检索结果-内蒙古大学图书馆

中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：刘慧芳刘思国王春来司微王聃杜艳芬赫明雷常月红中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室

本研究利用体内诱导抗原技术(IVIAT)对胸膜肺炎放线杆菌(APP)体内表达的基因进行了研究。.将收集到的5份感染了APP1的猪血清混合,分别吸附体外培养的APP1和大肠杆菌DE3的全菌及全菌

关键词：体内诱导抗原技术胸膜肺炎放线杆菌阳性克隆体内表达

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牛分枝杆菌Spoligotyping和VNTR-MIRU的基因分型研究

牛分枝杆菌Spoligotyping和VNTR-MIRU的基因分型研究

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：杜艳芬林靖凯刘思国王春来刘慧芳司微王聃赵海玲中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室细菌病研究室

为了探讨间隔区寡核苷酸分型(Spacer oligo-typing,Spiligotyping)和数目可变串联重复序列-结核分枝杆菌散在分布重复单元(Variable number tan-dem repeats-mycobacterial interspersed repetitive unit,

关键词：牛分枝杆菌 VNTR-MIRU Spoligotyping 基因分型

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胎儿弯杆菌表面蛋白(SapA)基因的分段表达及其免疫原性分析

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中国预防兽医学报 2008年第11期30卷 842-845页

作者：赵海玲刘思国刘慧芳王春来司微杜艳芬杨金国林靖凯中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古呼和浩特010018 吉林农业大学吉林长春130118 广西大学广西南宁530004

应用PCR方法扩增出胎儿弯杆菌表面蛋白基因(SapA)的2个基因片段SapA-N(1398bp)和SapA-C(1422bp),采用DNA重组技术,将2个基因片段分别连接于表达载体pET32a(+),并在大肠杆菌中诱导表达(rSapA-N和rSapA-C),用金属鳌合层析的方法纯化蛋白。... 详细信息

应用PCR方法扩增出胎儿弯杆菌表面蛋白基因(SapA)的2个基因片段SapA-N(1398bp)和SapA-C(1422bp),采用DNA重组技术,将2个基因片段分别连接于表达载体pET32a(+),并在大肠杆菌中诱导表达(rSapA-N和rSapA-C),用金属鳌合层析的方法纯化蛋白。以Western blot检测重组蛋白的免疫学活性,ELISA试验分析2种蛋白用于胎儿弯杆菌病血清学诊断的可能性。结果表明,以可溶形式表达的2部分蛋白分子量大小约66ku,与预期大小相符。纯化的蛋白均具有良好的免疫学活性,但蛋白rSapA-N比蛋白rSapA-C的免疫学活性高,rSapA-N具有良好的胎儿弯杆菌病血清学诊断的应用价值。

关键词：胎儿弯杆菌表面蛋白基因(SapA) 原核表达纯化 ELISA

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细菌ghost疫苗的研究进展

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畜牧兽医科技信息 2008年第5期24卷 17-18页

作者：常月红刘思国王春来王勇刘建东宫强邵美丽郭设平东北农业大学哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室哈尔滨150001

用死的病原微生物接种动物能使机体产生抵抗病原体的免疫反应。作为疫苗的制作原则，用死的传染性病原体替代活的病原体已经得到广泛应用。死疫苗易通过化学或物理方法灭活病原菌制得。完整的死菌苗与亚单位疫苗相比有一个优势，即向免... 详细信息

用死的病原微生物接种动物能使机体产生抵抗病原体的免疫反应。作为疫苗的制作原则，用死的传染性病原体替代活的病原体已经得到广泛应用。死疫苗易通过化学或物理方法灭活病原菌制得。完整的死菌苗与亚单位疫苗相比有一个优势，即向免疫系统提呈排列复杂的抗原决定簇。

关键词：死疫苗细菌微生物接种亚单位疫苗抗原决定簇病原体免疫反应物理方法

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口蹄疫病毒vp3-间接免疫荧光诊断方法的建立

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黑龙江八一农垦大学学报 2008年第2期20卷 55-58页

