检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2005年第1期27卷 13-17页

作者：陈君彦李海燕申之义陈化兰于康震毕英佐中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室内蒙古农业大学动物科学与医学学院全国畜牧兽医总站北京100026 华南农业大学动物科学学院

对 2 0 0 1年中国华南及东北地区的 15株H1N1亚型猪流感病毒 (SIV)分离株的血凝素 (HA)基因进行了序列测定和分析 ,并绘制了进化树。研究结果表明 ,15株H1N1SIV和HA基因核苷酸全长为 1778bp ,共编码 5 6 6个氨基酸 ;而且 ,15株H1N1亚型... 详细信息

对 2 0 0 1年中国华南及东北地区的 15株H1N1亚型猪流感病毒 (SIV)分离株的血凝素 (HA)基因进行了序列测定和分析 ,并绘制了进化树。研究结果表明 ,15株H1N1SIV和HA基因核苷酸全长为 1778bp ,共编码 5 6 6个氨基酸 ;而且 ,15株H1N1亚型SIV的HAI蛋白在 10、11、2 3、87、2 87位都存在高度保守的糖基化位点 ,此外 ,在 2 76位多了一个“_NTT_”糖基化位点 ,与参考毒株SW /IW / 93/ 0 1一致 ,这可能是近期H1N1亚型SIV的一个分子特征。本研究进一步发现 ,15株H1N1亚型SIV的HA基因切割位点氨基酸组成为IPSIQSR↓G ,具有非高致病力毒株分子特征 ;而其受体结合位点在HA蛋白上第 2 2 6位是Q ,第 2 2 8位是G ,可能具有感染禽的潜力。经同源性比较 ,15株H1N1亚型SIV的HA基因与古典型H1N1猪谱系中的WIS/ 4 75 4 / 94的同源性相对最高 ,核苷酸和氨基酸序列同源性分别达到 95 7%～ 96 1%和96 5 %～ 97 2 %。由同源性比较结果和进化树分析可见。

关键词： H1N1亚型猪流感病毒中国分离株血凝素基因分子演化序列分析

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检测H1-15禽流感病毒亚型的DNA芯片初步研究

检测H1-15禽流感病毒亚型的DNA芯片初步研究

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会

本文对流感病毒14个血凝素亚型的基因芯片检测技术进行了初步研究。通过RT-PCR克隆禽流感病毒血凝素基因片段,获得重组质粒。从重组质粒扩增大约500 bp的DNA片段,浓缩后点到氨基化玻璃载体上,制成芯片。待检病毒样品用Trozol LS提取RNA... 详细信息

本文对流感病毒14个血凝素亚型的基因芯片检测技术进行了初步研究。通过RT-PCR克隆禽流感病毒血凝素基因片段,获得重组质粒。从重组质粒扩增大约500 bp的DNA片段,浓缩后点到氨基化玻璃载体上,制成芯片。待检病毒样品用Trozol LS提取RNA,反转录过程中用Cy5标记样品cDNAs。将标记样品与芯片杂交,扫描芯片上待检样品与芯片上捕捉探针的结合位点,杂交信号与预期设想一致。结果显示,DNA芯片技术可以提供一种有效的AIV血凝素亚型鉴别诊断方法。

关键词：禽流感病毒基因芯片血凝素亚型鉴定

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抗禽流感H9N2亚型血凝素特异性单克隆抗体的制备与分析

抗禽流感H9N2亚型血凝素特异性单克隆抗体的制备与分析

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会

作者：刘振勇邓国华李呈军张立春田国彬何后军于康震陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室江西农业大学中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室

本研究采用低致病力禽流感病毒(LPAIV)H9N2亚型A/Chicken/Shanghai/10/99(SH/10/99)和A/CK/Guangx-i/10/99(GX/10/99)毒株作为免疫原,免疫8周龄BALB/C小鼠,用血凝抑制试验(HI)方法筛选和有限稀释法克隆纯化,最后获得十株H9亚型HA特异性单抗细胞株:其中SH/10/99作为免疫原的有四株:A3、B/D12、A11/C6、A/B3;GX/10/99作为免疫原的有六株:C/D4、D/G7、C/C10、B/E9、C/E2、E/B11。10株具有HI活性的H9亚型特异性McAbs与其他H9亚型AIV分离株的交叉反应实验表明,A/B3、B/D12、C/D4、D/G7这四株单抗对所选择的毒株具有较好的Hl活性,A/CK/Heilongjiang/35/00病毒不与任何一株单抗发生血凝抑制反应。A/B3、B/D12、C/D4进行病毒的中和实验结果表明,抗体的中和活性与其血凝抑制活性之间存在很大的相关性,且基本上是一致的,且能对鸡胚提供很好的保护。所以这些单克隆抗体将在禽流感的预警预报工作以及H9亚型流感病毒HA基因的结构和功能的研究中发挥重要的作用。

