检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：成丹赵建军李娜孙元周艳君朱妍田志军涂长春童光志仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室新疆农业大学动物医学院军事医学科学院军事兽医研究所

本研究应用猪瘟病毒(CSFV)及北美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)特异性引物和TaqMan水解探针,建立了一种敏感、特异、重复性好的快速检测CSFV和PRRSV的复合荧光定量RT-PCR方法。该方法可检测到3.2TCID50的猪瘟病毒和1.8TCID50的北... 详细信息

本研究应用猪瘟病毒(CSFV)及北美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)特异性引物和TaqMan水解探针,建立了一种敏感、特异、重复性好的快速检测CSFV和PRRSV的复合荧光定量RT-PCR方法。该方法可检测到3.2TCID50的猪瘟病毒和1.8TCID50的北美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒,比常规PCR方法敏感性高50倍以上。用复合荧光定量RT-PCR方法对155份现地样品进行检测,73份为CSFV阳性,16份为PRRSV阳性,与常规RT-PCR的符合率高达99.4%。该复合荧光定量RT-PCR方法敏感、特异、重复性好。

关键词：猪瘟病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒复合荧光定量RT-PCR

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禽分枝杆菌副结核亚种map0862和map2154c基因的串联重组表达及其活性

禽分枝杆菌副结核亚种map0862和map2154c基因的串联重组表达及其...

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：迟磊刘思国王春来宫强赵昆刘建东王勇云孟克刘慧芳赵福广中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室吉林农业大学生命科学学院

以禽分枝杆菌副结核亚种参考株P18基因组DNA为模版,PCR扩增出map0862和map2154c两个目的基因,采用重叠延伸剪接PCR技术(PCR-SOE)获得融合基因map0862-2154c,与原核表达载体pET32a(+)构建重组质粒pET0862-2154c,转化到

关键词：禽分枝杆菌副结核 map2154c map0862 重组表达

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2005年～2006年黑龙江省部分地区健康野鸟NDVF基因分子特征

2005年～2006年黑龙江省部分地区健康野鸟NDVF基因分子特征

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：刘怀然李东伟刘培欣刘胜旺华育平孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室东北林业大学野生动物资源学院

将2005年～2006年分离自黑龙江省扎龙自然保护区和哈尔滨周边地区健康野鸟体内的14株新城疫病毒(NDV),通过鸡胚成纤维细胞(CEF)克隆纯化后,每株病毒选择3～4个病毒克隆用于F基因部分核苷酸片段扩增、PCR产物序列测定,并进行进化分析。根... 详细信息

将2005年～2006年分离自黑龙江省扎龙自然保护区和哈尔滨周边地区健康野鸟体内的14株新城疫病毒(NDV),通过鸡胚成纤维细胞(CEF)克隆纯化后,每株病毒选择3～4个病毒克隆用于F基因部分核苷酸片段扩增、PCR产物序列测定,并进行进化分析。根据F基因47～420nt片段构建的分子进化树分析表明,可将其中13/14株野鸟NDV归于基因Ⅶd亚型,具有该型毒株典型的F蛋白裂解位点,属于我国目前流行的优势基因型毒株,与上世纪90年代分离自我国的鸡、水禽、珍禽基因Ⅶd亚型NDV核苷酸序列同源性在93%～97.3%之间。1/14株野鸟NDV属于基因Ⅲ型,与代表毒株Mutkeswar间核苷酸和氨基酸同源性均为100%。健康野鸟携带的Ⅶ亚型和基因Ⅲ型NDV,与目前优势NDV流行毒株和中等毒力疫苗毒株亲源关系相近,表明野鸟与家禽、水禽携带的NDV可以相互传染,对家禽构成巨大潜在威胁,提示加强野鸟NDV的监控及流行病学研究的紧迫性和重要性。

关键词：新城疫病毒黑龙江省健康野鸟基因型

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中国马传染性贫血病毒疫苗株FDDV穿膜蛋白TM的截短突变

中国马传染性贫血病毒疫苗株FDDV穿膜蛋白TM的截短突变

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：马建郭巍赵立平张萍郭亮王登峰孔宪刚沈荣显周建华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/ 大动物传染病研究室/ 慢病毒及马病课题组，黑龙江哈尔滨 150001 东北林业大学野生动物资源学院，黑龙江哈尔滨 150040 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/ 大动物传染病研究室/ 慢病毒及马病课题组，黑龙江哈尔滨 150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/ 大动物传染病研究室/ 慢病毒及马病课题组，黑龙江哈尔滨 150001 东北林业大学野生动物资源学院，黑龙江哈尔滨 150040