作者：王冰周国辉涂亚斌朴范泽于力黑龙江八一农垦大学动物科技学院大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室大动物病研究室哈尔滨150001

口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白VP3为保守区,各血清型间差异不大,因此以其为抗原建立一种快速、有效、操作简便的FMDV自然感染动物与疫苗免疫动物鉴别诊断方法。PCR扩增口蹄疫病毒结构蛋白VP3基因,克隆到杆状病毒表达系统转移载体pFastBacHT-... 详细信息

口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白VP3为保守区,各血清型间差异不大,因此以其为抗原建立一种快速、有效、操作简便的FMDV自然感染动物与疫苗免疫动物鉴别诊断方法。PCR扩增口蹄疫病毒结构蛋白VP3基因,克隆到杆状病毒表达系统转移载体pFastBacHT-A中,转座DH10感受态细胞,获得阳性克隆。提取基因组Bacmid,转染Sf9昆虫细胞,获得含口蹄疫病毒结构蛋白基因VP3基因的重组杆状病毒。以被检测血清为一抗,以FITC标记的兔抗牛IGg为二抗,通过反应条件的优化,建立间接免疫荧光检测方法,并检测血清44份,与ELISA方法符合率为90.9%。

关键词：口蹄疫病毒 VP3 鉴别诊断间接免疫荧光

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抗猪戊型肝炎病毒重组蛋白单克隆抗体的制备和鉴定

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动物医学进展 2008年第5期29卷 27-31页

作者：李丹丹张馨心赵立平相文华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

利用纯化的猪戊型肝炎病毒(HEV)ORF2-M1重组蛋白免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤细胞技术,获得了2株稳定分泌抗HEV ORF2-M1重组蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为BC4和2A10。经ELISA测定,2株杂交瘤细胞培养上清效价分别为1∶1.60×... 详细信息

利用纯化的猪戊型肝炎病毒(HEV)ORF2-M1重组蛋白免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤细胞技术,获得了2株稳定分泌抗HEV ORF2-M1重组蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为BC4和2A10。经ELISA测定,2株杂交瘤细胞培养上清效价分别为1∶1.60×103和1∶0.80×103,接种小鼠的腹水效价分别为1∶2.56×106和1∶1.28×106。2株单抗均能特异性识别重组ORF2-M1蛋白,但它们识别ORF2-M1蛋白的不同表位。间接免疫荧光试验证实,2株单抗具有良好的特异性,均能够识别HEV。

关键词：戊型肝炎病毒 ORF2-M1蛋白单克隆抗体猪

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信号标签诱导技术的研究进展

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畜牧兽医科技信息 2008年第9期24卷 5-7页

作者：赫明雷刘思国东北农业大学动物医学院哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室哈尔滨150001

Signature-tagged mutagenesis(STM)信号标签突变技术是一种有效的负向选择方法,主要用来鉴定能使病原体在宿主体内成功存活和复制的决定性基因。问世十几年以来,STM技术已经应用于31种细菌中,筛选了大量的转座插入突变体,有大约1700多... 详细信息

Signature-tagged mutagenesis(STM)信号标签突变技术是一种有效的负向选择方法,主要用来鉴定能使病原体在宿主体内成功存活和复制的决定性基因。问世十几年以来,STM技术已经应用于31种细菌中,筛选了大量的转座插入突变体,有大约1700多种细菌的基因得到认识和鉴定,包括毒力因子。由于在信号标签和鉴定方法的改进,使得STM技术有了很大发展,增加其多样性和灵活性,扩大了其应用范围。本文就STM技术中关键步骤的改进进行综述。

关键词：信号标签诱导转座突变负向筛选体系

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应用HEV ORF2蛋白McAb间接免疫荧光法检测HEV的研究

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动物医学进展 2008年第7期29卷 24-26页

应用抗猪戊型肝炎病毒(HEV)ORF2蛋白单克隆抗体和猪戊型肝炎病毒多克隆抗血清对感染猪戊型肝炎病毒的A549细胞培养物进行了间接免疫荧光检测病原的比较研究。单克隆抗体(McAb)进行的间接免疫荧光染色后,HEV感染细胞培养物中多数细胞在... 详细信息