关键词：单克隆抗体禽流感 H9亚型 HI

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不同致病力禽流感病毒的细胞生长特性

不同致病力禽流感病毒的细胞生长特性

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会

作者：刘丽玲王秀荣陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室

本研究用2个不同亚型的AIV感染Madin-Darby canine kidney(MDCK)细胞,通过观察细胞病变、红细胞凝集实验、间接免疫荧光等探讨不同致病力禽流感病毒(AIV)在MDCK细胞上的生长特性;同时取这2株不同浓度(10-2-10-7)AIV在MDCK上培养72 h的... 详细信息

本研究用2个不同亚型的AIV感染Madin-Darby canine kidney(MDCK)细胞,通过观察细胞病变、红细胞凝集实验、间接免疫荧光等探讨不同致病力禽流感病毒(AIV)在MDCK细胞上的生长特性;同时取这2株不同浓度(10-2-10-7)AIV在MDCK上培养72 h的细胞培养上清0.1 mL接种于9-11日龄鸡胚尿囊腔,37℃孵育48h-72h,无菌收获尿囊液,再做红细胞凝集实验。结果显示:这2个亚型AIV感染MDCK细胞后,血凝价(HA)最高为27,表现为较低的红细胞凝集活性,高致病力禽流感病毒(HPAIV)红细胞凝集活性较低致病力禽流感病毒(LPAIV)出现的要早一些;上述2个亚型AIV的MDCK培养上清接种鸡胚48-72h后,HA较高,在25.5-210之间,而且HPAIV-A/Goose/Guang-dong/1/96高于LPAIV-A/Turkey/England/N28/73 。这2株AIV均可致MDCK细胞发生病变,但病变程度和病变出现的时间不同,A/Goose/Guangdong1/96[H5N1]憾染MDCK细胞后3d可见明显病变,A/Turkey/England/N28/73[H5N2]感染MDCK细胞后4-5d可见明显病变;2个亚型不同浓度(10-2-10-7)AIV的间接免疫荧光结果均为阳性。以上结果表明HPAIV和LPAIV可致MDCK细胞病变,但红细胞凝集活性较低,接种鸡胚后红细胞凝集活性显著提高。

关键词：禽流感病毒 MDCK细胞红细胞凝集活性间接免疫荧光

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具有HI活性的抗H7亚型流感病毒特异性单克隆抗体的研制

具有HI活性的抗H7亚型流感病毒特异性单克隆抗体的研制

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会

作者：邓国华张立春李雁冰王桂芹曲站红于康震陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生生物技术国家重点实验室中国畜牧兽医总站中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生生物技术国家重点实验室

以H7N2亚型禽流感病毒分离株A/Chicken/Hebei/01/03(H7N2)(HB103)作为免疫原,浓缩纯化后免疫BALB/C小鼠,三次免疫后,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,融合阳性细胞用血凝抑制(HI)方法进行检测,阳性细胞株经三代克隆纯化后,获得2株能稳... 详细信息

以H7N2亚型禽流感病毒分离株A/Chicken/Hebei/01/03(H7N2)(HB103)作为免疫原,浓缩纯化后免疫BALB/C小鼠,三次免疫后,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,融合阳性细胞用血凝抑制(HI)方法进行检测,阳性细胞株经三代克隆纯化后,获得2株能稳定分泌抗血凝素特异性Hl单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为4CB、BBA。两株杂交瘤细胞株产生的小鼠腹水和细胞培养液上清的HI滴度分别是213、211和27、28。与其他具有血凝活性的禽类病毒以及其他14个HA亚型的禽流感病毒的交叉HI试验表明:这两三株单抗具有良好的禽流感病毒亚型特异性;与其他H7亚型流感病毒分离株的HI试验和中和试验证实这三株单抗具有良好的交叉性和中和活性。该亚型特异性单克隆抗体的研制成功为H7亚型禽流感病毒的疫情病原学快速诊断提供了物质基础。

关键词：禽流感 HI 单克隆抗体

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H5亚型禽流感DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA5对高致病力禽流感病毒攻击的完全保护

H5亚型禽流感DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA5对高致病力禽流感病毒攻击...

