

08年～2009年间，哈尔滨兽医研究所动物流感实验室在两湖地区的市场检测过程中分离到了14株H6亚型禽流感病毒，其中H6N2亚型有12株，H6N6亚型有2株。我们对这14株病毒的HA，NA进行序列测定和进化分析。结果发现DK/HN/284/09的HA片段与其...

08年～2009年间，哈尔滨兽医研究所动物流感实验室在两湖地区的市场检测过程中分离到了14株H6亚型禽流感病毒，其中H6N2亚型有12株，H6N6亚型有2株。我们对这14株病毒的HA，NA进行序列测定和进化分析。结果发现DK/HN/284/09的HA片段与其他13株的HA差异很大，达到19.4％～20.2％,其余13株毒同源性在94.2％～99.9％。H6N2亚型间的NA片段的同源性在91.1％～99.9％，差异性比较大。两株H6N6的NA片段同源性为89.5％，差异显著;这些数据表明：不同毒株呈现出明显的时间和地域性差异。与我国周边地区的H6亚型禽流感毒株进行比较发现，只有DK/HN/284/09的HA片段与香港早期的毒株可能有着共同的来源，其余都和香港和韩国等的毒株有着较大的差异性，HA基因的糖基化位点也有所不同。表现出明显的异源性。

关键词：

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禽流感变异株灭活疫苗(H5N1,Re-4株)对鸡、鸭和鹅的免疫效果研究

禽流感变异株灭活疫苗(H5N1,Re-4株)对鸡、鸭和鹅的免疫效果研究

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会

作者：曾显营钟功勋李雁冰施建忠姜永萍王彦妮万晓鹏毛胜刚田国彬陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室哈尔滨维科生物技术开发公司

为系统评估禽流感变异株灭活疫苗（H5N1,Re-4株）对家禽的免疫效果,本研究将Re-4株油乳剂灭活疫苗免疫SPF鸡和商品蛋鸡、商品鸭、商品鹅。免疫后每周采集血清测定HI抗体,绘制抗体消长曲线,免疫SPF鸡在免疫后2周、3周和50周时以10～5EID... 详细信息

为系统评估禽流感变异株灭活疫苗（H5N1,Re-4株）对家禽的免疫效果,本研究将Re-4株油乳剂灭活疫苗免疫SPF鸡和商品蛋鸡、商品鸭、商品鹅。免疫后每周采集血清测定HI抗体,绘制抗体消长曲线,免疫SPF鸡在免疫后2周、3周和50周时以10～5EID强毒（CK/SX/2/06）的剂量进行攻毒试验。研究结果显示,该疫苗对蛋鸡、鸭、鹅家禽均具有良好的免疫效果,而且SPF免疫鸡血清HI抗体在4 log2以上时能够完全抵抗变异株CK/SX/2/06强毒的攻击。根据试验结果推荐该油乳剂灭活疫苗的对上述禽类的免疫程序:商品蛋鸡10日龄颈部皮下注射0.3 mL,60日龄和110日龄（开产前）时依次胸肌注射0.5 mL和1.0 mL进行免疫;商品鸭、鹅在2周龄均以0.5 mL首免,5周龄和4月龄左右时以1 mL的剂量肌肉注射方式进行加强免疫。

关键词：禽流感 H5N1 变异株灭活疫苗免疫效果

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