本研究中，我们使用PCR方法，对FDDV感染的FDD细胞中前病毒DNA的env进行了扩增，将PCR产物进行T-A克隆，挑取，阳性克隆用于序列分析。结果表明，，在囊膜蛋白穿膜亚单位TM对应的gp45基因区，病毒基因组env的第2230核苷酸位点出现G→A... 详细信息

本研究中，我们使用PCR方法，对FDDV感染的FDD细胞中前病毒DNA的env进行了扩增，将PCR产物进行T-A克隆，挑取，阳性克隆用于序列分析。结果表明，，在囊膜蛋白穿膜亚单位TM对应的gp45基因区，病毒基因组env的第2230核苷酸位点出现G→A的突变，gp45基因区提前出现了一个终止密码子TGA，即出现过早停止编码突变(Premature stop codon)，造成gp45基因对应的TM蛋白的截短。Western blot检测FDDV的裂解产物中有截短型TM的存在;用FDDV接种了3匹经琼脂免疫扩散检测确定为EIA阴性的马匹，在免疫后第15d和40d，分别对免疫马匹外周血单个核细胞中EIAV前病毒DNA和血浆中游离病毒粒子的基因组gp45核酸序列进行了分析。研究结果定性地说明gp45基因出现的过早停止编码突变并非致死性突变，其对应表达的胞浆区截短型TM蛋白可参与构成完整的病毒粒子。且这种病毒颗粒可以对马造成感染，并可在体内进行长时间复制。

关键词：马贫血病毒穿膜蛋白 PCR方法序列分析 gp45基因编码突变

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胎儿弯杆菌表面蛋白(SapA)基因的分段表达及其免疫原性分析

胎儿弯杆菌表面蛋白(SapA)基因的分段表达及其免疫原性分析

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第二届全国人畜共患病学术研讨会

作者：赵海玲刘思国刘慧芳王春来司微杜艳芬杨金国林靖凯中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室内蒙古农业大学动物科学与医学学院吉林农业大学广西大学

应用PCR方法扩增出胎儿弯杆菌表面蛋白基因(SapA)的2个基因片段SapA-N(1398 bp)和SapA-C(1422bp),采用DNA重组技术,将2个基因片段分别连于表达载体pET32a(+),并在大肠杆菌中诱导表达(rSapA-N和rSapa-C),用金属鳌合层析的方法纯化蛋白。W... 详细信息

应用PCR方法扩增出胎儿弯杆菌表面蛋白基因(SapA)的2个基因片段SapA-N(1398 bp)和SapA-C(1422bp),采用DNA重组技术,将2个基因片段分别连于表达载体pET32a(+),并在大肠杆菌中诱导表达(rSapA-N和rSapa-C),用金属鳌合层析的方法纯化蛋白。Western blot分析了重组蛋白的免疫学活性,ELISA试验探讨了2种蛋白用于胎儿弯杆菌病血清学诊断的可能性。结果表明,以可溶形式表达的2部分蛋白分子量大小约66Ku,与预计大小相符。纯化的蛋白均具有良好的免疫学活性,但蛋白rSapA-N比蛋白rSapA-C的免疫学活性高,rSapA-N具有良好的胎儿弯杆菌病血清学诊断的应用价值。

关键词：胎儿弯杆菌表面蛋白基因SapA 原核表达纯化 ELISA

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胎儿弯杆菌表面蛋白(SapA)基因的分段表达及其免疫原性分析

胎儿弯杆菌表面蛋白(SapA)基因的分段表达及其免疫原性分析

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：赵海玲刘思国刘慧芳王春来司微杜艳芬杨金国林靖凯中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室内蒙古农业大学动物科学与医学学院吉林农业大学广西大学

应用PCR方法扩增出胎儿弯杆菌表面蛋白基因(SapA)的2个基因片段SapA-N(1390bp)和SapA-C(1403bp),采用DNA重组技术,将2个基因片段分别连于表达载体pET32a(+),并在大肠杆菌中诱

关键词：胎儿弯杆菌免疫原性分析分段表达

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以胎儿弯杆菌重组表面蛋白(SapA)为抗原的间接ELISA方法及初步应用

以胎儿弯杆菌重组表面蛋白(SapA)为抗原的间接ELISA方法及初步应用

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第六届全国免疫学学术大会

作者：赵海玲刘思国杜艳芬刘慧芳王春来王勇司微杨金国林靖凯中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室内蒙古农业大学动物科学与医学学院吉林农业大学广西大学

胎儿弯杆菌对于人和动物是危害较大的病原微生物,开展胎儿弯杆菌研究具有重要的公共卫生学意义。本研究应用PCR方法扩增出胎儿弯杆菌表面蛋白基因(SapA)的2个基因片段SapA-N(1398bp)和SapA-C(1422bp),将2个基因片段分别连于表达载体pET3... 详细信息

