检索结果-内蒙古大学图书馆

中国家禽 2015年第1期37卷 1-4页

作者：邓小芸祁小乐李凯胡峰高玉龙高宏雷王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江职业学院黑龙江哈尔滨150111 江苏省动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心江苏扬州225009

禽网状内皮组织增生病(RE)是危害养禽业的一种重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。近年来,禽网状内皮组织增生病病毒(REV)感染范围不断扩大,已证明野鸟也能够携带该病毒。免疫抑制、混合感染、基因整合使得该病的防控形势日趋严峻。目前,生... 详细信息

禽网状内皮组织增生病(RE)是危害养禽业的一种重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。近年来,禽网状内皮组织增生病病毒(REV)感染范围不断扩大,已证明野鸟也能够携带该病毒。免疫抑制、混合感染、基因整合使得该病的防控形势日趋严峻。目前,生物制品的污染已经不是该病传播的主要原因,REV已经从早期的种源性病毒演变成了在自然界广泛存在的病原。通过疫苗免疫将该病控制到尽可能低的水平,进而进行REV的种群净化,是防控该病的科学策略。

关键词：禽网状内皮组织增生病流行免疫抑制混合感染亚单位疫苗

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肠炎沙门氏菌三种主要毒力岛基因缺失株的构建及其免疫效力研究

肠炎沙门氏菌三种主要毒力岛基因缺失株的构建及其免疫效力研究

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中国免疫学会第十届全国免疫学学术大会

作者：吕雪莲周薇刘松艳曹俊张童利王曼宇刘思国于申业中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院

目的：沙门氏菌病属于重要的食源性致病菌之一，经常通过污染的水和食物引起人类疾病。沙门氏菌的致病性与其毒力岛基因密切相关。因此，构建沙门氏菌单个或多个毒力岛的基因缺失株，并评估这些毒力岛对沙门氏菌致病性的影响以及在鸡体... 详细信息

目的：沙门氏菌病属于重要的食源性致病菌之一，经常通过污染的水和食物引起人类疾病。沙门氏菌的致病性与其毒力岛基因密切相关。因此，构建沙门氏菌单个或多个毒力岛的基因缺失株，并评估这些毒力岛对沙门氏菌致病性的影响以及在鸡体内诱导免疫应答变化是非常重要的。

关键词：肠炎沙门氏菌毒力岛免疫效力活疫苗载体

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北里乳杆菌97-1产细菌素97-1的抑菌活性及生物特性的研究

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中国预防兽医学报 2015年第12期37卷 934-937页

作者：张旺刘琳琳王云峰王宏磊祁小乐高玉龙王永强高宏雷李凯刘长军张艳萍卢彤岩何高明王笑梅崔红玉石河子大学动物科技学院新疆石河子832002 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽免疫抑制病创新团队黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨动物生物制品国家工程研究中心有限公司黑龙江哈尔滨150028 中国水产科学研究院黑龙江水产研究所黑龙江哈尔滨150070

为鉴定北里乳杆菌97-1(*** 97-1)所产细菌素的抑菌活性及生物特性,本研究利用菌体吸附法在北里乳杆菌97-1厌氧静置培养后的上清中初步提取细菌素97-1,其抗菌活性在培养稳定期后达到最高值6 400(AU/m L),经试验显示该细菌素能够被大多数... 详细信息

为鉴定北里乳杆菌97-1(*** 97-1)所产细菌素的抑菌活性及生物特性,本研究利用菌体吸附法在北里乳杆菌97-1厌氧静置培养后的上清中初步提取细菌素97-1,其抗菌活性在培养稳定期后达到最高值6 400(AU/m L),经试验显示该细菌素能够被大多数蛋白酶降解,但耐受过氧化氢酶的处理;进一步研究表明其细菌素对单核细胞增生李斯特菌的生长具有明显抑制作用,同时可以抑制多种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌,具有广谱抗菌活性;温度和酸碱耐受试验表明该细菌素对高温、强酸和强碱具有高度耐受性。本研究对细菌素97-1的抑菌活性及生物特性的鉴定,为微生态制剂的研制和开发提供了良好的候选资源。

关键词：细菌素抑菌活性北里乳杆菌

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猪传染性胃肠炎病毒NSP8蛋白单克隆抗体的制备及抗原表位的初步鉴定