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会

作者：姜永萍张洪波李呈军步志高邓国华陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室

对HA基因密码子及表达载体优化的H5亚型禽流感DNA疫苗pCAGGoptiHA5的免疫效果进行了研究。pCAGGoptiHA5分别以100μg和10μg剂量一次或加强免疫3周龄SPF鸡,单次免疫后4周以同样剂量和途径加强免疫,单次免疫后4周、加强免疫后2周后分别用... 详细信息

对HA基因密码子及表达载体优化的H5亚型禽流感DNA疫苗pCAGGoptiHA5的免疫效果进行了研究。pCAGGoptiHA5分别以100μg和10μg剂量一次或加强免疫3周龄SPF鸡,单次免疫后4周以同样剂量和途径加强免疫,单次免疫后4周、加强免疫后2周后分别用100LD50的HPAIV A/Goose/GuangDong,1/96(H5N1)[Gs/GD/1/96(H5N1)]鼻腔途径进行攻击,观察发病与死亡情况,分别于攻毒后第3、5、7 d采集喉头及泄殖腔拭子进行病毒分离、滴定检测排毒情况,同时检测免疫后、攻毒前及攻毒后血清HI抗体、NT抗体以及AGP抗体的动态变化。结果,100μg pCAGGop-tiHA5单次免疫、100μg pCAGGoptiHA5加强免疫以及10μgpCAGGoptiHA5加强免疫均可对免疫鸡形成100%完全保护(不发病、不致死、不排毒),10μg剂量pCAGGoptiHA5单次免疫可对免疫鸡形成100%的保护(不发病、不致死),结果表明,pCAGGoptiHA5作为免疫效果良好、成本低廉的优化DNA疫苗,有望成为预防H5亚型高致病力禽流感的高效、安全新型基因工程疫苗。

关键词：禽流感 H5亚型 DNA疫苗 pCAGGoptiHA5 完全保护

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初步构建AIV、NDV、IBDV和IBV同步检测DNA芯片

初步构建AIV、NDV、IBDV和IBV同步检测DNA芯片

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第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会

作者：王秀荣石锐李冬梅刘丽玲孙凯孔宪刚包红梅陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室

用AIV、NDV、IBDV和IBV质粒和引物扩增得到8个PCR产物,处理后作为捕捉DNA点在氨基包被的载玻片上,作为待检芯片。待检样品为四种病原的鸡胚培养物,提取病毒RNA后,利用一步法多重RT-PCR,在反应体系中加入8对特异性引物和荧光素Cy5-dUTP,... 详细信息

用AIV、NDV、IBDV和IBV质粒和引物扩增得到8个PCR产物,处理后作为捕捉DNA点在氨基包被的载玻片上,作为待检芯片。待检样品为四种病原的鸡胚培养物,提取病毒RNA后,利用一步法多重RT-PCR,在反应体系中加入8对特异性引物和荧光素Cy5-dUTP,获得荧光标记的混合PCR产物,处理后与制备好的检测芯片杂交,扫描待检样品与芯片上捕捉探针的结合位点,杂交信号与预期设想一致。结果显示,通过一次杂交可确定待检样品中是否含有AIV、IBDV、IBV、NDV。

关键词： AIV NDV IBDV IBV DNA芯片同步检测多重RT-PCR

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real-time RT-PCR检测禽流感病毒的初步探讨

real-time RT-PCR检测禽流感病毒的初步探讨

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第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会

作者：刘丽玲王秀荣陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室

用4个不同亚型的禽流感病毒(AIV)感染Madin-Darby canine kidney(MDCK)细胞,收集感染后6h,12h,24h,48h,72h的病毒,提取总RNA,利用Rotor Gene3000实时定量PCR仪对AIV型特异性基因-基质蛋白(M)基因的表达进行检测,试图建立快速检测A型流... 详细信息

用4个不同亚型的禽流感病毒(AIV)感染Madin-Darby canine kidney(MDCK)细胞,收集感染后6h,12h,24h,48h,72h的病毒,提取总RNA,利用Rotor Gene3000实时定量PCR仪对AIV型特异性基因-基质蛋白(M)基因的表达进行检测,试图建立快速检测A型流感病毒的real-time RT-PCR方法。结果表明:病毒感染MDCK细胞后6h,12h,24h表达水平很低,而48h和72h表达水平较高;我们建立的M基因的RRT-PCR方法能检测到感染MDCK细胞后6h的这4种流感病毒,比常规RT-PCR方法(只能检测到24h后)更灵敏,而且更廉价。