胎儿弯杆菌对于人和动物是危害较大的病原微生物,开展胎儿弯杆菌研究具有重要的公共卫生学意义。本研究应用PCR方法扩增出胎儿弯杆菌表面蛋白基因(SapA)的2个基因片段SapA-N(1398bp)和SapA-C(1422bp),将2个基因片段分别连于表达载体pET32a(+),

关键词：胎儿弯杆菌 ELISA 初步应用

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鸡马立克氏病病毒在鸡淋巴细胞和羽髓中的复制动力学分析

鸡马立克氏病病毒在鸡淋巴细胞和羽髓中的复制动力学分析

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：李晶梅刘长军张艳萍施维松曲鹏刘爱玲闫福海中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室东北农业大学生命科学学院东北农业大学动物医学院

马立克氏病(MD)是由鸡马立克氏病病毒血清1型(MDV1)引起的鸡高度接触性淋巴细胞增生性疾病。MDV1在体内的复制状况与其致病性强弱及传播能力直接相关。本实验选择近年从国内不同地区MD暴发鸡场分离的6株MDV1强毒株、弱毒疫苗"814&q... 详细信息

马立克氏病(MD)是由鸡马立克氏病病毒血清1型(MDV1)引起的鸡高度接触性淋巴细胞增生性疾病。MDV1在体内的复制状况与其致病性强弱及传播能力直接相关。本实验选择近年从国内不同地区MD暴发鸡场分离的6株MDV1强毒株、弱毒疫苗"814"株和国内标准MDV1强毒J-1株,分别人工感染SPF鸡。采用双重实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法,检测感染后1d～28d病毒在淋巴细胞和羽髓中的复制状况。结果显示,接种1d后即可在淋巴细胞中检测到MDV1(102.6～105.2copies/106cells);在检测期间,淋巴细胞中病毒载量略有上升的趋势,总体呈现不规律变化,且变化并不明显。接种7d后羽髓中病毒载量开始显著增加,14d～21d达到峰值,超强毒株峰值处病毒载量可达到107copies/106cells,峰值期病毒载量是感染前期(1d～7d)的100～10000倍。强毒株在体内的病毒载量高于弱毒株,即复制能力高于弱毒株。研究表明,MDV1国内流行的毒株有增殖速度快,病毒载量高的新特点;MDV1致病性的高低与在其在体内的复制能力的高低正相关。

关键词：复制动力学马立克氏病病毒血清1型双重荧光定量PCR 分离株病毒载量

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免疫抑制对EIAV弱毒疫苗株在免疫马体内载量的影响

免疫抑制对EIAV弱毒疫苗株在免疫马体内载量的影响

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第六届全国免疫学学术大会

作者：马建姜成刚林跃智郭亮沈荣显邵一鸣周建华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室东北林业大学野生动物资源学院中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心

中国马传染性贫血(EIA)弱毒疫苗,是唯一能诱导保护性免疫并成功大规模应用的慢病毒疫苗。明确EIA弱毒疫苗致弱和诱导免疫保护的机制,将对慢病毒免疫研究和制定疫苗研制策略提供有益的参考。

关键词：弱毒疫苗株免疫抑制

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基于甲病毒复制子载体的猪瘟DNA疫苗的免疫效力评价

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生物工程学报 2007年第3期23卷 434-439页

作者：李娜赵建军赵和平孙元朱庆虎童光志仇华吉东北农业大学动物医学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室

此前已构建了基于SemlikiForest病毒(SemlikiForestvirus,SFV)复制子载体的表达猪瘟病毒(classicalswinefevervirus,CSFV)E2基因的新型猪瘟DNA疫苗pFV1CS-E2,通过动物试验证实,该疫苗以600μg/头的剂量免疫3次,免疫猪能抵抗致死剂量猪瘟强毒的攻击。为进一步评价该疫苗在较低的免疫剂量和较少的免疫次数情况下的免疫效力,将DNA疫苗pSFV1CS-E2和空载体pSFV1CS按100μg/头的剂量,接种猪只2次,然后用致死剂量的猪瘟强毒石门株进行攻击。结果表明,pSFV1CS-E2免疫组(n=5)所有免疫猪在加强免疫后均产生了猪瘟特异性中和抗体,攻毒后所有猪只抗体迅速升高,除了短期体温升高外,未出现任何其它临床症状,部分猪出现短期轻微病毒血症,个别猪的部分脏器出现轻微病变;而空载体免疫组(n=3)猪只在攻毒前一直没有检出特异性抗体,攻毒后全都出现典型的猪瘟临床症状和严重的病毒血症,有2头猪分别于攻毒后第10和11d死亡,剖检时可见典型猪瘟病理变化。结果表明,基于甲病毒复制子载体的猪瘟DNA疫苗有望成为具有开发价值的猪瘟标记疫苗。

关键词：猪瘟病毒甲病毒复制子载体 DNA疫苗

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