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中国畜牧兽医 2015年第2期42卷 358-364页

作者：董慧张鑫陈建飞时洪艳石达常铁城谷凤丽徐天王智琴刘明春冯力沈阳农业大学畜牧兽医学院沈阳110161 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学动物科技学院大庆163319 东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030 首都医科大学基础医学院北京100069

为鉴定猪传染性胃肠炎病毒(porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV)NSP8蛋白的抗原表位,本研究对GST-NSP8重组蛋白进行了原核表达,并用纯化后的重组蛋白免疫6周龄BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾脏,采用常规杂交瘤细胞融合方法,经... 详细信息

为鉴定猪传染性胃肠炎病毒(porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV)NSP8蛋白的抗原表位,本研究对GST-NSP8重组蛋白进行了原核表达,并用纯化后的重组蛋白免疫6周龄BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾脏,采用常规杂交瘤细胞融合方法,经3次亚克隆后制备了1株稳定分泌抗NSP8蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株。分泌的单克隆抗体亚类鉴定其重链为IgG1型,轻链为κ链;杂交瘤细胞培养上清的效价为1∶3 200。Western blotting试验结果表明该单克隆抗体能识别原核及真核表达的NSP8重组蛋白。利用截短表达的方法对NSP8蛋白进行抗原表位的鉴定,初步确定了单克隆抗体针对的抗原表位序列为31SPQILKQLTKAFNIAKSDFEREASV55。本研究制备的单克隆抗体及对抗原表位的鉴定,为TGEV NSP8蛋白相关功能的研究奠定了基础。

关键词：猪传染性胃肠炎病毒 NSP8基因单克隆抗体抗原表位

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HBK-SPF鸭MHCI区域微卫星标记分析

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实验动物科学 2015年第3期32卷 6-9页

作者：韩凌霞武永淑吴少莲彭蔚宇王兴童韩建林陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物研究室兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业部畜禽遗传资源与利用重点开放实验室北京100193 中农威特生物科技股份有限公司兰州730046

禽主要组织相容性复合体是一组紧密连锁高度多态的基因群,与免疫反应或敏感性密切相关,鸭MHC I区域全长36.8 kb,由TAP1、TAP2和5个MHC I拷贝基因(UAA-UEA)组成。HBK-SPF鸭是中国农业科学院哈尔滨兽医研究所培育的无特定病原体种鸭,分为B... 详细信息

禽主要组织相容性复合体是一组紧密连锁高度多态的基因群,与免疫反应或敏感性密切相关,鸭MHC I区域全长36.8 kb,由TAP1、TAP2和5个MHC I拷贝基因(UAA-UEA)组成。HBK-SPF鸭是中国农业科学院哈尔滨兽医研究所培育的无特定病原体种鸭,分为B和Q 2个品系,已封闭繁育了7个世代。本文在鸭MHC I区域筛选了4个微卫星位点,通过单链构象多态性分析和聚合酶链式反应直接测序,发现A位点具有多态性,为(GT)n的重复结构,第6代HBK-B和HBK-Q的31个个体和第7代的140个个体进行聚合酶链式反应,结果直接测序,在重复结构之前的108bp中,发现了4种纯合单倍型和6种杂合单倍型;B位点未得到目的产物;C位点位于MHC I拷贝基因UDA和UEA之间,扩增结果与UAA和UBA之间序列高度同源,无法判断基因型;D位点表现为单态,为(ATA)15的固定重复结构。本研究为进一步研究鸭MHC I基因结构和建立家系提供了依据。

关键词： HBK鸭主要组织相容性复合体经典I类分子无特定病原体微卫星标记

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猪传染性胃肠炎病毒NSP5蛋白单克隆抗体的制备及抗原表位鉴定

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中国预防兽医学报 2015年第3期37卷 220-224页

作者：董慧张鑫陈建飞时洪艳石达常铁城谷凤丽徐天王智琴冯力沈阳农业大学畜牧兽医学院辽宁沈阳110161 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 首都医科大学基础医学院北京100069

为制备猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)NSP5蛋白的单抗隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究以原核表达并纯化的重组NSP5蛋白(r NSP5-GST)免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,通过间接ELISA方法筛出一株稳定分泌抗TGEV NSP5蛋白... 详细信息