应用抗猪戊型肝炎病毒(HEV)ORF2蛋白单克隆抗体和猪戊型肝炎病毒多克隆抗血清对感染猪戊型肝炎病毒的A549细胞培养物进行了间接免疫荧光检测病原的比较研究。单克隆抗体(McAb)进行的间接免疫荧光染色后,HEV感染细胞培养物中多数细胞在其胞浆和细胞膜上出现黄绿色荧光,未接种病毒的细胞培养物被伊文思蓝染成红色,未见有黄绿色荧光染色的细胞存在;多克隆抗血清对接种病毒的细胞培养物染色后,荧光强度高,呈现亮绿色,但未接种HEV的细胞培养物亦有一定的非特异性荧光反应。结果表明,利用所研制的抗HEVORF2蛋白McAb进行间接免疫荧光法对病原检测具有很高的特异性。

关键词：戊型肝炎病毒单克隆抗体间接免疫荧光试验

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利用体内诱导抗原技术检测胸膜肺炎放杆菌体内表达基因

利用体内诱导抗原技术检测胸膜肺炎放杆菌体内表达基因

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会

作者：刘慧芳刘思国王春来司微王聃杜艳芬赫明雷常月红中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨 150001

本研究利用体内诱导抗原技术(IVIAT)对胸膜肺炎放线杆菌体内表达的基因进行了研究.首先将我们收集到的5份感染了APP1的猪血清混合,分别吸附体外培养的.APP1和大肠杆菌DE3的全菌及全菌的裂解物,以充分去除体外表达蛋白的抗体,经过该吸附... 详细信息

本研究利用体内诱导抗原技术(IVIAT)对胸膜肺炎放线杆菌体内表达的基因进行了研究.首先将我们收集到的5份感染了APP1的猪血清混合,分别吸附体外培养的.APP1和大肠杆菌DE3的全菌及全菌的裂解物,以充分去除体外表达蛋白的抗体,经过该吸附过程后OD405分别由原来的0.927和0.239降低为0.196和0.078,表明混合血清得到了很好的吸附.同时,将APP1 基因组DNA以Bsp1431进行酶切,回收500bp-2000bp的片段,与经过BamHI酶切的ET30a/b/c进行连接,构建了APP1基因组质粒表达文库,库容量为2.0×105CFU,用吸附后的血清通过菌落原位免疫杂交来筛选该基因组表达文库,筛选了3000个菌落初步获得16个阳性克隆,通过再次筛选最后确定获得12个阳性克隆.本研究为抗病原菌药物、疫苗乃至新的诊断试剂的开发提供依据.

关键词：猪病胸膜肺炎放线杆菌体内诱导抗原技术菌落原位免疫杂交

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马流感病毒多重RT-PCR检测方法的建立

马流感病毒多重RT-PCR检测方法的建立

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：郭巍戴伶俐李雪峰闫妍王英原周建华相文华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室/慢病毒及马病课题组

根据马流感病毒的M基因和HA基因的保守序列,设计了两对引物,MF和MR为通用引物,可以检测出H3N8和H7N7亚型EIV,目的片段227bp,HF和HR为H3N8亚型特异性引物,目的片段595bp。利用这两对引物,通过对多重RT-PCR扩增条件的优化,建立了快速检测... 详细信息

根据马流感病毒的M基因和HA基因的保守序列,设计了两对引物,MF和MR为通用引物,可以检测出H3N8和H7N7亚型EIV,目的片段227bp,HF和HR为H3N8亚型特异性引物,目的片段595bp。利用这两对引物,通过对多重RT-PCR扩增条件的优化,建立了快速检测鉴别H3N8亚型EIV的多重RT-PCR技术。特异性和敏感性试验结果表明,该技术可以用于EIV的快速诊断和亚型鉴定。

关键词：马流感病毒 RT-PCR

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