关键词：禽流感病毒 RT-PCR检测特异性基因基质蛋白基因 MDCK细胞

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禽流感病毒HA基因DNA疫苗诱导SPF鸡 CD8+T淋巴细胞的动态变化

禽流感病毒HA基因DNA疫苗诱导SPF鸡 CD8+T淋巴细胞的动态变化

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中国畜牧兽医学会生物制品学分会第十次学术研讨会

作者：张洪波姜永萍王全英赵有淑张平静左青山陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

用表达禽流感血凝素HA抗原的重组质粒pCAGGoptiHA5100μg免疫SPF鸡,用流式细胞仪检测鸡体内CD8+T细胞的动态变化.在一次免疫后,免疫组外周血中CD8+T淋巴细胞的数目逐渐上升,并于第三周达到峰值,CD8+T淋巴细胞的数量在攻毒后第三天迅速上... 详细信息

用表达禽流感血凝素HA抗原的重组质粒pCAGGoptiHA5100μg免疫SPF鸡,用流式细胞仪检测鸡体内CD8+T细胞的动态变化.在一次免疫后,免疫组外周血中CD8+T淋巴细胞的数目逐渐上升,并于第三周达到峰值,CD8+T淋巴细胞的数量在攻毒后第三天迅速上升,在攻毒后的一周内维持在一个较高的水平,并于第二周下降到一个较低的水平.在两次免疫后,SPF鸡体内CD8+T细胞数量上升速率明显高于初免时上升速率并于第二次免疫后两周达到一个峰值,攻毒后,两次免疫的SPF鸡外周血中CD8+T淋巴细胞数量略有上升,但上升幅度不大,两周时检测发现其下降幅度明显低于一次免疫组.而阴性对照组SPF鸡外周血中CD8+T淋巴细胞的数目则无明显变化,但在攻毒后其外周血中CD8+T淋巴细胞数量也呈上升趋势,但未达到免疫组的水平,并且在一周内全部死亡.结果表明,pCAGGoptiHA5DNA疫苗质粒可诱导有效的细胞免疫应答.

关键词：血凝素HA抗原 DNA疫苗 T淋巴细胞禽流感病毒免疫接种动态变化

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H7亚型禽流感DNA疫苗免疫保护效力研究

H7亚型禽流感DNA疫苗免疫保护效力研究

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第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会

作者：姜永萍张洪波张平静王全英于康震田国斌陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室农业部畜牧兽医总站

将表达密码子优化的H7亚型HA基因的DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA7的免疫保护效力进行了评估。首先以100μg、50μg和10μg剂量一次免疫3周龄SPF鸡,然后以100μg、50μg和10μg剂量间隔3周加强免疫3周龄SPF鸡,一次免疫后4周、加强免疫后2周用1... 详细信息

将表达密码子优化的H7亚型HA基因的DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA7的免疫保护效力进行了评估。首先以100μg、50μg和10μg剂量一次免疫3周龄SPF鸡,然后以100μg、50μg和10μg剂量间隔3周加强免疫3周龄SPF鸡,一次免疫后4周、加强免疫后2周用100LD50的HPAIV A/FPV/Rostock/34(H7N1)[RK/34(H7N1)]鼻腔途径进行攻击,观察发病与死亡情况,分别于攻毒后第3、5、7采集喉头及泄殖腔拭子进行病毒分离、滴定检测排毒情况,同时检测免疫后、攻毒前及攻毒后血清HI抗体、AGP抗体的动态变化。结果,pCAGGoptiHA7一次免疫后,100μg、50μg和100μg剂量均可对免疫鸡形成90%的死亡保护;pCAGGoptiHA7加强免疫后, 100μg和50μg剂量可对免疫鸡形成100%完全保护(不发病、不致死、不排毒),而10μg剂量则可对免疫鸡形成100%的保护(不发病、不致死),但不能完全阻止排毒。结果表明,H7亚型DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA7具有良好的免疫保护性,有望成为预防H7亚型高致病力禽流感的物质技术储备。

关键词：禽流感 H7亚型 DNA疫苗保护效力

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