为制备猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)NSP5蛋白的单抗隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究以原核表达并纯化的重组NSP5蛋白(r NSP5-GST)免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,通过间接ELISA方法筛出一株稳定分泌抗TGEV NSP5蛋白的MAb杂交瘤细胞株(5C3)。MAb亚类鉴定结果显示其抗体亚类为Ig G1/κ链。杂交瘤细胞培养上清液和腹水的效价分别为1∶6 400和1∶105。Western blot鉴定表明该MAb能够识别原核及真核表达的NSP5重组蛋白。利用肽扫描法鉴定显示,该MAb识别的抗原表位为286EFTPTEVIR QMYGVN300。本研究制备的MAb及其抗原表位的鉴定,为TGEV NSP5蛋白结构和功能的研究奠定了基础。

关键词：猪传染性胃肠炎病毒 nsp5基因单克隆抗体抗原表位

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肠炎沙门氏菌三种主要毒力岛基因缺失株的构建及其免疫效力研究

肠炎沙门氏菌三种主要毒力岛基因缺失株的构建及其免疫效力研究

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第十届全国免疫学学术大会

作者：吕雪莲周薇刘松艳曹俊张童利王曼宇刘思国于申业中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院

目的 :沙门氏菌病属于重要的食源性致病菌之一,经常通过污染的水和食物引起人类疾病。沙门氏菌的致病性与其毒力岛基因密切相关。因此,构建沙门氏菌单个或多个毒力岛的基因缺失株,并评估这些毒力岛对沙门氏菌致病性的影响以及在鸡体内... 详细信息

目的 :沙门氏菌病属于重要的食源性致病菌之一,经常通过污染的水和食物引起人类疾病。沙门氏菌的致病性与其毒力岛基因密切相关。因此,构建沙门氏菌单个或多个毒力岛的基因缺失株,并评估这些毒力岛对沙门氏菌致病性的影响以及在鸡体内诱导免疫应答变化是非常重要的。方法 :本实验利用改进的Red同源重组系统成功构建SPI-1、SPI-2、SPI-3三种主要毒力岛的单缺失、双缺失及三缺失菌株。结果 :敲除SPI-1后的单缺失、双缺失和三缺失菌株的侵袭力均下降,而其他缺失菌株和野生菌株相比侵袭能力差别不大;所有缺失株对细胞的粘附力均显著低于野生菌株(P<0.001)。将上述毒力岛缺失株分别接种7日龄SPF鸡,评价缺失株的致病力、定殖能力以及对鸡只的免疫效力。结果表明,毒力岛缺失菌株可以在肝脏、脾脏和盲肠中定殖,但不会引起鸡只发病,且SM6ΔSPI-1-3在脾脏和肝脏中的定殖效率低于SM6,接种第8天即被机体迅速清除;毒力岛缺失菌株产生的抗体均处于较高水平;毒力岛缺失菌株免疫后机体CD4+T和CD8+T亚群的均有明显变化。免疫后检测血清中IL-4和IFN-γ的细胞因子水平也有上升趋势,并且病理学结果表明鸡只无明显的病理改变。结论 :毒力岛缺失菌株中SM6ΔSPI-1-3有较好的免疫效果及保护效率。三种主要毒力岛缺失菌株的成功构建为阐明肠炎沙门氏菌致病机制和研发安全有效的减毒活疫苗载体奠定了良好的基础。

关键词：肠炎沙门氏菌毒力岛免疫效力活疫苗载体

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猪源肠球菌新型非接合转移质粒携带lsa(E)基因

猪源肠球菌新型非接合转移质粒携带lsa(E)基因

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：张万江董志民王秋东华欣刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队吉林农业大学动物科学技术学院

【目的】获得携带lsa(E)基因肠球菌新型接合转移质粒pY13的全核酸序列,并分析lsa(E)基因在其他肠球菌中的遗传背景和传播方式。【方法】2013年从猪场分离到7猪lsa(E)阳性肠球菌菌(粪肠球菌n=5,屎肠球菌n=1,鸡肠球菌n=1),通过S1-PFGE、So... 详细信息

【目的】获得携带lsa(E)基因肠球菌新型接合转移质粒pY13的全核酸序列,并分析lsa(E)基因在其他肠球菌中的遗传背景和传播方式。【方法】2013年从猪场分离到7猪lsa(E)阳性肠球菌菌(粪肠球菌n=5,屎肠球菌n=1,鸡肠球菌n=1),通过S1-PFGE、Southem杂交、电击转化和重叠PCR等方法对lsa(E)基因的定位和基因环境进行分析;同时采用454 GS-FLX测序仪对pY13质粒进行序列全测定。【结果】最终获得了一个来自屎肠球菌全长为28489bp的pY13质粒。序列分析显示,pY13质粒携带一个新型的耐药簇,该耐药簇包含lnu(B)、lsa(E)、spw、aadE、aphA3和两个拷贝的erm(B)基因。含有该耐药基因簇的质粒可介导林克酰胺类、大环内酯类、截断侧耳素、链阳菌素、壮观霉素和卡那霉素/新霉素等药物耐药。序列分析结果显示,在耐药基因簇的形成过程中插入元件ISEfa8和IS1256可能发挥了作用。另外,以pY13质粒为模板设计了9对重叠引物,对其他6株lsa(E)基因阳性菌进行PCR扩增,结果证实这6株菌携带的lsa(E)基因均位于pY13类似质粒上。【结论】首次获得了携带lsa(E)的肠球菌质粒pY13,虽然为非接合转移性质粒,但该类型的质粒仍然在多重耐药基因簇的传播中发挥了重要作用。

关键词：耐药基因肠球菌接合转移 lsa

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结核分枝杆菌Rv1400c多抗制备及反应原性分析

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经济动物学报 2015年第1期19卷 16-19+24页

作者：陶荣珊胡太超李金伟刘思国王全凯吉林农业大学动物科学技术学院北海绿瑞贸易有限责任公司东丰药业中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室吉林省中韩动物科学研究院

将pET28b-Rv1400c重组表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,筛选出阳性菌株并增菌培养后IPTG诱导表达,离心后沉淀用SKL变性溶解,用亲和层吸树脂纯化Rv1400c蛋白,通过SDS-PAGE和Western-blot分析目的蛋白表达与纯化情况;利用Rv1400c蛋白... 详细信息

将pET28b-Rv1400c重组表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,筛选出阳性菌株并增菌培养后IPTG诱导表达,离心后沉淀用SKL变性溶解,用亲和层吸树脂纯化Rv1400c蛋白,通过SDS-PAGE和Western-blot分析目的蛋白表达与纯化情况;利用Rv1400c蛋白免疫新西兰兔,制备多克隆抗体;Western-blot分析鹿结核阳性血清的反应情况。SDS-PAGE和Western-blot结果显示:Rv1400c以包涵体形式表达,蛋白分子质量为39 ku;目的蛋白免疫新西兰兔后,ELISA检测血清效价达到1∶51 200。纯化的Rv1400c重组抗原蛋白能与鹿的阳性血清发生体外结合反应。

关键词：结核分枝杆菌 Rv1400c 包涵体复性反应原性

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牛腺病毒3型六邻体蛋白的截短表达、单克隆抗体制备及初步应用

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中国预防兽医学报 2014年第6期36卷 475-478页

作者：严昊朱远茂史鸿飞王雪枝蔡红王姝马磊薛飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为制备牛腺病毒3型(BAV-3)的单克隆抗体(MAb),本研究采用原核表达系统截短表达了BAV-3六邻体蛋白(Hexon),并以纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,经细胞融合筛选出14株杂交瘤细胞株。Western blot与间接免疫荧光试验表明14株MAbs均具有良好... 详细信息

为制备牛腺病毒3型(BAV-3)的单克隆抗体(MAb),本研究采用原核表达系统截短表达了BAV-3六邻体蛋白(Hexon),并以纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,经细胞融合筛选出14株杂交瘤细胞株。Western blot与间接免疫荧光试验表明14株MAbs均具有良好的反应性。特异性试验表明这些MAbs与牛副流感病毒3型、牛病毒性腹泻病毒及牛传染性鼻气管炎病毒无交叉反应。免疫组化试验表明其中一株1F8亲和力最强,可以用于检测BAV-3。本研究为进一步鉴定BAV-3抗原表位及研发相应的诊断试剂奠定了基础。

关键词：牛腺病毒3型六邻体蛋白单克隆抗体特异性

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